发酵工艺条件的优化

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1、发酵工艺条件的优化发酵优化对于搞发酵的工作者而言是非常必需的，下面结合其他战友的一些经验之谈引出此专题，希望大 家踊跃讨论，以其提高发酵水平和解决实际问题。发酵工艺的优化在发酵行业起到很大的作用,尤其是在发酵生产中,它是提高发酵指标的一项非常,有用的 技术手段.同时也是搞发酵行业的人的必备知识要求之一,借此我想通过和大家交流共同提高发酵方面的知 识水平.发酵工艺优化方法与思路:发酵工艺优化的方法有很多,它们之间不是孤立的,而是相互联系的。在一种发酵 中,往往是多种优化方法的结合,其目的就是发酵是细胞大规模培养技术中最早被人们认识和利用的。发酵 技术在医药、轻工、食品、农业、环保等领域的广泛应用

2、，使这一技术在国民经济发展中发挥着越来越重 要的作用。为了提高发酵生产水平，人们首先考虑的是菌种的选育或基因工程的构建。而实际上，发酵工 艺的优化，包括生物反应器中的工程问题，也同样非常重要。发酵环境条件的优化是发酵过程中最基本的 要求，也是最重要、最难掌握的技术指标。温度、pH值、溶氧、搅拌转速、氨离子、金属离子、营养物浓 度等的优化控制，依据不同的发酵而有所不同。同时，微生物在生长的不同阶段、生产目的代谢产物的不同时期，对环境条件可能会有不同的要求。因此 应该在生物反应器内，使温度、pH值、溶氧、搅拌转速等不断变换，始终为其提供最佳的环境条件，以提 高目的产物的得率，在发酵放大实验中，一般

3、都很注重寻找最佳的培养基配方和最佳的温度、pH值、溶氧 等参数，但往往忽视了细胞代谢流的变化。例如：在溶解氧浓度的测量与控制时，关心的是最佳氧浓度或 其临界值，而不注意细胞代谢时的摄氧率；用氨水调节pH值时，关心的是最佳pH值，却不注意添加氨水 时的动态变化及其与其他发酵过程的参数的关系，而这些变化对细胞的生长代谢却非常重要。注意:大家可以从以下各个方面进行交流.尽量能够分类进行叙述，我总结了以下几累，也不是很全，当然从 其他的方面进行交流也可以，但是希望你注明附加说明!谢谢大家的参与!一. 好氧发酵1. PH工艺的优化2. 溶氧工艺的优化3. 原材料工艺的优化4. 消毒（灭菌）工艺的优化5.

4、 菌种制备工艺的优化6. 小试到中试，中试到生产等扩大实验的工艺优化7. 成本工艺优化8. 种子罐工艺的优化9. 发酵罐工艺参数控制的优化10. 仪表控制的工艺优化11. 环境的工艺优化12. 染菌处理的工艺优化13. 紧急情况处理的工艺优化（停电停水停气停汽等）14. 补料工艺的优化15. 倒种工艺的优化16发酵设备的工艺优化17.其他的工艺优化二. 厌氧工艺的优化三. 固体发酵的工艺优化四. 其他1. PH工艺的优化A. 配料中的PH很重要，其中有配前PH,配后PH,消前PH,消后PH,接种前PH,工艺控制PH等,配前PH,配后P H,可以用来检测厡材料的质量，初步估计配料的情况，如果出了

5、错误,有时候可以从PH中的变化看出来，能 够减少错误的发生.B. 另外，每次有新的配方我们总是要用PH方法检测其中的每种厡材料是否会和其他的发生反应,可以互相 两两混合，检测PH的变化，也可以用来作为配微量元素的检测.C. 消前PH可以用来减少消毒过程对培养基的破坏，因为培养基在消毒中会有PH的变化，在不同的PH条件下 对培养基破坏也不一样，因此可以在消毒的时候选择合适的PH,消毒完后可以调节过来，这样一来可以对PH 敏感的一些原材料减少破坏，这种方法在生产中已经取得了初步的成绩，提高了指标.D. 工艺控制的PH,在发酵的产抗期间,通过在不同的发酵时间调整不同的PH,可以减少杂质的产生，同时还

6、 可以缓解溶氧，比如在头抱发酵中，通过在后期调整PH可以减少DCPC的含量，给提取工序带来很大的好处，E. 补料罐通过PH的调节可以更好的通过流加物料而不影响发酵（部分发酵在不同时期的PH有所不同，所以 通过补料罐的调整可以对发酵指标有所提高）F. 发酵过程中的PH调节可以通过各种方法，不一定要添加氨水和氢氧化钠，可以添加玉米桨等其他的物料 来进行调节.G. 控制放罐时的PH可以对后面的过滤有所影响，所以一定要控制好放罐前的PHH. 绘制种子瓶和种子罐以及发酵罐等整个发酵过程的PH生长曲线，可以用来参考控制工艺,检测无菌情况 的发生.A. 华东理工大学的张嗣良提出了“以细胞代谢流分析与控制为核

7、心的发酵工程学”的观点。他认为，必 须高度重视细胞代谢流分布变化的有关现象,研究细胞代谢物质流与生物反应器物料流变化的相关性，高度 重视细胞的生长变化，尽可能多地从生长变化中做出有实际价值的分析，进一步建立细胞生长变量与生物 反应器的操作变量及环境变量三者之间的关系，以便有效控制细胞的代谢流，实现发酵过程的优化。B. 补料分批发酵技术该技术可以有效地减少发酵过程中培养基黏度升高引起的传质效率降低、降解物的阻 遏和底物的反馈抑制的现象，很好地控制代谢方向，延长产物合成期和增加代谢物的积累。所需营养物限 量的补加，常用来控制营养缺陷型突变菌种，使代谢产物积累到最大。氨基酸发酵中采用这种补料分批技

8、术最普遍，实现了准确的代谢调控。C. 超声波的应用:超声波有很强的生物学效应。可应用于发酵过程的上、中、下游三个阶段。其在发酵工 艺上的应用，可增加细胞膜的通透性和选择性，促进酶的变性或分泌，增强细胞代谢过程，从而缩短发酵 时间，改善生物反应条件,高生物产品的质量和产量. 超声波的作用机制分为热作用、空化作用和机械传质 作用。热作用是超声波在介质内传播过程中，能量不断被介质吸收而使介质的温度升高的一种现象，可用 于杀菌或使酶失活。空化作用是超声波在介质中传播时，液体中分子的平均距离随着分子的振动而变化。 当其超过保持液体作用的临界分子间距，就形成空化（空泡）。空泡内可产生瞬间高温高压并伴有强大

9、的 冲击波或射线流等，这足以改变细胞的壁膜结构，使细胞内外发生物质交换。机械传质作用是超声波在介 质中传播时，可使介质质点进入振动状态，加速发酵液的质量传递，提高发酵过程的反应速度。超声波可 广泛应用于生物发酵工程。不同频率和强度的超声波对发酵过程的作用是不同的，使用时应视具体的发酵 工艺和使用条件进行选择。增加前体物的合成增加目的产物的前体物的合成或是直接添加前体物，均有利 于目的产物的大量积累。如：在氨基酸的发酵中，通常在微生物的培养中加入前体，生产氨基酸；在花生 四烯酸的发酵中，通过增加前体物或是加强糖代谢的途径，增加其前体物的合成，均有助于提高花生四烯 酸的产量。去除代谢终产物改变细胞

10、膜的通透性，把属于反馈控制因子的终产物迅速不断地排出细胞外， 不使终产物积累到可引起反馈调节的浓度，即可以预防反馈控制。我再根据自己的经验谈谈：不足之处，敬请大家给与补充改正！2. 溶氧工艺的优化A.影响溶氧的条件有：温度、通气量、发酵液性质、物料的性质、补料的情况、压力、搅拌的形式、设备 的各种参数、菌丝本身的情况、染菌等等b. 控制好的溶氧要从各个方面分析入手，比如说，在不同的周期要调整各种影响溶氧的条件顺序就不一样 前期可以调整通气量，罐压然后温度，经搅拌等对生产指标影响不大，但是在发酵后期则要注意：如果你 的军种和产物的生产对温度敏感的话，则需要最后调整温度，如果对压力或者二氧化碳敏感

11、的话则最后再 调整压力。其他的情况一样。也可以通过顺序调整来节省成本。c. 搅拌的形式很多，我们试过很多的形式，根据设备的不同选型有所不同，但是必须要根据你的发酵液的 性质和电机的功率等进行选择。这方面在发酵设备这本书上有详细的描述。注意一点是：搅拌的选择要注 意它的接口和缝隙，避免染菌。d. 空气分布器可以根据设备的情况进行设计，保证它和物料的混合度达到最大当然最好。不过一定要考虑 它对染菌的影响。以及对其进行清洗的方便和消毒的方便，不易杜塞等 。e. 通过补料可以缓解溶氧，尤其是你的部料成分对发酵后其有很大影响的时候，通过合适的补料时间和补 料量的控制可达到提高发酵指标的效果。具体问题具体

12、分析了！f. 通气量的控制可以根据菌丝的 ph 的变化和溶氧计的测量进行控制，同时可以根据补料量 的多少进行 控制，这些均可以作为调整溶氧的参考依据。做发酵优化一定要有针对性,在你做一个新品种时,一定要忘记你原来品种的所有特性,把注意力集中到你 所从事的具体微生物的培养上来!就象人才培养一样要因才施教,要有感情的去对待它,微生物也是生物,在 某方面同人一样，这是我做发酵几年的体会，对于发酵是TECHNOLOGY还是SCIENCE,以及前途如何均不重要， 重要的是要把自己所做的事情做好，做精，做细，就能实现TECHNOLOGY与SCIENCE之间的转化，它们表象不同, 本质一样! 再补充些工艺优

13、化的知识和经验从摇瓶试验到中试发酵罐试验的不同之处1、消毒方式不同，摇瓶是外流蒸汽静态加热（大部分是这样的），发酵罐是直接蒸汽动态加热，部分的是 直接和蒸汽混合，会因此影响发酵培养基的质量，体积，PH,透光率等指标。扩大时摇考虑2、接种方式不同，摇瓶是吸管加入，发酵罐是火焰直接接种（当然有其他的接种方式），要考虑接种时的 菌株损失和菌种的适应性等。3、空气的通气方式不同，摇瓶是表面直接接触。发酵罐是和空气混合接触，考虑二氧化碳的浓度和氧气的 融解情况。4、蒸发量不同，摇瓶的蒸发量不好控制，湿度控制好的话，蒸发量会少。发酵罐蒸发量大，但是可以通过 补料解决的。5、搅拌方式不同，摇瓶是摇转方式进行

14、混合搅拌，对菌株的剪切力较小。发酵罐是直接机械搅拌，注意剪 切力的影响和无菌的影响。6、PH的控制，摇瓶一般通过碳酸钙和间断补料控制PH，发酵可以直接流加控制PH,比较方便。7、温度控制，摇瓶是空气直接接触或者传热控制温度，但是发酵罐是蛇罐或者夹套水降温控制，注意降温 和加热的影响。8、注意染菌的控制方法不一样，发酵罐根据染菌的周期和染菌的类型等可以采取一些必要的措施减少损失。9、发酵罐可以取样或者仪表时时检测，但是摇瓶因为量小不能方便的进行控制和检测。10、原材料不一样，发酵所用原材料比较廉价而且粗旷，工艺控制和摇瓶区别很大等等。， 着说说发酵工艺中补料的作用 补料分批培养（fedbatch

15、 culture简称FBC）是指在分批培养过程中、间歇或连续地补加一种或多种成分 的新鲜培养基的培养方法、与传统的分批集中补料培养相比、它有以下优点：（1）可以避免在分批发酵中因次投料过多造成发酵液环境突变，造成菌丝大量生长等问题，改善发酵液流 变等性质，使得发酵过程泡沫得以控制，节省消泡剂，并提高了装罐系数。可以控制细胞质量，以提高芽抱的比例，并使pH得以稳定。（3）可以解除底物抑制，产物反馈抑制和分解阻遏。（4）可以使“放料和补料”方法得以实施。该方法在发酵后期、产生了一定数量代谢产物后，在发酵液体积 测量监控下，放出一部分发酵液，同时连续补充部分新鲜营养液，实现连续带放、既有利于提高产物

16、 产量又可降低成本，使得发酵指数得以大幅度提高。（5）利用FBC技术、可以使菌种保持最大的生产力状态随着传感技术以及对发酵过程动力学理沦深入研究、 用模拟复杂的数学模型使在线方式实最优控制成为可能。连续补料控制目前采用有反馈控制和无反馈控制两种方式。有反馈控制：选择与过程直接关系的可检测参 数作为控制指标，例如可以测量、控制发酵液PH、采用定量控制葡萄糖流加。稳定PH在次级代谢最旺盛 水平。而无反馈控制FBC是指无固定的反馈参数，以经验和数学模型相结合的办法来操作最优化控制、从 而使抗生素发酵产量得以大幅度提高。例如发酵过程中前体的补加。由此可见，要实现对发酵过程的有效 控制，就先要解决补科的

17、连续控制问题。目前国外发酵生产过程连续补料采用：流量计（电磁流量计、液体质量流量计）、小型电动、气动隔膜调节 阀和控制器来实现连续补料控制。菜发酵工厂在中试试验中还成功地运用了电子称加三阀控制的自动补科 系统至于装液量的问题，应该从以下几个方面考虑：1、保持在你所需要的转速培养情况下（尤其是在后期，菌丝很多时，转速很高时），不能让发酵液把你的 塞子湿掉，容易造成染菌。2、装液量的体积在消毒过程中，不能因为沸腾把塞子湿掉，或者跑出三角瓶，装液量太多会出现这样的情 况。很容易染菌。3、根据你的菌种的情况和发酵液的粘度，需要的混匀程度等等方面也要考虑。4、建议你做一个梯度试验（4050607080等

18、）就可以找到你所需要的装液量。关于剩余空气的排除在灭菌完毕后（100度左右），立刻用盖子或者其他的用品把你的培养摇瓶盖好，有时 候这么点空气根本对兼性厌氧发酵没有什么影响，如果你的菌种要求很严的话，最好用干冰加入已经灭菌 的空摇瓶后，立刻用其他的样品培养基分装即可。当然也可以用氮气。最好是二氧化碳。消毒（灭菌）工艺的优化1、消毒又叫灭菌，但是又很多的区别在里面（可以上网搜索资料参考，很多的），我们在公司一般把它称 为消毒。消毒其实又很多的学问在里面，一个好的消毒工可以达到一年内千分之一的染菌率，非常的厉害！2、发酵液经过消毒会遭到很大的破坏，所以首先需要控制消毒前的PH，而后控制消毒时的温度和

19、时间（非 常重要，有时候对发酵指标又很大的影响），在VB12发酵中，消毒的质量可以直接影响发酵的水平，从消 后的指标就几乎能得出放罐时的指标。所以必须控制消毒的温度和时间。3、消毒的方式的不同对发酵影响也很大，公司一般分实消（间断消毒）和连消两种，连消的发酵液质量较 好，但是对设备仪器要求恨严格。实消操作简单，但是控制也不容易，对发酵噎破坏较大，因为它的升降 温时间很长。对设备破坏较大，（震动和蛇罐等）。4、现在出现一种是螺旋板换热器连续消毒，很方便也很经济。它的原理和连消鞳相似，只是它靠板式换热， 不和蒸汽直接接触，而且它的消毒蒸汽冷凝水可以回流到原培养基进口处加热培养基，可以节约成本。而

20、且可以控制培养基的体积。但是对设备的要求很严格（为了保证无菌要求），很少的设备公司能够做好这样 的设备。5、发酵的补料消毒可以通过调节好 PH 的几种料一起进行消毒，节约成本，如果部分的发酵中对几种物料 的利用安比例进行，而且这些物料不发生任何反映，这样消毒既可以调节浓度控制蒸发量，又可以节约能 源，一举两得。6、部分得补料可以加入某种不容物质，消毒后再分开。保证设备的干净和无菌等，例如油里面可以加入其 他的易溶于水的物质等，消毒后分水时可以把它分开。7、消毒在保证无菌的前体下，还要考虑经济、对培养基破坏情况、操作方便（节省维修时间人员等）、工 艺改进等等。剪切力的计算可以参考（发酵设备），一

21、般的说 剪切力一般以搅拌叶的线速度测量，如果没有摇瓶没有 搅拌可以参考摇瓶中最大的线速度，计算公式为 ：转速*3.14*摇瓶中最大的半径的平方。 不过我觉得影响你发酵可能是胞外次级代谢物或者其他的物质。摇瓶中的剪切力对菌种的影响很小，不过 你的菌种我不是很熟悉，不过凭我的经验我觉得他不是主要的因素。我考虑的 可能是氧气对你的影响较大，可能你搅拌时破坏了菌种的生长环境，导致他的代谢途径改变，产 生了其他的物质（可能是有害物质）导致了菌种的生长环境改变影响了它的代谢。还有一点是：你的培养基条件不是很适合菌种的生长，菌种在前期创造了自己生长条件，结果搅拌遭到破 坏所以没有长好。浅谈在发酵工艺优化中统

22、计手段的重要性。1. 协同效应与关键因素：优化发酵工艺实质是考察各个变量对优化目标的效应以获得各因素（变量）对目 标值的影响关系，进而以此为基础确定最优操作条件。同其他学科一样，在发酵优化时如果能建立各因素 对目标的数学表达函数是最为理想的。但由于发酵中微生物性质的复杂性（微生物内部的代谢机理，调控 机制等）及发酵环境多样的传递特性（热，质量、动量），使得要建立一个准确的机理模型十分困难。因此 目前常见的发酵模型多为黑箱模型，即拟合模型（虽然随着对微生物代谢途调控机制的了解及生化反应动 力学的发展，不少成功的机理模型也被建立并用于发酵的优化和调控可参见诸多生化反应动力学教程 及研究文献）。同时

23、，更简单的单因素试验或稍复杂的正交试验也在发酵工艺优化中得到普遍应用。虽然针 对不同的优化要求，优化手段当然可以也应该尽量简单，但目前很多国内学术研究文献还频频采用正交试 验的确让人感觉很惋惜，特别是对试验数据的统计处理不够重视，相关的检验欠缺。因为在发酵时，涉及 微生物性质（种类、种龄、活力，接种量），生长条件（pH、温度），培养基组成，传递条件（溶氧量或转 速、搅拌速度）等多个变量，所以不仅要考察每个因素的效应，还应考察是否存在不同因素的协同效应。 一般而言，存在如此多的因素，协同效应在所难免。而要高效判别协同效应，统计手段就不可不重视。此 外，要高效的进行优化时，也应该借助统计手段确定各

24、个因素的效应大小，选择重要的因素进行重点考察， 即抓住主要矛盾把好钢（精力）用在刀刃（关键因素）上。因此，在优化发酵工艺时，一定要有意识的应 用统计手段，首先确定关键因素（包括产生重要协同效应的因素），而后再集中精力优化关键因素。值得一 提的是，要事半功倍地实现优化目标，就应该时刻牢记要抓住主要矛盾。2. 用统计手段建立数学模型：前点已提及要建立数学模型，但为什么要用统计手段建立数模了？我们都知 道盲人摸象的故事，其实优化发酵工艺也与此类似。试想，如果我们能准确地定量了解各个因素是如何影 响发酵目标的，那要进行优化就是个简单地求最值的问题。之所以进行单因素试验或者正交试验，目的就 是通过考察输

25、入输出关系建立变量响应间的关系。我们如果仅仅通过考察几个孤立的点就想得到一个 系统的全局的关系实在有盲人摸象的危险：获得一个局部的关系，得到一个局部的极值而非全局最值；或 者获得失真的关系，得到连极值都不是的结果。而如果借助统计手段，我们可以有意识的选取一些有代表 性的点，以获得全局的正确关系。比如，如果确定一个正方体的考察空间，那可以选择八个顶点一个中 心点，还可以补充考察六个面上的中心点。如此一来，不仅对全局做到了有效考察，而且最少只用 9 个点 就可以达到目标，胜于无目的地考察正方体的其他点。3. 如何事半功倍确定有效因素：如果有 12 个因素需要考察，那考虑到因素间的两两协同效应，则要

26、另增 加12X11 = 132个因素。如果采用单因素试验或正交试验，试验将非比寻常。如果借助适当的统计手段， 则可大大减少试验次数。如Plackett Burman （拼写可能有误）试验，n次试验可以考察n-1个因素，即 进行12次试验可以考察11个因素。虽然PB有一定的缺陷，但一般而言的确是高效而又实用的。类似的非 平衡或平衡块统计手段还有许多，我们可以根据需要选择合适的手段进行试验以达到目的。4. 应用统计优化的其他好处：在建立数学模型是，选择合适的方法也对优化过程和结果大有裨益。借助最 陡爬坡试验、中心点试验，相应面方法，均匀设计等方法能让你准确、高效的完成试验。借助SAS，SPAA， Statistics 等统计手段，你可以快速完成数据的分析、模型构建及假设检验。而且这些统计软件还特供了 强大的绘图能力，你可以看到所建模型的三维图像，得到直观影响，轻松进行最优求解得到优化条件。另 外，最优算法发展比较快，象基因算法，神经元网络算法也广为应用。