羧肽酶A--终极版ppt课件

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1、羧肽酶羧肽酶A A羧肽酶简介羧肽酶简介羧肽酶是一种羧肽酶是一种消化酶消化酶。可专一性地从。可专一性地从肽链肽链的的C C端端开始逐个降解，释放出游离氨基酸的开始逐个降解，释放出游离氨基酸的一类肽链外切酶。以一类肽链外切酶。以酶原酶原形式存在于生物形式存在于生物体内。体内。3羧肽酶羧肽酶羧肽酶羧肽酶C C：专门：专门水解水解C C端端倒数第倒数第二位是二位是ProPro形成形成的肽键的肽键羧肽酶羧肽酶B B：可以：可以切割切割C C端端的的LysLys或或ArgArg羧肽酶羧肽酶A A：切割：切割C C端除端除LysLys、ArgArg、ProPro的氨的氨基酸基酸羧肽酶羧肽酶：作：作用于任用于

2、任何一个何一个C-C-末端末端残基残基2022-12-26羧肽酶羧肽酶A A生理功能生理功能羧肽酶羧肽酶A A结构结构12羧肽酶羧肽酶A A金属配位金属配位环境环境3羧肽酶羧肽酶A A催化机理催化机理4CONTENTS目 录5羧肽酶羧肽酶A A（Carboxypeptidase A）分子量约为分子量约为34397D，由，由307个氨基酸残基构个氨基酸残基构成一条肽链。成一条肽链。=1.339/cm3，pI=6.0。大约含有大约含有38%螺螺旋和旋和17%折折叠片。叠片。外形紧密，外形紧密，是一个是一个5.0nm 4.2nm 3.8nm的椭圆形球的椭圆形球体。体。2022-12-26羧肽酶羧肽酶

3、A A（Carboxypeptidase ACarboxypeptidase A）一级结构7羧肽酶羧肽酶A A（Carboxypeptidase ACarboxypeptidase A）二级结构以及跟高级结构二级结构以及跟高级结构（软件示意）（软件示意）九个九个-螺旋，占蛋白质结构螺旋，占蛋白质结构35.83%；呈现筒形包含在蛋白质外侧，且在螺旋中每相隔呈现筒形包含在蛋白质外侧，且在螺旋中每相隔1-2个氨基酸残基便出现一个赖氨酸或者是其他个氨基酸残基便出现一个赖氨酸或者是其他的亲水性氨基酸；的亲水性氨基酸；九个九个-折叠，占蛋白质结构折叠，占蛋白质结构14.66%，位于蛋白质，位于蛋白质的内部

4、；的内部；一个二硫键，是半胱氨酸一个二硫键，是半胱氨酸138和和161位键合而成。位键合而成。羧肽酶羧肽酶A A（Carboxypeptidase A）更易于水解具有更易于水解具有芳香族侧链芳香族侧链和和大脂肪侧大脂肪侧链链的羧基端残基。比如酪氨酸、苯丙氨的羧基端残基。比如酪氨酸、苯丙氨酸等酸等.释放除释放除脯氨酸、羟脯氨酸、精氨酸和脯氨酸、羟脯氨酸、精氨酸和赖氨酸赖氨酸之外的所有之外的所有C C末端氨基酸末端氨基酸.910羧肽酶羧肽酶A A（Carboxypeptidase A）ZnZn2+2+与与His196His196，Glu72Glu72和和His69His69结合。结合。还有一个留还

5、有一个留给了水分子给了水分子或者羟基阴或者羟基阴离子。离子。11羧肽酶羧肽酶A A（Carboxypeptidase A）活性部位：活性部位：Glu270Glu270，Arg127Arg127、145145，ZnZn2+2+以及以及Tyr248Tyr248；水解一般分为四个步骤水解一般分为四个步骤步骤一：步骤一：酶的酶的Arg145Arg145残基的带正电的胍基和底物所带的负残基的带正电的胍基和底物所带的负电荷的碳末端静电作用相互吸引，底物进入酶空电荷的碳末端静电作用相互吸引，底物进入酶空腔口袋之中；腔口袋之中；步骤二：步骤二：氢键的形成：底物敏感肽键上氢键的形成：底物敏感肽键上-NH-NH-

6、基上氮原子与基上氮原子与酶得酶得Tyr248Tyr248的的-OH-OH之间形成氢键；之间形成氢键；步骤三：步骤三：底物肽键上的羰基挤走和锌配位的水分子而与锌底物肽键上的羰基挤走和锌配位的水分子而与锌离子配位；离子配位；锌离子配位后使羰基极化，使羰基碳原子电正性锌离子配位后使羰基极化，使羰基碳原子电正性更强，更加易于受到亲核进攻更强，更加易于受到亲核进攻步骤四：步骤四：底物末端羰基碳原子通过插入一个水分子与酶的底物末端羰基碳原子通过插入一个水分子与酶的Glu270Glu270侧链以氢键连接。侧链以氢键连接。16羧肽酶羧肽酶A A（Carboxypeptidase A）被裂解的肽键的羰基指向被裂

7、解的肽键的羰基指向ZnZn2+2+，使，使C=OC=O键比正常的键比正常的更加极化，使得羰基更加极化，使得羰基C C原子更易接受亲核进攻。原子更易接受亲核进攻。ZnZn2+2+处在非极性环境促进了诱导偶极子的产生，这处在非极性环境促进了诱导偶极子的产生，这增加了它的有效电荷。增加了它的有效电荷。ZnZn2+2+使肽键产生张力作用，从而促进底物水解使肽键产生张力作用，从而促进底物水解17Zn能否被同晶置换？实验表明：实验表明：Zn2+能够被能够被Co2+、Fe2+置换而保持酶的活性。置换而保持酶的活性。被被Co2+置换时，酶的活性得到进一步增强；被置换时，酶的活性得到进一步增强；被Mn2+、Cd2+置换时，酶的活性下降。置换时，酶的活性下降。Ni2+、Pb2+、Hg2+置换时仅仅保置换时仅仅保持部分活性。持部分活性。没有金属辅基的脱辅酶无活性。没有金属辅基的脱辅酶无活性。摘自：人羧肽酶A1_抗精浆单链抗体_肽酶A1融合蛋白的表达及活性测定_郑佩婵18谢谢观看！谢谢观看！Thank youThank you敬请提问.