《实验六植物组织中总糖和还原糖含量的测定DNS法》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验六植物组织中总糖和还原糖含量的测定DNS法（14页珍藏版）》请在装配图网上搜索。
1、实 验 六 、 植 物 组 织 中 总 糖 和还 原 性 糖 含 量 的 测 定 1、 实 验 目 的 掌 握 总 糖 和 还 原 糖 含 量 的 测 定 方 法 学 习 总 糖 和 还 原 糖 提 取 的 方 法 2、 实 验 重 点 和 难 点 利 用 3,5-二 硝 基 水 杨 酸 法 测 定 还 原 糖 含 量 的实 验 原 理 多 糖 在 酸 性 加 热 条 件 下 会 降 解 为 还 原 糖 3、 实 验 原 理3.1、 还 原 糖 的 概 念 指 含 有 游 离 的 半 缩 醛 （ 酮 ） 基 糖 。 单 糖 都 是 还 原糖 ； 某 些 二 糖 是 还 原 糖 （ 如 麦 芽
2、糖 、 乳 糖 等 ） ；多 糖 多 为 非 还 原 糖 。 葡 萄 糖 分 子 中 含 有 游 离 醛 基 ， 果 糖 分 子 中 含 有 游离 酮 基 ， 乳 糖 和 麦 芽 糖 分 子 中 含 有 游 离 的 醛 基 ，故 它 们 都 是 还 原 糖 。 3.2、 3,5-二 硝 基 水 杨 酸 比 色 法 总 糖 的 提 取 及 双 、 多 糖 的 酸 水 解 。 利 用 糖 的 溶 解度 不 同 ， 可 将 植 物 样 品 中 的 单 糖 、 双 糖 和 多 糖 分别 提 取 出 来 ， 对 没 有 还 原 性 的 双 糖 和 多 糖 ， 可 用酸 水 解 法 使 其 降 解 成 有
3、 还 原 性 的 单 糖 进 行 测 定 ，再 分 别 求 出 样 品 中 还 原 糖 和 总 糖 的 含 量 。 还 原 糖 在 碱 性 条 件 下 加 热 被 氧 化 成 糖 酸 及 其 它 产物 ， 3,5-二 硝 基 水 杨 酸 (黄 色 ） 则 被 还 原 为 棕 红 色的 3-氨 基 -5-硝 基 水 杨 酸 。 在 一 定 范 围 内 ， 还 原 糖的 量 与 棕 红 色 物 质 颜 色 的 深 浅 成 正 比 关 系 ， 利 用分 光 光 度 计 ， 在 540nm波 长 下 测 定 光 密 度 值 ， 查 对标 准 曲 线 并 计 算 ， 便 可 求 出 样 品 中 还 原
4、糖 和 总 糖的 含 量 。 由 于 多 糖 水 解 为 单 糖 时 ， 每 断 裂 一 个 糖 苷 键 需 加入 一 分 子 水 ， 所 以 在 计 算 多 糖 含 量 时 应 乘 以 0.9。 相 对 密 度 法折 光 法旋 光 法物 理 法3.3、 糖 含 量 测 定 方 法 化 学 法 还 原 糖 法碘 量 法比 色 法 直 接 滴 定 法 (改 良 的 兰 爱 农 法 ） 高 锰 酸 钾 法 萨 氏 法 3， 5二 硝 基 水 杨 酸 酚 硫 酸 法蒽 酮 法半 胱 氨 酸 咔 唑 法 纸 色 谱 薄 层 色 谱 G C H PLC 半 乳 糖 脱 氢 酶 测 半 乳 糖 、 乳 糖
5、 葡 萄 糖 氧 化 酶 测 葡 萄 糖 发 酵 法 测 不 可 发 酵 糖 重 量 法 测 果 胶 、 纤 维 素 、 膳 食 纤 维 素 色谱法 酶法 4、 操 作 步 骤4.1、 制 定 标 准 曲 线管 号 0 1 2 3 4 5标 准 葡 萄 糖 溶 液 /mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0蒸 馏 水 /mL 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0DNS试 剂 /mL 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0沸 水 浴 中 准 确 煮 沸 5min， 取 出 ， 用 自 来 水 冷 却 至 室 温 蒸 馏 水 /mL 9.0 9.0 9.0 9.0 9.0 9
6、.0葡 萄 糖 浓 度 /mg/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0A540 4.2、 植 物 组 织 中 总 糖 与 还 原 糖 溶 液 的 获 取(1)还 原 糖 ： 30mL水冲研钵2-3次1g土 豆 研 成 匀 浆3mL水 三 角 瓶 中50 水 浴 0.5h冷 却 定 到100mL混 匀 ,过 滤取 滤 液 作 为 还原 糖 提 取 液(2)总 糖：1g土 豆 研 成 匀 浆3mL水 三 角 瓶 中沸 水 浴 0.5h冷 却 ,用 NaOH中 和 ,加 水 定 容到 100mL混 匀 ,过 滤取 滤 液 作 为总 糖 提 取 液 12mL水 冲 研钵 2-3次 10mL6
7、MHClI2-KI检 测 4.3、 用 3,5-二 硝 基 水 杨 酸 法 测 还 原 糖 、总 糖 含 量管 号 空 白 对 照 还 原 糖样 液 管 总 糖 样 液 管样 液 /mL 0 1.0 1.0水 1.0 0 0DNS试 剂 /mL 2.0 2.0 2.0沸 水 浴 中 准 确 煮 沸 5min， 取 出 ， 用 自 来 水 冷 却 至 室 温 蒸 馏 水 /mL 9.0 9.0 9.0A540 5、 数 据 处 理 与 问 题 5.1、 计 算 浓 度 5.2、 本 实 验 的 注 意 事 项 ？ 预 习 实 验 102.1酵母醇脱氢酶的提纯 %1001 10100 3 还原糖浓度还原糖含量%1001 9.010100 3 总糖浓度总糖含量 3,5-二 硝 基 水 杨 酸 法 标 准 曲 线
实验六植物组织中总糖和还原糖含量的测定DNS法
