第3章消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全

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1、第第3章章 消毒灭菌与病原微生物消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全实验室生物安全 Disinfection and sterilization 第一节第一节 消毒灭菌的常用术语消毒灭菌的常用术语消毒消毒(disinfection)：杀死物体上或环境中的大部杀死物体上或环境中的大部分微生物，并不一定能杀死细菌芽胞或所有微生物分微生物，并不一定能杀死细菌芽胞或所有微生物的方法。用以消毒的药品称为消毒剂的方法。用以消毒的药品称为消毒剂(disinfectant)。灭菌灭菌(sterilization)：杀灭物体上所有微生物的方杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽胞在内的法。灭

2、菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物。全部病原微生物和非病原微生物。防腐防腐(antisepsis)：体外防止或抑制细菌生长繁殖体外防止或抑制细菌生长繁殖的方法，的方法，一般用于有机体。一般用于有机体。无菌无菌(asepsis)：不存在活菌，多是灭菌的结果。不存在活菌，多是灭菌的结果。无菌操作（无菌操作（aseptic technique）防止微生物进入防止微生物进入人体或其它物品的操作技术。人体或其它物品的操作技术。热力灭菌法热力灭菌法辐射杀菌法辐射杀菌法滤过除菌法滤过除菌法干燥与低温抑菌法干燥与低温抑菌法第二节第二节 物理消毒灭菌法物理消毒灭菌法v干热灭菌法干

3、热灭菌法v焚烧：废弃物、尸体焚烧：废弃物、尸体v灼烧：接种环、试管口灼烧：接种环、试管口v干烤（干烤（160170，2h）:玻璃器皿、瓷器玻璃器皿、瓷器v红外线红外线:医疗器械医疗器械一一.热力灭菌法热力灭菌法v湿热灭菌法湿热灭菌法v巴氏消毒法：巴氏消毒法：61.1-62.8 30min 或或71.715-30s,主要用于牛乳、酒类消毒。主要用于牛乳、酒类消毒。v煮沸法（煮沸法（100，5min）杀死繁殖体杀死繁殖体.食具、注食具、注射器等消毒射器等消毒.v流动蒸汽消毒法（流动蒸汽消毒法（100 15-30min）杀死繁殖杀死繁殖体体.v间歇蒸汽灭菌法（间歇蒸汽灭菌法（100 15-30min

4、，37 24h3天）天）v高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法n压力压力103.4 kPa（1.05kg/cm2）n温度温度121.3 n时间时间15-20 minn效果效果杀灭包括芽胞在内所有微生物杀灭包括芽胞在内所有微生物n应用应用所有耐高温、高压、耐湿的物品所有耐高温、高压、耐湿的物品 湿热灭菌法与干热灭菌法效果比较湿热灭菌法与干热灭菌法效果比较结论结论同样温度下，湿热比干热灭菌效果好同样温度下，湿热比干热灭菌效果好原因原因：蛋白含水量多时易凝固变性蛋白含水量多时易凝固变性湿热穿透力比干热大湿热穿透力比干热大湿热的蒸汽具有潜热湿热的蒸汽具有潜热n紫外线紫外线(Ultraviolet radiat

5、ion)其主要作用于其主要作用于DNA，使一条使一条DNA链上相邻的两链上相邻的两个胸腺嘧个胸腺嘧 啶共价结合形成二聚体，干扰啶共价结合形成二聚体，干扰DNA复复制与转录，导致细菌变异和死亡，并可杀灭病毒。制与转录，导致细菌变异和死亡，并可杀灭病毒。特点：特点：穿透力较弱穿透力较弱应用：应用：物体表面及空气消毒物体表面及空气消毒n电离辐射电离辐射 高速电子、高速电子、X射线、射线、射线射线n微波微波 二二.辐射杀菌法辐射杀菌法三三.滤过除菌法滤过除菌法用物理阻留的方法除去液体或空气中的细用物理阻留的方法除去液体或空气中的细菌菌,真菌。真菌。v常用滤器：薄膜滤器、玻璃滤器、石棉滤器常用滤器：薄膜

6、滤器、玻璃滤器、石棉滤器（Seitz）v特点：只能除去细菌，真菌特点：只能除去细菌，真菌,不能除去病毒、支不能除去病毒、支原体、原体、L型细菌。型细菌。v应用：用于一些不耐高温灭菌的血清、应用：用于一些不耐高温灭菌的血清、毒素、抗生素，以及空气的除菌。毒素、抗生素，以及空气的除菌。干燥法干燥法:保存食物保存食物 低温法：低温法：低温可使细菌的新陈代谢减慢，低温可使细菌的新陈代谢减慢，常用作保常用作保冷冻真空干燥法是目前保存菌种最好冷冻真空干燥法是目前保存菌种最好的方法的方法目前保存菌种的最好方法。五五.干燥低温抑菌法干燥低温抑菌法消毒机制：消毒机制：v引起菌体蛋白变性引起菌体蛋白变性、凝固凝固

7、:醇类醇类(皮肤皮肤,体温计体温计)v干扰细菌的酶系统干扰细菌的酶系统:重金属盐类重金属盐类v损伤细菌的细胞膜损伤细菌的细胞膜:表面活性剂表面活性剂消毒剂的种类：消毒剂的种类：酚类、醇类、重金属盐类、氧化酚类、醇类、重金属盐类、氧化剂、表面活性剂、烷化剂剂、表面活性剂、烷化剂(甲醛甲醛)。消毒剂的特点：消毒剂的特点：作用无选择性作用无选择性 对人体细胞有对人体细胞有损伤损伤 故只能外用故只能外用,不能内服。不能内服。消毒剂的应用：消毒剂的应用：病人排泄物与分泌物、皮肤、粘病人排泄物与分泌物、皮肤、粘膜、手、空气、饮水、器械、环境。膜、手、空气、饮水、器械、环境。二二 化学消毒灭菌法化学消毒灭菌

8、法v微生物的种类微生物的种类:敏感性由高到低依次为敏感性由高到低依次为:真菌、真菌、细菌繁殖体、有包膜病毒、无包膜病毒、分细菌繁殖体、有包膜病毒、无包膜病毒、分枝杆菌、细菌芽胞。枝杆菌、细菌芽胞。v微生物的物理状态微生物的物理状态:营养差营养差,抵抗力强抵抗力强;细菌细菌自稳定期开始自稳定期开始,抵抗力差抵抗力差.v微生物的数量微生物的数量:v消毒剂的性质、浓度与作用时间消毒剂的性质、浓度与作用时间(70%乙醇乙醇)v温度温度:v酸碱度酸碱度:v有机物有机物:脓汁、痰脓汁、痰第三节第三节 影响消毒灭菌效果的因素影响消毒灭菌效果的因素 一一、病原微生物的分类病原微生物的分类 根根据据传传染染性性

9、、感感染染后后对对个个体体或或者者群群体体的的危危害害程程度度，病原微生物分为四类：病原微生物分为四类：第第一一类类是是指指能能够够引引起起人人类类或或者者动动物物非非常常严严重重疾疾病病的的微微生生物物，以以及及我我国国尚尚未未发发现现或或者者已已经经宣宣布布消消灭灭的的微微生物。生物。天花病毒天花病毒,新疆出血热病毒新疆出血热病毒,埃博拉病毒等埃博拉病毒等.第第二二类类是是指指能能够够引引起起人人类类或或者者动动物物严严重重疾疾病病，比比较较容容易易直直接接或或者者间间接接在在人人与与人人、动动物物与与人人、动动物物与与动动物物间间传传播播的的微微生生物物。艾艾滋滋病病毒毒,霍霍乱乱弧弧菌

10、菌,结结核核杆杆菌菌等等.第四节第四节 病原微生物实验室生物安全病原微生物实验室生物安全 第第三三类类是是指指能能够够引引起起人人或或动动物物疾疾病病，但但一一般般情情况况下下对对人人、动动物物或或环环境境不不构构成成严严重重危危害害，传传播播风风险险有有限限，实实验验室室感感染染后后很很少少引引起起严严重重疾疾病病，并并且且具具备备有有效效治治疗疗和和预预防防措措施施的的微微生生物物。肝肝炎炎病病毒毒,流流感感病病毒毒,金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌,伤伤寒寒沙沙门门菌菌等等.第第四四类类是是指指在在通通常常情情况况下下不不会会引引起起人人或或动动物物疾病的微生物。如小鼠白血病病毒等。疾病的微

11、生物。如小鼠白血病病毒等。第第一一类类、第第二二类类统统称称为为高高致致病病性性病病原原微微生生物物 一一、二二级级实实验验室室不不得得从从事事高高致致病病性性病病原原微微生生物物实实验验活活动动。三三级级、四四级级实实验验室室从从事事高高致致病病性性病病原微生物实验活动。原微生物实验活动。二、病原微生物实验室的分级二、病原微生物实验室的分级从事高致病性病原微生物相关实验活动从事高致病性病原微生物相关实验活动应当有名以上的工作人员共同进行。应当有名以上的工作人员共同进行。在同一个实验室的同一个独立安全区域在同一个实验室的同一个独立安全区域内，只能同时从事一种高致病性病原微内，只能同时从事一种高致病性病原微生物的相关实验活动。应有健全安全保生物的相关实验活动。应有健全安全保卫制度卫制度Biosafetylevel4,personnelmustworkinspecialsuitswithairsuppliedviahoses.Suchworkisgenerallydoneinseparatebuildingswithextremesecurity.