酶的特性

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1、化学与生物工程学院生物工程系生物化学实验报告 课程名称： 生物化学 实验项目： 酶的特性 实验室名: 生物化学实验室 实验时间： -11-8 任课教师： 杨艳 专业班级:生物工程1142 学生姓名： 髙晔 学 号: 210019 组别： 第五组 实验内容【实验目的】 酶是高效催化有机体新陈代谢各步反映的活性蛋白,几乎所有的生化反映都离不开酶的催化，因此酶在生物体内扮演着极其重要的角色，因此对酶的研究有着非常重要的意义。酶的活力是酶的重要参数,反映的是酶的催化能力，因此测定酶活力是研究酶的基本。酶活力由酶活力单位表征,通过计算合适条件下一定期间内一定量的酶催化生成产物的量得到淀粉酶是水解淀粉的糖

2、苷键的一类酶的总称,按照其水解淀粉的作用方式,可分为-淀粉酶和淀粉酶等。淀粉酶和-淀粉酶是其中最重要的两种，存在于禾谷类的种子中。-淀粉酶存在于休眠的种子中，而-淀粉酶是在种子萌发过程中形成的。淀粉酶活性是衡量小麦穗发芽的一种生理指标,-淀粉酶活性低的品种抗穗发芽,反之则易穗发芽。目前,有关-淀粉酶活性的测定措施诸多种,活力单位的定义也各不相似,国内外测定淀粉酶活性的措施常用的有凝胶扩散法、,二硝基水杨酸比色法和降落值法。这3种措施所用的材料分别是新鲜种子、萌动种子和面粉,获得的-淀粉酶活性应当分别是延迟(内源)淀粉酶、萌动种子-淀粉酶和后熟面粉的淀粉酶活性【实验原理】本实验由温度对酶活力的影

3、响;PH对酶活力的影响；酶的激活剂及克制；酶的专一性4组实验构成。(一)、温度对酶活力的影响酶的催化作用受温度的影响。在最适温度下，酶的反映速度最高。大多数动物酶的最适温度为34,植物酶的最适温度为50。酶对温度的稳定性与其存在形式有关。有些酶的干燥制剂,虽加热到00,其活性并无明显变化,但在10的溶液中却不久地完全失去活性。低温能减少或克制酶的活性，但不能使酶失活。（二)、p对酶活性的影响酶的活力受环境p的影响极为明显。不同酶的最适pH值不同。本实验观测pH对唾液淀粉酶活性的影响,唾液淀粉酶的最适pH约为68。（三)、唾液淀粉酶的活化和克制 酶的活性受活化剂或克制剂的影响。氯离子为唾液淀粉酶

4、的活化剂，铜离子为其克制剂。（四)、酶的专一性酶具有高度的专一性。本实验以唾液淀粉酶和蔗糖酶对淀粉和蔗糖的作用为例，来阐明酶的专一性。淀粉和蔗糖无还原性,唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性的麦芽糖，但不能催化蔗糖的水解。蔗糖酶能催化蔗糖水解产生还原性葡萄糖和果糖，但不能催化淀粉的水解。用Bneit试剂检查糖的还原性。【实验器材】(一)、温度对酶活力的影响1、器材 (1)试管及试管架 (2）恒温水浴 (3) 冰浴 (4) 沸水浴2、试剂和材料 (1) 2%淀粉的0.3氯化钠溶液15 mL需新鲜配制 (2)稀释00倍的唾液0 mL用蒸馏水漱口，以清除食物残渣,再含一口蒸馏水,半分钟后使其流入量筒并稀释

5、20倍（稀释倍数可根据各人唾液淀粉酶活性调节)，混匀备用。 (3）碘化钾-碘溶液将碘化钾0g及碘10溶于10m水中。使用前稀释1倍。（二）、H对酶活性的影响1、器材 （1) 试管及试管架 (2) 吸管 (3)滴管 () 5mL锥形瓶 （5)恒温水浴2、试剂和材料 （1）新配制的溶于03%氯化钠的0.5%淀粉溶液50mL (2）0.ol/磷酸氢二钠溶液1mL (3）.1o/L磷酸氢二钠溶液 L()0.1mL柠檬酸溶液400 (5)碘化钾-碘溶液0 m （6)p试纸p=5、pH=5、pH.8、pH=8四种（三)、唾液淀粉酶的活化和克制1、器材 ()恒温水浴 (2)试管及试管架2、试剂和材料 （1)

6、0.1%淀粉溶液150 mL （2)稀释20倍的新鲜唾液15L (3)1%氯化钠溶液50 L (4）1硫酸铜溶液50 mL (5)1%硫酸钠溶液0 mL ()碘化钾-碘溶液100mL（四)、酶的专一性1、器材 ()恒温水浴 （2)沸水浴 （3)试管及试管架、试剂和材料 (1)2%蔗糖溶液50 L（)溶于0.3%氯化钠的1%淀粉溶液(需新鲜配制)10 mL()稀释20倍的新鲜唾液100 mL ()蔗糖酶溶液10 mL将啤酒厂的鲜酵母用水洗涤3次（离心法)，然后放在滤纸上自然干燥取干酵母00g，置于乳钵内,添加适量蒸馏水及少量细沙,用力研磨提取约小时,再加蒸馏水使总体积约为原体积的1倍。离心,将上

7、清液保存于冰箱中备用。 (5)Benedict氏试剂无水硫酸铜1.4g溶于100m热水中,冷却后稀释到10 mL。取柠檬酸钠3g，无水碳酸钠100和60 mL水共热,溶解后冷却并加水至8 L。再将冷却的15mL硫酸铜溶液倾入。本试剂可长期保存。【实验环节】(一)、温度对酶活力的影响淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色。糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简朴的糊精遇碘不呈颜色,麦芽糖遇碘也不呈色。在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水解的限度可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。取3支试管，编号后按下表加入试剂：管号13淀粉溶液(mL)稀释唾液（m）煮沸过的稀释唾液151-1.5-.5-摇匀

8、后,将、3号两试管放入37恒温水浴中,2号试管放入冰水中。1分钟后取出（将2号管内液体分为两半），用碘化钾一碘溶液来检查1、3号管内淀粉被唾液淀粉酶水解的限度。记录并解释成果，将2号管剩余的一半溶液放入37水浴中继续保温分钟后,再用碘液实验,观测并记录成果如何？（二)、H对酶活性的影响取4个标有号码的5 L锥形瓶。用吸管按下表添加0.2l/L磷酸氢二钠溶液和01ol/柠檬酸溶液以制备pH.00的4种缓冲液。锥形瓶号码02molL磷酸氢二钠(mL）0.1 mol/L柠檬酸(m）p15.154.8.026.313.69.772226.9.72288.从个锥形瓶中各取缓冲液3 mL，分别注入支带有号

9、码的试管中,随后于每个试管中添加0.%淀粉溶液2 m和稀释200倍的唾液2m。向各试管中加入稀释唾液的时间间隔各为分钟。将各试管中物质混匀,并依次置于37恒温水浴中保温。待向第4管加入唾液2分钟后，每隔1分钟由3管取出一滴混合液,置于白瓷板上，加1小滴碘化钾一碘溶液,检查淀粉的水解限度。待混合液变为棕黄色时，向所有试管依次添加12滴碘化钾一碘溶液。添加碘化钾-碘溶液的时间间隔，从第1管起,亦均为分钟。观测各试管中物质呈现的颜色,分析pH对唾液淀粉酶活性的影响。(三)、唾液淀粉酶的活化和克制管号2340.淀粉溶液（mL）1.51.5.5稀释唾液(L)0.5%硫酸铜溶液(mL)0.51氯化钠溶液(

10、m)0.51硫酸钠溶液（m)0.5蒸馏水()05(四)、酶的专一性（）淀粉酶的专一性管号12351%淀粉溶液(滴)14%蔗糖溶液(滴）444稀释唾液（mL)1煮沸过的稀释(L）蒸馏水(m)1113恒温水浴5分钟Benedict试剂(mL)111沸水浴3分钟 观测现象。(2）蔗糖酶的专一性管号12361%淀粉溶液（滴)442%蔗糖溶液（滴)444蔗糖酶溶液（mL）11煮沸过的蔗糖酶溶液(m）1蒸馏水（mL)117恒温水浴5分钟Bedict氏试剂(m）11111沸水浴23分钟 观测现象。【实验成果与数据解决】(一) 、温度对酶活力的影响编号123条件37恒温水浴1分钟冰水浴0分钟37恒温水浴10分

11、钟先冰水浴10,再3恒温水浴10分钟现象黄色蓝色深蓝色黄色(二) 、pH对酶活性的影响编号1234条件7恒温水浴0分钟37恒温水浴1分钟37恒温水浴10分钟7恒温水浴1分钟现象蓝色黄色黄色黄色(三) 、唾液淀粉酶的活化和克制编号24条件37恒温水浴、保温1分钟碘化钾-碘溶液(滴）23232323现象深蓝色无色浅蓝蓝色（四)、酶的专一性(）淀粉酶的专一性编号245第一步3恒温水浴15分钟第二步enedict试剂(m）1111第三步沸水浴3分钟现象浅蓝色浅蓝色砖红色沉淀浅蓝色浅蓝色浅蓝色(）蔗糖酶的专一性编号12345第一步37恒温水浴15分钟第二步Bendict试剂（mL）111111第三步沸水浴3分钟现象浅蓝色浅蓝色浅蓝色浅蓝色砖红色沉淀浅蓝色【实验结论】通过几种实验的实验成果，我们可以懂得：（1） 温度可以影响酶的活性,在一定温度范畴内，酶的活性会随温度升高而升高，但是一旦温度过高，酶的活性就会散失。（2） P可以影响酶的活性,只有在最适的PH条件下,酶的活性才是最佳的，一旦超过某个范畴,酶就会失活。（3） 加入某些金属离子或者某些阴离子会克制和活化酶的活性。酶是具有专一性的。指引教师批阅意见:成绩评估:指引教师签字：年 月 日