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1、 1958，美国 斯图尔德已分化的细胞具有发育成完整个体的潜能已分化的细胞具有发育成完整个体的潜能细胞全能性细胞全能性细胞植株离体离体组织培养组织培养 在人工培养基上，离体培养植物的器在人工培养基上，离体培养植物的器官、组织、细胞，并使其生长、增殖、分官、组织、细胞，并使其生长、增殖、分化以及再生长成植株的技术。化以及再生长成植株的技术。课题课题1 菊花的组织培养菊花的组织培养什么是细胞分化？什么是细胞分化？愈伤组织是怎样形成的？有什么特点？愈伤组织是怎样形成的？有什么特点？脱分化、再分化？脱分化、再分化？一、植物组织培养的基本过程一、植物组织培养的基本过程分化原因是什么？分化原因是什么？在特
2、定时间和空间条件下，基因在特定时间和空间条件下，基因的选择性表达。的选择性表达。思考：思考：一植物组织培养的基本过程一植物组织培养的基本过程1、细胞分化、细胞分化 个体发育中细胞在形态、结构和生理功能上个体发育中细胞在形态、结构和生理功能上出现稳定性差异的过程出现稳定性差异的过程 离体器官、离体器官、组织、细胞组织、细胞脱分化脱分化愈愈伤伤组组织织再分化再分化植植物物体体植物组织培养的基本过程植物组织培养的基本过程根根芽芽有丝分裂细胞排列疏松无规则疏松无规则高度液泡化液泡化无定形无定形状态的薄壁薄壁细胞。愈伤组织特点愈伤组织特点植物组织培养过程示意图植物组织培养过程示意图 思考：上面的示意图中
3、还有什么地方不够完善的？思考：上面的示意图中还有什么地方不够完善的？没有灭菌处理，试管也没有做密封等。没有灭菌处理，试管也没有做密封等。（二）影响植物组织培养的因素（二）影响植物组织培养的因素影响组织培养的因素？影响组织培养的因素？菊花组织培养的过程，及注意的问题？菊花组织培养的过程，及注意的问题？n1、材料的选取、材料的选取n 不同植物的组织培养难度不同不同植物的组织培养难度不同n 同一种植物的不同组织培养难度不同同一种植物的不同组织培养难度不同三、影响植物组织培养的因素：三、影响植物组织培养的因素：未开花植物的茎上未开花植物的茎上部新萌生的侧枝部新萌生的侧枝MS固体培养基成分及比例固体培养
4、基成分及比例同微生物培养基相比，同微生物培养基相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？培养基的配方有哪些明显的不同？MS培养基：无机营养为主，蔗糖为碳源、常加激素（生长素）培养基：无机营养为主，蔗糖为碳源、常加激素（生长素）成分大量元素 硝酸钾 KNO3 、硝酸铵 NH4NO3 磷酸二氢钾 KH2PO4硫酸镁MgSO4.7H2O 氯化钙 CaCl2.2H2O微量元素 碘化钾 KI 硼酸 H3BO3硫酸锰 MnSO4.4H2O硫酸锌 ZnSO4.7 H2O钼酸钠 Na2MoO4.2 H2O硫酸铜 CuSO4.5 H2O氯化钴 CoCl2.62铁盐乙二胺四乙酸二钠 Na2.EDTA硫酸亚铁 FeS
5、O24.7H2O有机成分肌醇、甘氨酸、盐酸、硫胺素 VB1、盐酸吡哆醇 VB6、烟酸 VB5 或 VPP蔗糖 sucrose 琼脂 agar三、影响植物组织培养的因素：三、影响植物组织培养的因素：2、培养基的配制、培养基的配制(MS培养基培养基)大量元素：大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素：微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co 有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等 植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等3、激素配比对组织培养的影响、激素配比对组织培养的影响浓度浓度、先后
6、顺序先后顺序、用量的比例用量的比例使用顺序使用顺序 实验结果实验结果 先生长素先生长素，后细胞分裂素后细胞分裂素 易分裂但不分化易分裂但不分化 先细胞分裂素，先细胞分裂素，后生长素后生长素 既分裂也分化既分裂也分化 同时使用同时使用 分化频率提高分化频率提高 用量比例用量比例生长素生长素/细胞分裂素细胞分裂素结果结果 比值比值高高时时 促根分化促根分化比值低时比值低时 促芽分化促芽分化比值适中比值适中 促进愈伤组织生长促进愈伤组织生长 4、pH、温度、光照、温度、光照（菊花组培）（菊花组培）pH=5.8 温度控制在温度控制在1822 每日光照每日光照12h5、消毒、消毒在培养的整个过程中，都需
7、要是一个无菌环境在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境制备制备MS固固体培养基体培养基外植体消毒外植体消毒 接种接种 培培 养养栽栽 培培四、实验操作四、实验操作 移移 栽栽冲洗冲洗酒精酒精无菌水冲洗无菌水冲洗氯化汞氯化汞无菌水冲洗至少三无菌水冲洗至少三次之上次之上配制各种母液配制各种母液配制培养基配制培养基灭毒灭毒1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯、接种的无菌操作（酒精、酒精灯灼烧）灼烧）4、无菌箱中的培养；、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。、移栽
8、到消过毒的环境中生存一段时间。在整个操作过程中，是如何来实现在整个操作过程中，是如何来实现无菌无菌环境的？环境的？本课题内容小结菊花组织培养基础知识基础知识实验操作实验操作植物体的组植物体的组织培养织培养影响组织培养影响组织培养的因素的因素细胞分化细胞分化细胞全能性细胞全能性组织培养过程组织培养过程营养营养激素激素环境条件环境条件MS固体培养基制备固体培养基制备外植体消毒外植体消毒接种接种培养培养移栽移栽栽培栽培菊菊花花的的组组织织培培养养再分化再分化材料性质、营养物质、材料性质、营养物质、调节物质、环境条件调节物质、环境条件外植体的消毒外植体的消毒接种接种基本原理基本原理:细胞的全能性细胞的全能性基本过程基本过程:脱分化脱分化愈伤组织愈伤组织影响因素：影响因素：操作流程：操作流程：配制配制MS固体培固体培养基养基培养培养移栽移栽栽培栽培
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