血液学血细胞化学染色

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1、第三章 血细胞化学染色 一、概述一、概述（一）研究对象（一）研究对象 外周血和骨髓外周血和骨髓新鲜涂片新鲜涂片单个细胞中单个细胞中的化学物质：的化学物质：酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等 （二）临床应用（二）临床应用 1.1.鉴别各类血细胞鉴别各类血细胞 2.2.辅助血液系统等疾病诊断和鉴别诊断辅助血液系统等疾病诊断和鉴别诊断 3.3.观察疾病疗效和判断预后观察疾病疗效和判断预后 二、常用细胞化学染色方法 过氧化物酶染色过氧化物酶染色 中性粒细胞碱性磷酸酶染色中性粒细胞碱性磷酸酶染色 过碘酸过碘酸-雪夫反应雪夫反应 -醋酸萘酚酯酶染色醋酸萘酚酯酶染色 铁

2、染色铁染色 过氧化物酶染色过氧化物酶染色 （peroxidase,POXperoxidase,POX）POX 新生态氧新生态氧 OO过氧化氢过氧化氢（基质中）（基质中）四甲基联苯胺四甲基联苯胺 （无色）（无色）联苯胺蓝（蓝色）联苯胺蓝（蓝色）亚硝基铁氰化亚硝基铁氰化钠钠 蓝色颗粒蓝色颗粒（浆内酶部位）（浆内酶部位）粒、单核粒、单核细胞胞浆细胞胞浆【原理】【原理】【结果判断】【结果判断】-、+、+、+、+弱阳性弱阳性 颗粒小，分布稀疏颗粒小，分布稀疏阳性阳性 颗粒稍粗，分布较密集颗粒稍粗，分布较密集强阳性强阳性 颗粒粗大，密布于整个胞浆颗粒粗大，密布于整个胞浆【正常血细胞染色反应】【正常血细胞染

3、色反应】1.1.粒细胞系统粒细胞系统 POXPOX主要存在于粒系细胞中。主要存在于粒系细胞中。分化差的原粒细胞阴性分化差的原粒细胞阴性;分化好的原粒细胞至中性成熟粒细胞各分化好的原粒细胞至中性成熟粒细胞各阶段均呈阳性，阶段均呈阳性，阳性反应程度随细胞的成阳性反应程度随细胞的成熟逐渐增强。熟逐渐增强。2.2.单核细胞系统单核细胞系统 阴性或弱阳性阴性或弱阳性 3.3.淋巴细胞系统淋巴细胞系统 红细胞系统红细胞系统 巨核细胞系统巨核细胞系统 阴性阴性 浆细胞浆细胞 组织细胞组织细胞 【临床评价】【临床评价】急性髓细胞白血病急性髓细胞白血病 急性淋巴细胞白血病急性淋巴细胞白血病 鉴别鉴别 1.1.急

4、性髓细胞白血病急性髓细胞白血病 （1 1）急性粒细胞白血病）急性粒细胞白血病 阳性阳性反应反应 （2 2）急性单核细胞白血病）急性单核细胞白血病 弱阳性弱阳性反应反应 2.2.急性淋巴细胞白血病急性淋巴细胞白血病 阴性反应或阳性率阴性反应或阳性率 3%3%(残留原粒细胞残留原粒细胞)中性粒细胞碱性磷酸酶染色中性粒细胞碱性磷酸酶染色 （neutrophilic alkalineneutrophilic alkaline phosphatase phosphatase，NAPNAP）磷酸萘酚钠磷酸萘酚钠 （基质中）（基质中）中性粒细胞中性粒细胞胞浆中胞浆中NAPNAP磷酸钠磷酸钠-萘酚萘酚 重氮盐

5、重氮盐（坚牢蓝盐（坚牢蓝盐RRRR）紫黑色偶氮染料紫黑色偶氮染料 （胞浆中）（胞浆中）水解水解【原理】【原理】KaplowKaplow偶氮偶联法偶氮偶联法【结果判断结果判断】胞浆中有紫黑色颗粒为阳性胞浆中有紫黑色颗粒为阳性(+(+）【正常血细胞染色反应】【正常血细胞染色反应】1.1.中性成熟粒细胞中性成熟粒细胞阳性反应阳性反应 其他细胞呈阴性反应其他细胞呈阴性反应 2.NAP2.NAP积分值积分值 计数计数100100个成熟中性粒细胞（杆状个成熟中性粒细胞（杆状和分叶）和分叶）,分别记录其分级情况：分别记录其分级情况：(-)0 (-)0分分 (+)1(+)1分分 (+)2(+)2分分 (+)3

6、(+)3分分 (+)4(+)4分分 阳性率阳性率 全部阳性反应细胞之和全部阳性反应细胞之和 积分值积分值 各种阳性程度细胞的分值之和各种阳性程度细胞的分值之和 3.3.参考值参考值 积分值积分值 35-7035-70分分 (各实验室参考值不同各实验室参考值不同)【临床评价】【临床评价】（1 1）细菌性感染与病毒性感染）细菌性感染与病毒性感染 （尤其是化脓性感染）（尤其是化脓性感染）明显增加明显增加 无明显变化无明显变化(2(2）类白血病反应与慢性粒细胞白血病）类白血病反应与慢性粒细胞白血病 明显增加明显增加 明显下降且常为零分，明显下降且常为零分，缓解时又上升到正常缓解时又上升到正常过碘酸过碘

7、酸-雪夫反应雪夫反应 (糖原染色糖原染色 )（periodic acid-Schiff reactionperiodic acid-Schiff reaction，PASPAS）双醛基双醛基过碘酸过碘酸雪夫试剂中雪夫试剂中的无色品红的无色品红 紫红色化合物紫红色化合物 (附于含多糖类附于含多糖类 的胞浆内的胞浆内)乙二醇基乙二醇基(多糖类物质含有多糖类物质含有)氧化氧化【原理】【原理】【结果判断】【结果判断】阳性阳性 胞浆内红色阳性物呈弥散状、颗胞浆内红色阳性物呈弥散状、颗 粒状或块状。粒状或块状。阴性阴性 胞浆内无色或无颗粒胞浆内无色或无颗粒,核淡绿。核淡绿。【正常血细胞染色反应正常血细胞染

8、色反应】1.1.粒细胞系统粒细胞系统 分化差的原粒细胞为阴性；分化差的原粒细胞为阴性；分化好的原粒细胞至中性分叶核粒细胞分化好的原粒细胞至中性分叶核粒细胞 各阶段均呈阳性反各阶段均呈阳性反 应，应，阳性程度随细阳性程度随细 胞的成熟逐渐增强。胞的成熟逐渐增强。阳性物呈细颗粒、阳性物呈细颗粒、均匀红色。均匀红色。2.2.红细胞系统红细胞系统 阴性阴性 3.3.单核细胞系统单核细胞系统 绝大多数阳性呈细颗粒，有时分布于绝大多数阳性呈细颗粒，有时分布于细胞边缘的阳性颗粒较粗大。细胞边缘的阳性颗粒较粗大。4.4.淋巴细胞系统淋巴细胞系统 大多数淋巴细胞呈大多数淋巴细胞呈阴性；阴性；少于少于20%20%

9、淋巴细胞呈粗颗粒状或块状淋巴细胞呈粗颗粒状或块状阳性。阳性。5.5.巨核细胞系统巨核细胞系统 呈颗粒状或块状呈颗粒状或块状阳性阳性（含血小板）。（含血小板）。【临床评价】【临床评价】1.1.红血病或红白血病红血病或红白血病 幼红细胞阳性幼红细胞阳性 巨幼细胞性贫血巨幼细胞性贫血 幼红细胞阴性幼红细胞阴性 3.3.鉴别急性白血病类型鉴别急性白血病类型（1 1）急性淋巴细胞白血病）急性淋巴细胞白血病 阳性率阳性率20%-80%20%-80%，呈红色粗颗粒状，呈红色粗颗粒状或块状。或块状。（2 2）急性粒细胞白血病）急性粒细胞白血病 少数阳性，呈少数阳性，呈细颗粒状或均匀红色。细颗粒状或均匀红色。（

10、3 3）急性单核细胞白血病）急性单核细胞白血病 可阳性，呈可阳性，呈细颗粒状、弥散分布细颗粒状、弥散分布，有时，有时胞质边缘处颗粒较粗大。胞质边缘处颗粒较粗大。-醋酸萘酚酯酶染色醋酸萘酚酯酶染色（-naphthol acetate esterase-naphthol acetate esterase，-NAE-NAE）-醋酸萘酚酯酶醋酸萘酚酯酶 （细胞内）（细胞内）-醋酸萘酚醋酸萘酚 （基质液中）（基质液中）-萘酚萘酚 重氮盐重氮盐（坚牢蓝（坚牢蓝B B）胞浆不溶性灰黑色胞浆不溶性灰黑色 或棕黑色沉淀或棕黑色沉淀水解水解【原理】【原理】【结果判断】【结果判断】胞浆内有灰黑色或棕黑色弥散性颗粒胞

11、浆内有灰黑色或棕黑色弥散性颗粒状沉淀为阳性。状沉淀为阳性。氟化钠抑制试验氟化钠抑制试验 在基质液中加入适量在基质液中加入适量NaF,NaF,其余染色方其余染色方法同上。法同上。两种方法染色后用油镜计数两种方法染色后用油镜计数100100或或200200个个被检细胞，分别计算出抑制前和抑制后被检细胞，分别计算出抑制前和抑制后的阳性率或阳性积分。的阳性率或阳性积分。氟化钠抑制率氟化钠抑制率=抑制前阳性率或阳性积分抑制前阳性率或阳性积分 -抑制后阳性率或阳性积分抑制后阳性率或阳性积分抑制前阳性率或阳性积分抑制前阳性率或阳性积分100%【正常血细胞染色反应】【正常血细胞染色反应】1.1.单核细胞系统单

12、核细胞系统 原始单核细胞原始单核细胞 分化差分化差 阴性阴性 分化好分化好 阳性阳性 幼稚及成熟幼稚及成熟单核细胞单核细胞 阳性阳性被氟化钠抑制被氟化钠抑制 2.2.粒细胞系统粒细胞系统 原粒细胞原粒细胞阴性或弱阳性阴性或弱阳性 以下阶段为以下阶段为弱阳性弱阳性 3.3.淋巴细胞系统淋巴细胞系统 多数多数阴性阴性，少数，少数弱阳性弱阳性 不被氟化钠抑制不被氟化钠抑制【临床评价】【临床评价】急单急单 急粒急粒 急性早幼粒急性早幼粒 急粒单急粒单 急淋急淋-NAE-NAE +或或 -或或 +阳性阳性 -+弱弱+NaF NaF 被抑制被抑制 不被不被 不被抑制不被抑制 部分被抑制部分被抑制 抑制抑制

13、 部分未被抑制部分未被抑制主要用于鉴别急性白血病类型主要用于鉴别急性白血病类型 铁铁 染染 色色 （ferric stainferric stain）亚铁氰化钾亚铁氰化钾 亚铁氰化铁亚铁氰化铁(蓝色沉淀在含蓝色沉淀在含FeFe部位部位)铁铁酸性环境酸性环境普鲁士蓝普鲁士蓝 反应反应 骨髓小粒中的含骨髓小粒中的含FeFe血黄素（细胞外铁）血黄素（细胞外铁）骨髓中贮存铁骨髓中贮存铁 幼红细胞内的幼红细胞内的FeFe（细胞内铁）（细胞内铁）原理原理【结果判断】【结果判断】幼红细胞核染色为鲜红色幼红细胞核染色为鲜红色,铁粒呈铁粒呈蓝绿色。蓝绿色。细胞外铁细胞外铁 低倍镜低倍镜观察涂片尾部和骨髓小粒观察

14、涂片尾部和骨髓小粒,细细胞外铁位于幼红细胞外或骨髓小粒巨噬胞外铁位于幼红细胞外或骨髓小粒巨噬细胞浆内，呈细胞浆内，呈蓝色颗粒状、小珠状或团蓝色颗粒状、小珠状或团块状。块状。再用再用油镜油镜判断阳性程度，根据铁量判断阳性程度，根据铁量多少分五级多少分五级:（-）（+）（+）（+）（+）细胞内铁细胞内铁 存在于中幼红细胞、晚幼红细胞及存在于中幼红细胞、晚幼红细胞及成熟红细胞中的铁。成熟红细胞中的铁。油镜油镜下计数下计数100100个中幼红细胞和晚幼个中幼红细胞和晚幼红细胞，记录胞浆中含有蓝色颗粒细胞红细胞，记录胞浆中含有蓝色颗粒细胞的百分率。的百分率。根据细胞内铁颗粒的数目、大小、根据细胞内铁颗粒

15、的数目、大小、染色深浅和颗粒分布情况染色深浅和颗粒分布情况,将铁粒幼将铁粒幼红细胞分为四型红细胞分为四型:型型 型型 型型 型型细胞内铁细胞内铁1.1.细胞外铁细胞外铁 +，约，约2/32/3人为人为+，约，约1/31/3人为人为+。2.2.细胞内铁细胞内铁 阳性率阳性率19%19%44%44%型为主，少数为型为主，少数为型（无环形铁粒幼红细胞型（无环形铁粒幼红细胞和铁粒红细胞）和铁粒红细胞）【参考值】【参考值】【临床评价】【临床评价】1.1.诊断缺铁性贫血、指导铁剂治疗诊断缺铁性贫血、指导铁剂治疗细胞内、外铁明显减低甚至消失，经铁剂细胞内、外铁明显减低甚至消失，经铁剂治疗有效后，其细胞外铁、内铁先后增多。治疗有效后，其细胞外铁、内铁先后增多。2.2.诊断铁粒幼细胞性贫血诊断铁粒幼细胞性贫血 铁粒幼红细胞、环形铁粒幼红细胞均增铁粒幼红细胞、环形铁粒幼红细胞均增多，细胞外铁也常明显增多。多，细胞外铁也常明显增多。1 1掌握常用细胞化学染色方法的结果掌握常用细胞化学染色方法的结果判断和临床意义。判断和临床意义。2 2熟悉常用细胞化学染色方法的原理熟悉常用细胞化学染色方法的原理。本章目的要求本章目的要求 完完