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1、枸杞子多糖提取枸杞子为茄科植物枸杞LyciumchinenseMill 的成熟果实，是我国传统的滋补中药材。本草纲目 中记载枸杞子具有坚筋骨、补精气诸不足、明目安神、令人长寿等功效1。 近年来的研究发现，植物多糖具有抗肿瘤、增强机体免疫力等功效，已是当前 国内外研究的热点25。目前人们对枸杞子多糖进行了较广泛的研究，发现枸杞多糖具有增强机体 免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降血脂、降血糖、抗疲劳、护肝、防辐射、抗缺氧 等功效68，同时对多糖的分离与纯化进行了一些研究9，10，但对提 取的工艺条件研究较少。本文对影响枸杞子多糖提取因素进行了正交实验，优 选出最佳的枸杞子多糖提取的工艺参数，同时进行了枸杞
2、子多糖的体外抗氧化 活性研究，以期为研究开发枸杞子多糖新的药物功能及保健食品提供基础数 据。1 材料与方法仪器与试剂上海尤尼柯仪器有限公司产WFJ2100型分光光度计；上海安亭精密仪器厂产 TDL80-28 台式离心机；所用试剂均为分析纯试剂。药材枸杞子，原产宁夏，购于大连开发区。枸杞子多糖的提取枸杞子多糖提取的工艺流程及方法在参考已有其它种类多糖提取方法 11的基础上，利用水提的方法，采用正交实验对枸杞子多糖的提取条件进 行优化，以确立最佳工艺条件。枸杞子多糖提取的工艺流程见图1。图1枸杞子提取工艺流程示意图准确称取已于70C烘干并粉碎的枸杞子2g于三角瓶中，按设计好的正交实 验条件在恒温水
3、浴中进行提取，然后将其以4000r/min离心18min，得上清液， 经浓缩，再加入5倍体积的乙醇，摇匀后，在4C冰箱中放置过夜，以 4000r/min 离心 20min。沉淀经干燥后得到粗多糖。采用硫酸苯酚法11测定所提取的枸杞子 多糖中多糖含量，然后根据所用枸杞子的质量计算出枸杞子中多糖得率。正交实验选用L9正交实验，确定提取枸杞子多糖的最佳工艺参数，水平因 素见表 1。表1正交水平多糖含量测定采用硫酸-苯酚法测定提取的枸杞子多糖含量11，葡萄糖 标准曲线的相关系数为，线性方程为 Y=。由标准曲线查出样品中多糖浓度，由下列公式计算样品枸杞子中多糖含 量。多糖含量二样品浓度x稀释倍数x样品体
4、积多糖试样质量x100%枸杞子多糖得率二计算测得多糖的质量枸杞子样品质量=/x100%超氧阴离子体系采用邻苯三酚自氧化法，在一定条件下，邻苯三酚能够自 氧化产生02-,加入一定量的多糖液可对 02-产生不同的抑制作用，进而导致光 吸收值的变化。取/缓冲液5ml于试管中，分别加入1ml 定浓度的各级多糖试 样液，置于25C水浴中预热20min，再加3mmol/L邻苯三酚，混匀，于25C水 浴中准确反应4min，立即用浓终止反应，并在320nm处测吸光度。空白对照组 以相同体积Tris-HCI代替样品，每个试管做3个平行，取平均值，按下式计算清 除率。清除率E=/A对照x100%2 结果与讨论枸杞
5、子多糖提取正交实验结果正交实验提取的枸杞子多糖得率见表2。表2正交实验结果根据表2的极差分析可见，各因素对多糖得率的影响顺序为：BCA，说 明在各因素中，水提温度对多糖提取率影响最大，然后是提取时间，最后是固 液比。因素A, B以第2水平，C以第3水平为最好。因此，可确定枸杞多糖的 提取优化条件为A2B2C3，即最佳提取温度为80C，最佳提取时间为，最佳固液 比为1 : 30。多糖提取次数实验称取枸杞子2g，按正交实验优选的最佳工艺条件分别提 取3次。实验结果见表3 。表3不同提取次数实验结果 由表3可以看出，第1次和第2次提取多糖得率较多，而第3次提取多糖 得率较少，多糖得率不足%，所以提取
6、次数可选为2次。体外抗氧化活性 羟基自由基清除测定枸杞多糖对羟基自由基的清除能力，同时与相应浓度的维生素C作对照，实验结果见图1。图1枸杞子多糖与维生素C清除羟基自由基结果由图 1 可见，对羟基自由基的清除作用，枸杞多糖的清除效果要好于等质 量浓度的维生素C，当多糖浓度达到昭/ml时，其清除率达到%,维生素C的清除 率为。超氧阴离子清除测定枸杞多糖对超氧阴离子的清除能力，同时与等质量浓 度的维生素C的对照。实验结果见图2。由图2可知，枸杞子多糖对超氧阴离子自由基的清除作用不明显，在实验 浓度范围内其清除率随着多糖浓度的增加非常缓慢，维生素C的清除效果明显 高于枸杞子多糖。当多糖浓度为|ig/m
7、l和|ig/ml时，其对超氧阴离子自由基的清除率为 和%，相应浓度维生素 C 的清除率分别为和。图2枸杞子多糖与维生素C清除超氧阴离子结果3 结论由正交实验可见，在影响枸杞子多糖得率3 个主要因素中，温度的影响最 显著，其次为提取时间，最后为固液比。由正交实验可知,枸杞子多糖水浸提法 提取的最佳工艺条件为提取温度80C，固液比1： 30,提取时间，提取次数为2 次。在此条件下进行实验，枸杞子多糖得率为%。对枸杞子多糖抗氧化活性研究 表明，枸杞子多糖对羟基自由基的清除效果较好，其清除率高于维生素C,而对 超氧阴离子自由基的清除率低于维生素C,在实验浓度范围内，其清除能力不随 多糖浓度的增加而显著增高。枸杞子多糖提取
枸杞子多糖提取
