唾液淀粉酶活性的测定

影响唾液淀粉酶活性的研究 摘要：讨论了不同条件下唾液淀粉酶的活性差异，实验结果表明, 影响唾液淀粉 酶活性的因素很多，必须在适宜的条件下，才能发挥最佳催化作 用.淀粉酶具有 高怎专一性「其活性受温度、P H值、激活剂及抑制剂、酶浓度 以及作用时间等多 种因素的影响；每个人产生唾液淀粉酶的量不同，活性强弱也有 差异。 关键词：淀粉酶；活性；温度；抑制剂；激活剂；专一性 2影响唾液淀粉酶的活性的因素 （一） 实验目的 观察淀粉在水解过程中遇碘后溶液颜色的变化。观察温度、pH、激活剂与 抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。 （二） 实验原理 人唾液中淀粉酶为a-淀粉酶，在唾液腺细胞中合成。在唾液淀粉酶的作用 下，淀粉水解，经过一系列被称为糊精的中间产物，最后生成麦芽糖和葡萄糖。 变化过程如下： 淀粉一紫色糊精一红色糊精一麦芽糖、葡萄糖 淀粉、紫色糊精、红色糊精遇碘后分别呈蓝色、紫色与红色、麦芽糖和葡萄 糖遇碘不变色。 淀粉与糊精无还原性，或还原性很弱，对班氏试剂呈阴性反应。麦芽糖与葡 萄糖是还原性糖，与班氏试剂共热后生成红棕色氧化亚铜的沉淀。 唾液淀粉酶的最适温度为37-40° C,最适pH为6.&偏离此最适环境时，酶 的活性减弱。 低浓度的C1-离子能增加淀粉酶的活性，是它的激活剂。CU2+等金属离子能 降低该酶的活性，是它的抑制剂。 （三） 器材及试剂 1、 器材：试管、酒精灯、烧杯、恒温水浴锅、量筒、冰浴、玻璃棒、试管 夹、白磁板、试管架、铁三脚架、唾液淀粉酶 2、 试剂：1%淀粉溶液、碘液、班氏试剂、0.4%HCl溶液、0.1%的乳酸溶 液、l%NaCl溶液、l%Ci】SO4溶液、0.1%淀粉溶液 （四） 操作步骤 1、 淀粉酶活性的检测：取一只试管，注入1%淀粉溶液5mL与稀释的唾液 0.5-2mLo混匀后插入1支玻璃棒，将试管连同玻璃棒置于37° C水浴中。不是 的用玻璃棒从试管中取出1滴溶液，滴加在白磁板上，随即滴加1滴碘液，观察 溶液呈现的颜色。此实验延续至溶液仅表现碘被稀释后的微黄色为止。记录淀粉 在水解过程中，遇碘后溶液颜色的变化。 向上面的剩余溶液中加2mL班氏试剂，放入沸水中加热10分钟左右，观察 现象 2、 pH对酶活性的影响：取4支试管，分别加入0.4%盐酸、0.1%乳酸、蒸 饰水与1%碳酸钠各2mL,再向以上四支试管中各加2111L1%淀粉溶液及2mL淀 粉酶试剂，在沸水浴中加热，根据生成红棕色沉淀的多少，说明淀粉水解的强弱。 3、 温度对酶活性的影响：取3支试管，各加3mLl%淀粉溶液；另取3支 试管，各加lmL淀粉酶液。将此6支试管分为3组，每组中盛淀粉溶液与淀粉 酶液的试管各1支，三组试管分别置于0° C、37° C与70° C的水浴中。5分 钟后，将各组中的淀粉溶液倒入淀粉酶液中，继续维持原温度条件5min后，立 即加2滴碘液，观察溶液颜色的变化。根据观察结果说明温度对 酶活性的影响。 4、 激活剂与抑制剂对酶活性的影响：取3支试管，按下表加入各种试剂。 混匀后，置于37° C水浴中的保温。从1号试管中用玻璃棒取出1滴溶液，置 于白磁板上用碘液检查淀粉的水解程度。待1号试管内的溶液遇碘不再变色后, 立即取出所有的试管，各加碘液2滴，观察溶液颜色的变化，并解释之。 管号 1 2 3 l%NaCl (niL) 1 — — l%CuSO4(niL) — 1 — 蒸水（mL） — — 1 淀粉酶液（mL） 1 1 1 0.1%淀粉溶液 （mL） 3 3 3 （五）、实验结果与讨论 1. 加入班氏试剂后 2. PH值对酶活性影响：1号深红色，2号为红棕色，3号为砖红色，4号为 偏蓝。因为PH=1时，超出了淀粉酶有效PH范围，使得酶完全失活，淀粉没有 被分解。2号是因为PH=5时，不是淀粉酶的最适范围。3号是因为PH = 7时, 为淀粉酶分解的最适PH,淀粉被酶迅速分解生成麦芽糖和葡萄糖。而4号则是 因为PH = 9超出了淀粉酶的适宜PH,活性受到或者是部分失活，使淀粉分解较 慢。 3. 温度对酶的影响：1号显紫红色，2号为淡黄色，3号为深蓝色。当温度为 0度时，蛋白质分子的热运动减慢，即酶分子的活性受到了抑制，使酶的活性降 低了，淀粉分解减慢，生成紫红色的糊精；2号处于37度，接近人体温度，酶 的活化性能较高，淀粉被分解成麦芽糖和葡萄糖就越快，所以是淡黄色，而当温度为70度时，由于酶是蛋白质，遇到高温时会失活，所以淀粉没有被分解。 4. 激活剂和抑制剂对酶的影响：3号作为对照实验组，显红棕色，1号显浅黄 色，2号显深蓝色。因为在1号溶液中，NaCl对酶的活性在增加作用，激活 了淀粉酶，淀粉酶迅速把淀粉分解成麦芽糖和葡萄糖，滴加碘液时，溶液显 浅黄色，而对照组显示红棕色，表明淀粉被分解成了糊精，在1号中，溶液 中的淀粉没有被分解遇碘变蓝，通过对比1和3号，2和3号，由颜色的变 化，判断淀粉水解程度为1 <3V2,说明了 NaCl具有激活作用，CuSO4具有抑 制作用。 结论： 酶催化特定化学反应的蛋白质、RNA或其复合体。是生物催化剂，能通过 降低化学反应的活化能加快反应速率，但不改变反应的平衡点。绝大多数酶的化 学本质是蛋白质。具有催化效率高、专一性强、作用条件温和等特点。 PH可以影响酶蛋白的结构、酶的活性部位的解离状态、辅酶的解离以及底 物分子的解离，从而影响酶与底物的结合以及对底物的催化效力。温度升高是通 过对酶结构破坏，从而抵消了酶促反应速率随温度升高而升高的趋势。我们可以 看出PH和温度都通过影响了酶的结构來影响酶促反应速率。抑制剂和激活剂也 均是通过影响酶的结构來影响酶的活性。 参考文献： [I] ]周锦兰，张开诚.实验化学[M].武汉:华中科技大学出版社,2006:310-311. [3] 许冰，原媛，赵文献.pH值对酶活性影响的实验观察[J]•临床合理用药杂 志,2010,3（10）:35-35. [4] 冯攸科.唾液淀粉酶活性的最适温度质疑[J].《中等医学教育》1996（03）. [5] 杨玉萍.儿种环境条件对唾液淀粉酶活性的影响[期刊论文卜新乡学院学报（自 然科学版）. [6] 陈电容.生物化学与生化药品[M].郑州：郑州大学出版社，2004： 28. [7] 尚渤程（云南省昆明市第一中学6S0031）黎一苇（云南大学生物化学与分子生 物学中心650091）《生物学教学》2009全（第34卷）第12期. [8] 石渊渊.生物化学实验指导[M].开封：河南大学出版社. [9] 张杰技术.一第1版一北京：北京大学医学出版社2006.12： 276、235、345、 李淑艳•医学化学实验. [10] 陈铁茹，王亚杰（讷河市中医院，黑龙江讷河161300 ）黑龙江医学. [II] 吴丽明.福建医药学校.福州350002海峡药学2003, 15 （2）.