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1、液相色谱柱的选择卢志浩奥妙科技luzhaumigrp客 服：0531-8856-39562019年11月12月 山东影响影响C18色谱柱性能的主要要素色谱柱性能的主要要素色谱柱与色谱填料的特性色谱柱与色谱填料的特性1、柱填料柱填料 硅胶纯度硅胶纯度 粒径粒径 比外表积比外表积 孔径孔径2、色谱柱的构型色谱柱的构型 色谱柱直径色谱柱直径 色谱柱长度色谱柱长度3、固定相固定相 键合类型键合类型 剩余硅羟基的影响剩余硅羟基的影响 反相键合相的保管行为反相键合相的保管行为 键合硅胶的稳定性键合硅胶的稳定性物理要素物理要素化学要素化学要素柱填料对色谱柱性能的影响柱填料对色谱柱性能的影响柱填料对柱填料对C
2、18色谱柱性能的影响：硅胶纯度色谱柱性能的影响：硅胶纯度I2.3-二羟基萘OHOHOHOH2.7-二羟基萘 min01234567mAU 010203040 VWD1 A,Wavelength=230 nm(LPF07091702.D)3.008 4.084min0123456mAU 01020304050 VWD1 A,Wavelength=230 nm(LPF07090605.D)Area:253.288 2.275 Area:400.399 2.889min01234567mAU 0510152025303540 VWD1 A,Wavelength=230 nm(LPF07091208.
3、D)2.450 3.471min0246810mAU 510152025 VWD1 A,Wavelength=230 nm(LPF07091202.D)3.944 Area:176.686 5.934TF=1.31Brand W,AQ Column 5m,4.6mm150mm Brand Z,C18 Column 5m,4.6mm150mm baulo C18 5m,4.6mm150mm Brand H,C18 Column 5m,4.6mm150mm min0123456789mAU 010203040 VWD1 A,Wavelength=230 nm(LPF07091711.D)2.899
4、Brand U,C18 Column 5m,4.6mm150mm！TF=1.42TF=1.39TF=1.69TF=？流动相：流动相：甲醇：水甲醇：水=65：35流速：流速：1 mL/min温度：温度：35检测波长：检测波长：230 nm 进样量：进样量：20 L硅胶纯度金属含量硅胶纯度金属含量柱填料对柱填料对C18色谱柱性能的影响：硅胶纯度色谱柱性能的影响：硅胶纯度II 硅胶纯度金属含量硅胶纯度金属含量d柱填料对柱填料对C18色谱柱性能的影响：粒径色谱柱性能的影响：粒径 硅胶粒径和类型对柱效的影响硅胶粒径和类型对柱效的影响d硅胶粒径和类型对压力的影响硅胶粒径和类型对压力的影响柱填料对柱填料对C
5、18色谱柱性能的影响：粒径色谱柱性能的影响：粒径II 目前市场主要可供选择的填料粒径目前市场主要可供选择的填料粒径 1.7m，1.8m，2.2m 快速液相色谱柱：匹配快快速液相色谱柱：匹配快速色谱仪速色谱仪 2.7m 多孔壳层：在常规液相色谱仪上实现快速分多孔壳层：在常规液相色谱仪上实现快速分别别(Halo)3.0m，3.5m 普通快速分析普通快速分析 5.0m 常规分析常规分析颗粒越小，柱效越高颗粒越小，柱效越高,但是耐污染性能下降，柱压升高但是耐污染性能下降，柱压升高.柱填料对柱填料对C18色谱柱性能的影响：比外表积色谱柱性能的影响：比外表积 l 每克填料的外表积，与粒度，孔径有关每克填料
6、的外表积，与粒度，孔径有关l 比外表积大，保管添加，载样量添加，平衡时比外表积大，保管添加，载样量添加，平衡时间添加间添加(梯度洗脱尤为留意梯度洗脱尤为留意)l 根据需求选择适宜的比外表积根据需求选择适宜的比外表积柱填料对柱填料对C18色谱柱性能的影响：孔径色谱柱性能的影响：孔径I l 多孔资料的多孔资料的95%以上外表以上外表在孔内部在孔内部l 样品分子直径小于平均孔样品分子直径小于平均孔径，才干进入微粒内部径，才干进入微粒内部l 孔径至少是样品流体学直孔径至少是样品流体学直径的径的4倍倍l 300孔径用于：超越孔径用于：超越50个氨基酸的肽或个氨基酸的肽或25个残基的个残基的低聚寡核苷酸低
7、聚寡核苷酸样品分子直径小于平均孔径，样品分子直径小于平均孔径，才干进入微粒内部才干进入微粒内部柱填料对柱填料对C18色谱柱性能的影响：孔径色谱柱性能的影响：孔径II 小生物分子的保管值在小孔径填料通常更大小生物分子的保管值在小孔径填料通常更大条件：C8色谱柱，4.6150mm，3.5um，A溶剂，0.1%TFA水溶液；B溶剂，0.1%TFA于80%乙腈水中；20min梯度，1030%B；60C，1.5ml/min色谱柱的构型对色谱柱性能的影响色谱柱的构型对色谱柱性能的影响色谱柱的构型对色谱柱性能的影响：长度和直径色谱柱的构型对色谱柱性能的影响：长度和直径色谱柱尺寸色谱柱尺寸 对色谱分别的影响：
8、对色谱分别的影响：短柱短柱(15-100mm)-运转时间短运转时间短,柱压低柱压低 长柱长柱(150-250mm)-分辨率高分辨率高,运转时间运转时间长长 窄径柱窄径柱(2.1mm)-检测器灵敏度高检测器灵敏度高 宽径柱宽径柱(3-21.2mm)-载样量高载样量高固定相对色谱柱性能的影响固定相对色谱柱性能的影响固定相对色谱柱性能的影响：键合类型固定相对色谱柱性能的影响：键合类型A 纵向交联：保管和选择不稳定纵向交联：保管和选择不稳定B 横向交联：宽横向交联：宽pH适用适用C 单体键合：重现性好，柱效高单体键合：重现性好，柱效高D 单体空间维护：低单体空间维护：低pH稳定稳定固定相对色谱柱性能的
9、影响：剩余硅羟基的影响固定相对色谱柱性能的影响：剩余硅羟基的影响剩余硅羟基的影响剩余硅羟基的影响普通硅胶当流动相的普通硅胶当流动相的 pH 值大于值大于 4.5-5.0 时，外表时，外表的硅羟基会带负电荷，碱性化合物拖尾。的硅羟基会带负电荷，碱性化合物拖尾。处理方法处理方法封尾封尾双层外表修饰双层外表修饰固定相对色谱柱性能的影响：剩余硅羟基的影响固定相对色谱柱性能的影响：剩余硅羟基的影响封尾封尾键合填料与小硅烷进展后续反键合填料与小硅烷进展后续反响，如三甲基氯硅烷，反响掉响，如三甲基氯硅烷，反响掉部分剩余硅羟基，以添加外表部分剩余硅羟基，以添加外表覆盖率。覆盖率。缺陷：缺陷：不能完全反响仍有不
10、能完全反响仍有50%的硅的硅羟基未被反响羟基未被反响在在pHC3C1，长链之间差别不大，长链之间差别不大 固定相对色谱柱性能的影响：反相键合相的保管行为固定相对色谱柱性能的影响：反相键合相的保管行为不同厂家色谱柱的不同厂家色谱柱的保管值，选择性与峰型保管值，选择性与峰型色谱柱：色谱柱：4.6*150mm，流动相：乙腈流动相：乙腈0.05M磷酸钾缓冲液，磷酸钾缓冲液，pH3.2(65:35);流速：流速：1ml/min，拖尾峰 T0尿嘧啶P:吡啶吡啶L:苯酚苯酚N:N,N-二甲基苯胺二甲基苯胺B:4-丁基苯甲酸丁基苯甲酸J:甲苯甲苯固定相对色谱柱性能的影响：固定相对色谱柱性能的影响：键合硅胶的稳
11、定性键合硅胶的稳定性键合硅胶的稳定性键合硅胶的稳定性 低低pH值，键合相流失值，键合相流失 高高pH值，硅胶溶解值，硅胶溶解影响色谱柱寿命，方法不重现影响色谱柱寿命，方法不重现 固定相对色谱柱性能的影响：固定相对色谱柱性能的影响：键合硅胶的稳定性键合硅胶的稳定性低低pH值，键合相流失值，键合相流失固定相对色谱柱性能的影响：固定相对色谱柱性能的影响：键合硅胶的稳定性键合硅胶的稳定性空间位阻维护，延缓键合相流失空间位阻维护，延缓键合相流失固定相对色谱柱性能的影响：固定相对色谱柱性能的影响：键合硅胶的稳定性键合硅胶的稳定性高高pH值，硅胶基质溶解值，硅胶基质溶解pH9时，色谱柱的稳定性时，色谱柱的稳
12、定性固定相对色谱柱性能的影响：固定相对色谱柱性能的影响：键合硅胶的稳定性键合硅胶的稳定性碳杂化，延硅胶缓高碳杂化，延硅胶缓高pH值水解值水解外表碳杂化表示图外表碳杂化表示图奥妙为您提供全面的奥妙为您提供全面的LC处理方案处理方案2019版药典LC方法开发效力全面的色谱柱选择高比外表积Baulo Surfond C18高pH条件色谱柱pH=1-14Baulo Protbond C18亲水色谱柱Baulo Polarbond C18经济性通用色谱柱Baulo Stablebond C18色谱柱总结：如何选择色谱柱总结：如何选择色谱柱了解目的化合物的性质了解色谱柱的性质粒径，孔径，比外表积，pH适用范围有问题吗，谢谢大家！联络我：卢志浩联络我：卢志浩15715410896luzhaumigrp
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