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1、细菌耐药的监测方法一、细菌耐药监测的方法定义 AST是一个检测细菌耐药性的是一个检测细菌耐药性的体外抑菌试验(ART)AST 目的：检出细菌对抗生素的耐药性，预测临床治疗结果。AST: (1)手工试验 1.纸片扩散法(S,I,R)2. 稀释法(MIC)3. E tes t(MIC)(2) 自动仪器 Vitek，Microscan，Phoenix(3 )分子试验PCR直接检测mecA基因(4)酶试验 Nitrocefin、ESBL 检测(一) 常规药敏试验1. 细菌耐药表型检测：判断细菌对抗菌药物的耐药性可根据NCCLS标准，通过 测量纸片扩散法、肉汤稀释法和E试验的抑菌圈直径、MIC值和IC值
2、获得。也 可通过以下方法进行检测：(1) 耐药筛选试验：以单一药物的单一浓度检测细菌的耐药性被称为耐药筛选 试验，临床上常用于筛选耐甲氧西林葡萄球菌、万古霉素中介的葡萄球菌、耐 万古霉素肠球菌及氨基糖苷类高水平耐药的肠球菌等。(2) 折点敏感试验：仅用特定的抗菌药物浓度(敏感、中介或耐药折点MIC), 而不使用测定MIC时所用的系列对倍稀释抗生素浓度测试细菌对抗菌药物的敏 感性，称为折点敏感试验。(3) 双纸片协同试验：双纸片协同试验是主要用于筛选产超广谱B-内酰胺酶 (ESBLs) 革兰阴性杆菌的纸片琼脂扩散试验。若指示药敏纸片在朝向阿莫西林/克拉维酸方向有抑菌圈扩大现象(协同)，说明测试菌
3、产生超广谱B-内酰胺 酶(4) 药敏试验的仪器化和自动化：全自动细菌鉴定及药敏分析仪如：Vitek-2、 BD-Pheonix、Microscan等运用折点敏感试验的原理可半定量测定抗菌药物的 MIC 值。2. B-内酰胺酶检测：主要有碘淀粉测定法(iodometric test)和头孢硝噻吩 纸片法(nitrocefin tes t)。临床常用头抱硝噻吩纸片法，B-内酰胺酶试验 可快速检测流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、卡他莫拉菌和肠球菌对青霉素的耐药 性。如B-内酰胺酶阳性，表示上述细菌对青霉素、氨苄西林、阿莫西林耐药； 表示葡萄球菌和肠球菌对青霉素(包括氨基、羧基和脲基青霉素)耐药。3耐药基因
4、检测：临床可检测的耐药基因主要有：葡萄球菌与甲氧西林耐药有 关的MecA基因,大肠埃希菌与B-内酰胺类耐药有关的blaTEM、blaSHV、blaOXA 基因，肠球菌与万古霉素耐药有关的vanA、vanB、vanC、vanD基因。检测抗菌 药物耐药基因的方法主要有：PCR扩增、PCR-RFLP分析、PCR-SSCP分析、PCR-线性探针分析、生物芯片技术、 自动DNA测序（二）特殊耐药机制的检测（1）耐甲氧西林葡萄球菌检测：对1ug苯唑西林纸片的抑菌圈直径W10皿， 或其MICM4 u g/ml的金黄色葡萄球菌和对1 u g苯唑西林纸片的抑菌圈直径W 17皿，或MICM0.5 u g/ml的凝
5、固酶阴性葡萄球菌被称为耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）。对MRS不论其体外药敏试验结果，所有的B-内酰胺类药物和B-内酰 胺/B-内酰胺酶抑制剂均显示临床无效；绝大多数的MRS常为多重耐药，耐药 范围包括氨基糖甙类、大环内酯类、四环素类等。（2）耐青霉素肺炎链球菌检测：当对1ug苯唑西林纸片抑菌圈直径20皿或 MIC0. 06ug/ml均应视为耐青霉素肺炎链球菌（PRSP）。临床治疗显示PRSP 对氨卞西林、氨卞西林/舒巴坦、头胞克肟、头胞唑肟，临床治疗疗效很差，但 应检测对头胞曲松、头胞噻肟和美洛培南等的MIC以判断是否对这些抗生素敏 感。（3）耐万古霉素肠球菌检测：肠球菌对30g万古霉素纸片抑
6、菌圈直径W14皿 或MICN32ug/ml被称为耐万古霉素肠球菌（VRE）。针对多重万古霉素药物目 前尚无有效治疗方法，但对青霉素敏感的VRE可用青霉素和庆大霉素联合治疗, 若对青霉素耐药而不是高水平耐氨基糖甙类可用壁霉素+庆大霉素。（4）产超广谱B-内酰胺酶的肠杆菌科细菌检测：超广谱B-内酰胺酶是一种 能水解青霉素、广谱头抱菌素及单胺类的酶，主要由克雷伯菌、肠杆菌等细菌 产生。当通过筛选法时对头抱泊肟、头抱他啶（10ug/片）抑菌圈W22皿或氨 曲南、头抱噻肟（30ug/片）W27皿的菌株经头抱他啶（30ug/片）、头抱他 啶/克拉维酸（30/10ug）；头抱噻肟（30g/片）、头抱噻肟/克拉维酸（30/10 u g）两组表型确证试验，其结果为两组中任何一组药物加克拉维酸与不加克拉 维酸的抑菌圈相比，增大值M5皿时判断为产ESBL菌株（图7-13）。产ESBL 克雷伯菌和大肠埃希菌不论其体外药物敏感试验结果如何，对青霉素、头抱菌 素和氨曲南治疗无效。（三）耐药流行病学分析抑菌圈分析、交叉耐药分析、耐药趋势分析、特殊耐药菌的检出率分析、耐药 率分析、耐药组合分析、用药量与细菌耐药的分析、耐药率与抗生素消耗量的 关系等等。Welcome ToDownload !欢迎您的下载，资料仅供参考！
细菌耐药的监测方法
