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1、摘要:研究地肤子不同溶剂提取物的总黄酮含量及其抗氧化活性。用冷浸法得到地肤子乙醇、 丙酮和乙酸乙酯提取物。测定了三种提取物的总黄酮含量，并通过测定其对dpph自由基的清 除能力和还原能力来研究其抗氧化能力。地肤子不同溶剂提取物均表现出很强的抗氧化性能， 其抗氧化能力随提取物浓度增大而增强。地肤子提取物具有作为天然抗氧化剂的潜力。关键词：地肤子；dpph；还原能力；抗氧化；总黄酮含量地肤（kochia scoparia）是藜科一年生草本植物，高50-100 am。地肤子为地肤的果实， 扁球状五角星形，直径13 mm，具有清热利湿、祛风止痒等功效，主治小便涩痛、阴痒带 下、风疹、湿疹、皮肤瘙痒等疾
2、病。地肤子在民间使用广泛，但其抗氧化方面的研究鲜见报 道。抗氧剂可以清除人体内过量的自由基，预防动脉硬化、关节炎、糖尿病、肌肉萎缩和老 年痴呆等多种疾病。目前，使用较多的合成抗氧化剂如2.6-二叔丁基4-甲基苯酚等具有较多 副作用，因此近年来科研工作者致力于寻找来源于植物的天然抗氧化剂。本试验通过测定地 肤子3种溶剂提取物（乙醇提取物、丙酮提取物和乙酸乙酯提取物）对dpph自由基的清除能 力和还原能力来对其抗氧化能力进行研究，为地肤子作为一种天然高效抗氧化物的推广利用 提供理论依据。1. 材料与方法1.1材料、试剂和仪器地肤子来源于广西玉林。芦丁标准品购于百灵威试剂公司（北京）。所有试剂均为分
3、析纯。 uv1901型紫外可见分光光度计（北京普析电子科技有限公司）。1.2方法1.2.1地肤子不同溶剂提取物制备 称取20 g地肤子粉末，加入200 ml乙醇（95%），冷 浸72 h。重复上述操作3次，合并提取液。旋转蒸发回收溶剂，得到地肤子乙醇提取物（ee） 0.8 g，得率为4.0%。采用相同方法，用丙酮及乙酸乙酯提取，得到丙酮提取物（ae） 0.6 g 和乙酸乙酯提取物（eae） 0.8 g，得率分别为3.0%和4.0%。1.2.2地肤子总黄酮含量的测定1）标准曲线的绘制。精确吸取芦丁对照品溶液（1 mg/ml）于10 ml量瓶中，分别加入 5%亚硝酸钠0.4 ml，静置6 min，
4、加入5%硝酸铝0.4 ml，静置6 min。再加入5%氢氧化钠试 液4.0 ml，用95%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置15 min，在510nm处测定其吸光度。以吸光 度对溶液浓度进行回归分析，绘制标准曲线，求出回归方程。2）地肤子提取物总黄酮含量测定。将芦丁标准溶液换为固定浓度提取物溶液，同上操作 测定其吸光度，多次测量求平均值。根据标准曲线计算总黄酮的芦丁当量，总黄酮含量以每 克干物质的芦丁当量（mg）表示，并计算提取得率。1.2.3地肤子提取物对dpph自由基的清除能力测定取不同浓度地肤子提取物溶液（0.5、 0.8、1.0、1.2、1.5、1.8、2.0 mg/ml）加入 8 ml dp
5、ph （0.004%）溶液中。在最大波长处 （517 nm）测定其吸光度，直到平衡为止。清除率计算公式为s= （1-a样品）/a空白X 100%。 其中，a空白为未加药液的dpph溶液的吸光度，a样品为加入药液的dpph溶液的吸光度。1.2.4还原能力测定 取上述不同浓度地肤子提取物溶液0.2 ml，加入2.5 ml pbs溶液 （ph 7.4）， 2.5 ml kfe （cn） 4 （1%）。于 50C恒温 20 min 后，加入 2.5 ml 三氯乙酸溶液 （10%），离心 10 min。取上清液 2.5 ml，加入 2.5 ml 蒸馏水、0.5 ml fecl3 （1%），混匀。 在70
6、0 nm处测定其吸光度，以蒸馏水为参比。2. 结果与分析2.1地肤子提取物总黄酮含量以吸光度对溶液浓度进行回归分析，绘制标准曲线，得到回归方程y=9.677 8x+0.016 7 （r=0.9992）。根据线性方程得出地肤子乙醇提取物（ee）、丙酮取物（ae）和乙酸乙酯提取 物(eae)的总黄酮含量测定结果。结果表明，3种提取物的总黄酮含量在29.543.5 mg/g 之间，均具有较高的黄酮含量，具有作为自由基清除剂应用的潜力。2.2地肤子提取物对dpph自由基的清除能力地肤子3种溶剂提取物对dpph自由基清除能力的测定结果如图1所示。3种提取物对dpph 自由基的清除能力均随其浓度的升高而增
7、强。对于ae,浓度为0.5和0.8 mg/ml时，清除率 分别为27.8%和37.7%，浓度增加到1.2、1.5 mg/ml时，清除率增大为47.9%和57.6%。当 ae浓度增加到1.8、2.0 mg/ml时，清除率增大到64.8%和70.2%。对于eae，当浓度从0.5 mg/ml 增加到2.0 mg/ml，清除率从23.9%增加到72.4%。当提取物浓度较低时(0.5和0.8 mg/ml)，ae和ee表现出相近的dpph自由基清除能力。 而在较高提取物浓度(1.8和2.0 mg/ml)时，ee表现出最强的清除能力，在1.8 mg/ml时 清除率为73.6%，在最高浓度2.0 mg_/ml
8、时清除率为85.8%。结果表明，地肤子的3种提取 物对于dpph自由基均具有很强的清除能力。2.3不同溶剂提取物ec50值eg50代表抗氧化剂对自由基达到半抑制时的质量浓度。eg50的数值越大，则表明抗氧化 剂对自由基的清除能力越强。地肤子3种提取物ee、ae和eae对dpph自由基的ec值分别为 1.13、1.28、1.15 mg/mlo因此，3种提取物的ego值大小顺序为ae、eae、ee。即，地肤子 不同溶剂提取物对dpph自由基的清除能力顺序为eeeaeae。2.4地肤子提取物的还原能力地肤子不同溶剂提取物的还原能力如图2所示。抗氧化剂通过自身的还原作用给出电子 从而达到清除自由基的效
9、果，还原能力越强，则抗氧化性越强。测定结果以吸光度表示，吸 光度越高表示还原能力越强。地肤子3种提取物的还原能力均与提取物浓度呈正相关，即提 取物浓度越高，其还原能力越强。对于ae，浓度为0.5和0.8mg/ml时吸光度分别为0.29和 0.33,浓度为1.0和1.2mg/ml时吸光度分别为0.46和0.53,当浓度增大为1.8和2.0mg/ml 时，吸光度分别为0.73和0.89。对于ee，按浓度由低至高其吸光度分别为0.21、0.41、0.51、 0.61、0.63、0.80和0.86，其还原能力随浓度增大而增强。在较高浓度时(2.0 mg/ml)，3 种提取物的还原能力接近，ae、ee和eae的吸光度分别为0.89、0.86和0.88。3. 小结本试验测定了常用中药地肤子不同溶剂提取物的总黄酮含量，并通过dpph自由基体系和 还原能力来研究其抗氧化性能。结果表明，地肤子不同溶剂提取物对dpph自由基均显现出较 强的清除能力，浓度为2.0 mg/ml时ee的清除率为85.8%。ec值分析结果表明，不同溶剂提 取物对dpph自由基的清除能力顺序为eeeaeae。不同地肤子提取物均具有很强的还原能力， 且还原能力随提取物浓度增大而增强。研究结果表明，地肤子不同溶剂提取物，特别是eae， 具有优良的清除自由基能力和抗氧化能力，有望作为天然抗氧化剂在工业上应用。
地肤子总黄酮含量测定及其抗氧化活性
