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1、细 菌 内 毒 素 检 查（ 凝 胶 法 ） 细 菌 内 毒 素 检 查 法 凝 胶 法 方 法 分 类 浊 度 法 光 度 法 显 色 基 质 法 重 现 性 好方 法 特 性 能 定 量 能 控 制 药 物 的 增 强 /抑 制 干 扰 操 作 简 便 。 节 省 时 间 原 理 ：v利 用 鲎 血 液 中 的 变 性 细 胞 ， 经 裂 解 液 和 机械 方 式 促 使 细 胞 破 裂 而 提 取 到 的 一 种 细 胞 溶解 物 ， 能 与 极 微 量 的 细 菌 内 毒 素 形 成 特 异 凝胶 反 应 ， 反 应 的 速 度 和 凝 胶 的 坚 固 程 度 与 内毒 素 浓 度 有
2、 关 . 细 菌 内 毒 素 检 测 之 凝 胶 法v实 验 程 序v1、 试 验 准 备 ： 试 剂 、 仪 器 及 用 具v2、 内 毒 素 限 值 的 确 定v3、 确 定 最 大 有 效 稀 释 倍 数v4、 凝 胶 限 度 试 验v5、 结 果 判 定 要 求v1、 以 最 终 产 品 为 检 测 必 要（ 浓 度 超 过 0.5mg/ml）v2、 检 测 样 品 PH应 在 68之 间 ， 不 符 应 调 整 1、 试 验 准 备 ： 试 剂 、 仪 器 及 用 具仪 器 与 器 具 电 热 恒 温 水 浴 锅 、 定 时 钟 、 去 热 源 枪头 和 小 玻 璃 瓶 、 移 液
3、枪 、 试 管 架 、 剪 刀 、锡 箔 纸 。试 剂 细 菌 内 毒 素 工 作 标 准 品 、 细 菌 内 毒 素检 查 用 水 、 鲎 试 剂 。 2、 内 毒 素 限 值 的 确 定v L=K/M v式 中 L为 供 试 品 的 细 菌 内 毒 素 限 值 ， 一 般 以EU/ml、 EU/mg或 EU/U表 示 ； K为 人 每 千 克体 重 每 小 时 最 大 可 接 受 的 内 毒 素 剂 量 ， 以 EU/（ kgh） 表 示 ； M为 人 用 每 千 克 体 重 每 小 时的 最 大 供 试 品 剂 量 ， 以 ml/（ kgh） 、 mg/（ kgh） 或 U/（ kgh）
4、 表 示 。 一 般 由 供 试 品提 供 者 直 接 提 供 内 毒 素 限 值 如 1000EU。 3、 确 定 最 大 有 效 稀 释 倍 数v（ MVD） ： MVD=cL/ v 式 中 L为 供 试 品 的 细 菌 内 毒 素 限 值 ； c为 供 试品 溶 液 的 浓 度 ； 为 在 凝 胶 法 中 鲎 试 剂 的 标 示灵 敏 度 (EU/ml)。 3、 鲎 试 剂 灵 敏 度 复 核v 按 下 表 制 备 溶 液 A、 B、 C， 使 用 稀 释 倍 数 为 MVD的供 试 品 溶 液 来 制 备 溶 液 A， 按 鲎 试 剂 灵 敏 度 复 核 试验 项 下 操 作 。 B
5、C A A鲎 试 剂 200ul 100ul 100ul 100ul标 准 品 100ul供 试 品 100ul 100ul 6、 结 果 判 定v 将 制 备 好 的 试 剂 用 锡 箔 纸 包 裹 好 后 放 入 电 热 恒 温 水浴 锅 中 ， 37 恒 温 水 浴 60min后 观 察 结 果 （ 保 证 玻璃 瓶 中 溶 液 处 于 水 面 以 下 ， 并 防 止 水 进 入 瓶 中 ） 。若 阴 性 对 照 溶 液 B为 阴 性 ， 阳 性 对 照 溶 液 C为 阳 性 ，试 验 有 效 。v 若 溶 液 A的 两 个 平 行 管 均 为 阴 性 ， 判 定 供 试 品 符 合规
6、定 ； 若 溶 液 A的 两 个 平 行 管 均 为 阳 性 ， 判 定 供 试品 不 符 合 规 定 。 若 溶 液 A的 两 个 平 行 管 中 的 一 管 为阳 性 ， 另 一 管 为 阴 性 ， 需 进 行 复 试 ， 复 试 时 ， 溶 液A需 做 4支 平 行 管 ， 若 所 有 平 行 管 均 为 阴 性 ， 判 定 供试 品 符 合 规 定 ； 否 则 判 定 供 试 品 不 符 合 规 定 操 作 注 意 事 项试 验 前 准 备 ：1、 玻 璃 器 具 应 规 范 化 ， 便 于 除 热 原 、 计 量 准 确 、清 洗 操 作 方 便 。2、 用 于 内 毒 素 检 测
7、的 稀 释 试 管 最 好 用 玻 璃 试 管 ；塑 料 用 具 只 能 为 一 次 性 且 保 证 无 内 毒 素 。实 验 环 境 ： 最 好 在 洁 净 室 或 洁 净 工 作 台 内 进 行 ，保 证 环 境 温 度 、 湿 度 及 通 风 稳 定 。实 验 人 员 ： 戴 干 净 手 套 和 口 罩 。 v实 验 过 程 ：1、 内 毒 素 工 作 标 准 品 应 严 格 按 要 求 低 温 保 存 ；工 作 标 准 品 开 封 后 尽 快 使 用 且 应 一 次 性 用完 ， 不 再 保 存 。2、 每 一 步 稀 释 液 所 用 的 移 液 器 不 能 反 复 、 交叉 使 用
8、。3、 鲎 试 剂 复 溶 时 应 将 检 查 用 水 顺 着 瓶 壁 加 入 ，避 免 产 生 气 泡 。4、 操 作 时 间 的 长 短 。 环 境 温 度 变 化 都 会 影 响实 验 结 果 ， 故 操 作 应 尽 量 熟 练 、 快 速 。 5、 恒 温 器 的 温 度 变 化 应 1 ， 鲎 试 剂 与 样 品混 匀 后 应 立 即 移 入 水 浴 槽 ， 严 格 控 制 保 温时 间 在 60 2min， 保 温 期 间 不 得 移 动 试 管架 ， 桌 面 保 持 平 稳 ， 周 围 不 能 有 振 颤 因 素 。结 果 判 断 ： 恒 温 结 束 后 ， 取 出 试 管 或 反 应 瓶缓 缓 倒 转 180 ， 不 从 管 壁 脱 落 为 阳 性 ， 不能 保 持 完 整 即 使 有 部 分 脱 落 者 也 判 为 阴 性 。
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