LC1WatersLC培训教材定性及定量技术

《LC1WatersLC培训教材定性及定量技术》由会员分享，可在线阅读，更多相关《LC1WatersLC培训教材定性及定量技术（30页珍藏版）》请在装配图网上搜索。

1、 液相色谱的定性及定量技术 Waters LC School 培训教材 色谱峰定性 鉴别每个色谱峰 通过比较保留值 (通常是保留时间 )的方法， 找到各色谱峰所对应的组份 大多数情况下用比较保留时间来定性 即所谓： 保留时间相同，可能是同样的组份 保留时间不同，肯定不是同样的组份 用保留时间定性 用“标样”的保留值定出被测组份的位置 0 . 0 0 0 . 0 5 0 . 1 0 0 . 1 5 0 . 2 0 0 . 2 5 0 . 3 0 0 . 3 5 0 . 4 0 0 . 0 0 0 . 5 0 1 . 0 0 1 . 5 0 2 . 0 0 2 . 5 0 3 . 0 0 3 .

2、5 0 4 . 0 0 4 . 5 0 5 . 0 0 5 . 5 0 6 . 0 0 6 . 5 0 7 . 0 0 A U M in u t e s U r a c il E t h y lp a r a b e n P r o p y lp a r a b e n 进一步的确认 标准加入 同时用其他方法 其他色谱方法（改变机理，如：用不同的色 谱柱） 其他检测器 PDA，光谱图比较、谱库检索 MS，质谱图解析、谱库检索 其他仪器方法 标准加入法举例 废水样品中五氯苯（ PCP）的分析 梯度曲线 梯度曲线 PCP 4 ppm 3 ppm 2 ppm 1 ppm 峰一致性的确认 确认色谱峰的

3、纯度 保证每个色谱峰下只有一个被测的组份 检查是否有共流出的物质（杂质）干扰 色谱峰纯度确认的方法 用光电二极管矩阵检测器比较光谱图 峰纯度鉴定，双波长 Ratio 996的纯度角理论 用二极管矩阵检测器比较光谱图 苯的色谱及光谱图（ Index） 2 4 0 . 0 0 2 6 0 . 0 0 2 8 0 . 0 0 0 . 0 0 0 . 1 0 0 . 2 0 0 . 3 0 0 . 4 0 0 . 4 0 0 . 8 0 1 . 2 0 1 . 6 0 2 . 0 0 2 . 4 0 2 . 8 0 996的纯度角理论 996的纯度角理论可快速得到纯度结果 0.00 10.00 20.

4、00 30.00 40.00 50.00 60.00 角度 2.40 2.50 2.60 2.70 时间(分钟) 不纯物 吸光度 纯度角 噪声角 基线 定量分析的具体内容 确定样品的类型，主要成分 /痕量成分 使分析条件的分离度（ R）大于： 1.5 色谱峰的定性，峰一致性测定 检测限及定量限：确定灵敏度及线性范围 用标样建立标准曲线 检查方法的准确度及精确度 用标样定期检查方法 痕量分析 如信 /噪比不够，定量的精确度会受影响，因此要： 分析前浓缩样品 选择高灵敏度检测器 用衍生法 使色谱体系最优化 使用短的微径柱（减少样品的稀释） 使用高效色谱柱 使 k值尽可能小 增加进样体积和浓度 使用

5、低流速（ N增加） 采用梯度淋洗 液相色谱定量的精度 测量的精度 好的精度 不好的精度 定量的准确度 误差 E = O - T O 观测到的值 T 真值 液相色谱定量精度的计算 测量精度的计算 )10 0( X % 1 2 )( X CV N X i X N i X 变异系数 标准偏差 平均值 准确度的衡量 色谱方法是相对定量方法 ， 如不考虑损失 及杂质干扰等的因素 ， 其结果同 “ 标样 ” 的准确程度关系密切 一般的衡量方法是做回收率实验或不同方 法之间的比较：相关系数 相关系数： 其中 ， X及 Y分别代表不同方法的实验值及平均值 22 )()( )( YYXX YYXX r ii i

6、i 准确度的影响因素 标样的可靠性及其配制的准确度 色谱方法的可靠性 色谱泵的精确度（ GPC的影响更大） 进样器的准确度，进样技术 流速与检测面积的关系 如在不改变系统效率的情况下 ， 流速降低 峰高几乎不变 ， 然而峰面积与流速相应成 反比增加 。 A Rdt A A t t 1 2 1 2 1 2 n ml/min n/2 ml/min t1 t2 t1 t2 A1 A2 溶剂强度、 K及峰高的关系 样 品15 l对二甲氧基苯 色谱柱Resolve Silica 溶 剂二氯甲烷/戊烷 从85:75到60:45 k =3.0 k =1.9 k =4.9 k =1.5 柱效和峰高的关系 如其

7、他因素不变，如： K ， a， 流速等， 柱效增加峰面积基本不变，而峰高增加。 6 2 4 1 . 0 1 . 1 1 . 2 2 3 1 常用的定量方法 峰面积百分比法 由于检测技术的影响，在液相色谱中不常用 外标法 在液相色谱中用的最多 内标法 准确，但是麻烦 在标准方法中用的最多 外标法定量 配制一系列已知浓度的标样 外标法定量（二） 实际色谱图 0.0 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.00.501.01.502.02.503.03.504.04.505.05.506.06.507.0 Minutes 0.0 0.05 0.10 0.15 0.20 0.2

8、5 0.30 0.00.501.01.502.02.503.03.504.04.505.05.506.06.507.0 Minutes 0.0 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.00.501.01.502.02.503.03.504.04.505.05.506.06.507.0 Minutes 0 50 100 150 200 250 0 1,000 2,000 3,000 4,000 5,000 样品浓度 响应值 峰面积 ( ) 标准曲线 外标法定量（三） 计算公式 特点 无需各组份都被检出、洗脱 需要标样 标样及样品测定的条件要一致 进样体积要准确 iXi i

9、 i X ARFC XR XC RF i i 样品响应值未知组分的浓度 标样响应值 标样浓度 校正因子 )( )( )( )( 进样技术对定量结果的影响 固定体积定量管 （ loop） 的进样器精度最好 ， 其 准确度取决于进样器的结构 可变体积进样器的精度取决于操作者的技术 ， 准 确度通常更高 ， 因为进样用的注射器结构的准确 度高 ， 操作者的技术水平也有影响 ， 但不大 WISP自动进样器精确度及准确度都可达到定量管 进样器的水平 ， 因为其每一微升分 27步以上 。 然 而它又保留了可变体积进样器的优点 内标法定量（一） 配制一系列浓度的标样，其中加有内标样 内标法定量（二） 实际色

10、谱图 0 . 0 0 0 . 2 0 0 . 4 0 0 . 6 0 0 . 8 0 1 . 0 0 1 . 2 0 1 . 4 0 1 . 6 0 1 . 8 0 2 . 0 0 2 . 5 0 3 . 0 0 3 . 5 0 4 . 0 0 4 . 5 0 5 . 0 0 5 . 5 0 6 . 0 0 v o lt s M in u t e s M e t h y lP a r a b e n E t h y lP a r a b e n P r o p y lP a r a b e n B u t y lP a r a b e n 0 50 10 15 200 250 0 10 20

11、30 40 50 样品浓度 标样峰面积 内标样峰面积 标准曲线 内标法定量（三） 计算公式： 特点： 无需各组份都被检出、洗脱 需要标样，需要内标样 结果与进样体积无关 . )( )( )( )( ).( si i Xi i i X A A RFC XC XR SIR RF i i 内标峰面积 样品峰面积 未知组分的浓度 标样浓度 标样响应值 内标样响应值 校正因子 内标法定量（四） 对内标物的要求 化学结构与待测组分相似 (同系物、异构体 ) 在样品中不存在 不与样品中组份发生任何化学反应 保留值与待测组分接近 浓度（响应值）与待测组分相当 其色谱峰与其他色谱峰分离好 峰面积百分比法定量 公

12、式： 特点： 各组分要全部流出、全部被检测，并对检测 器的响应值一样简单，液相色谱目前很难做 到这点 与进样量无关 不需标样 简单 %100% iA iAC 可接收的检测范围 校正曲线只有在建立这条曲线的浓度范围 内有效 ， 高或低于这些点都可能引起计算 错误 最低浓度标样 最高浓度标样 所希望的检测范围 线 性 问 题 灵 敏 度 问 题 检测器响应 样品浓度 定量校正曲线 曲线 A： 因在零浓度时仍有色谱峰， 可能有杂质未分开 曲线 B： 在此浓度内，检测器的响应 值是非线性的 曲线 C： 可接受的理想状态，实际情 况应是 其延长线到零点 曲线 D： 表明有样品的损失，可能是色谱柱的非特征吸附，也 可能是 样品制备时的损失 A B C D