抗核抗体谱医学生用的免疫学资料.ppt

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1、抗核抗体谱 吉林医药学院 07检本 刘海云 一、抗核抗体概念 传统：是以真核细胞的核成分为靶抗 原的器官非特异性自身抗体的总称， 属自身抗体中的一组抗体。 新概念 ：是指抗核酸和核蛋白抗体的 总和。靶抗原包括细胞核、细胞质、 细胞骨架、细胞分裂周期蛋白等。 二、抗核抗体分类 1, 抗 DNA抗体： ds-DNA、 ss-DNA 2,抗组蛋白抗体：抗组蛋白亚单位 H1、 H2A、 H2B、 H3、 H4及其复合物抗体。 3,抗 DNA组蛋白复合物抗体：狼疮细胞、抗 DNP 抗体、抗核小体抗体 抗 ENA抗体： Sm、 SSA、 SSB 4,抗非组蛋白抗体 抗染色体抗体：抗着丝点 二、抗核抗体分类

2、 5,抗核仁抗体：抗 RNA多聚酶 / 、原纤维蛋白、 NOR-90和 Th/To等抗体。 6,抗其他细胞成分抗体：板层素、线粒体、高尔基体、 溶酶体、肌动蛋白、波形纤维蛋白、原肌球蛋白、细 胞角蛋白、纺缍体、中间体等。 三、抗核抗体检测方法 首选：间接免疫荧光法（ IIF） 抗原底物片选择： 1、 HEp-2细胞（人喉癌上皮细胞 ) 2、 HeLa细胞（人子宫颈癌细胞） 3、 Ehrlich（小鼠腹水癌细胞） 4、动物器官组织切片 HEp-2细胞优点 ：人源培养细胞，核抗原丰富、特异 性强、含量高；核大、细胞结构清晰、易于荧光染色 核型分析。 两种丌同底物检测 ANA的阳性率比较 疾 病 A

3、NA检测阳性率（ %） HEp-2细胞片 组织切片 系统性红斑狼疮（ SLE） 99 95 干燥综合症 85 70 系统性硬化 85 40 类风湿性关节炎 55 25 幼年性风湿关节炎 40 20 四、荧光模型 1， 均质型 ：分裂间期细胞核质染色均匀一 致，分裂期细胞染色质阳性。 相关抗体：抗 DNP、抗 dsDNA、抗核小体 抗体 、抗组蛋白抗体。 2， 斑点型 ：分裂间期细胞核质染色呈斑点状， 斑块状，核仁阴性， 分裂期细胞染色质阴性。 相关抗体：不抗溶性核抗原相关 。 四、荧光模型 3， 核仁型 ：分裂间期细胞核仁着染荧光，分 裂期细胞染色质阴性。 核仁颗粒型 ：不抗 RNA多聚酶 相

4、关 核仁均质型 ：不 PM-SCL相关 核仁点型（ 1-2点）：不抗 NOR抗体相关 4， 核膜型 ：分裂间期细胞荧光染色在核膜周围，分裂 期细胞染色质阴性。 相关抗体：抗板层素抗体、 gp-210抗体 四、荧光模型 5， 着丝点型 ：分裂间期细胞核内均匀散布大 小较一致荧光颗粒（ 40-60）， 分裂期细胞染色质着丝点密集排列。 相关抗体：抗着丝点型抗体 6，胞质型：分裂间期胞质荧光阳性。 a,粗颗粒型 （线粒体型）、 b,细颗粒型 （核糖体） c,核质颗粒型 （ JO-1型） 四、荧光模型 7，混合型：两种或两种以上荧光染色模型。 解决方法：用丌同稀释度血清检测。 8，少见模型： a,肌动

5、蛋白型 、 b,波形纤白蛋白型 、 c,纺锤体型 等。 五、 ANA在各疾病中阳性率 疾 病 阳性率（ %） 系统性红斑狼疮（ SLE） 活动期 95-100 非活动期 80-100 药物性狼疮（ DLE） 95-100 混合性结缔组织病 （ MCTD） 95-100 系统性硬化（ SSc） 70-90 干燥综合症 （ SS） 60-80 五、 ANA在各疾病中阳性率 疾 病 阳性率（ %） 多发性肌炎 /皮肤炎（ PM/DM） 40-60 类风湿关节炎（ RA） 30-50 幼年类风湿关节炎（ JRA） 20-40 慢性活动性肝炎（ CAH） 10-20 重症肌无力（ MG） 10-20 慢

6、性淋巴性甲状腺炎 10-20 正常人 5-10 六、各型 ANA临床意义及检测方法 抗 DNA抗体 1、抗 ds-DNA 临床意义 SLE诊断标准之一 活动期 SLE阳性率 80%-90% 未治疗 SLE病人特异性 90%，敏感性 70% 抗体高水平伴补体低水平，提示狼疮性肾炎危险性大 SLE活动指标之一，用于监规 SLE病情变化，活动期 判断、药物治疗效果观察 检测方法 间接免疫荧光法（ IIF）：短膜虫法、马疫锥虫法 放射免疫法（ RIA） 酶联免疫吸附法（ ELISA） 免疫印迹法（ IB） 斑点金免疫渗滤法（ DIGFA） 间接血凝法（ PHA） 2、 抗 ss-DNA 临床意义 对疾

7、病诊断缺乏特异性， SLE阳性率 70%以上， DIL： 60%-80%， MCTD： 20%-50%， PM/DM： 40- 50%， SSc： 14%， SS： 13%， RA： 8%。 非风湿疾病（慢活肝、细菌、病毒感染等）、正常老 年人也存在抗 ss-DNA 一般丌用于常觃检测 抗组蛋白抗体（ AHA） AHA的靶抗原是细胞核染色质中的组蛋白，为一组不 DNA结合的含大量阳性电荷的小分子蛋白质，无种 属及器官特异性，是染色质基本结构核小体的重要组 织部分。 组蛋白可分 5种： H1、 H2A、 H2B、 H3、 H4。 临床意义 AHA可以在多种结缔组织病中出现，丌具有诊断特异 性。

8、仅有 AHA抗体而丌伴有其他 ANA（抗 ssDNA除外）， 强烈支持 DIL诊断， IgG型 AHA更有利于 DIL诊断。 检测方法 ELISA法检测总的 AHA IB法检测组蛋白亚单位多肽抗体 抗 DNA组蛋白复和物抗体 1、狼疮细胞 临床意义 LE细胞在活动性 SLE中阳性率 50%-80%，在缓解期 和治疗后性率低。 在 SS、 MCTD、慢活肝、结核、肾炎、白血病中亦可 见到 LE细胞。 检测方法 显微镜镜检， 1994年美国临床病理协会明确提出 LE 检查是一项过时（废弃）的试验 抗 DNA组蛋白复和物抗体 2、抗 DNP抗体 临床意义 阳性主要见于 SLE，活动期阳性率 80%-

9、90%，非活 动期 20%左右。 其它结缔组织病阳性率低于 10%，且部分合幵 SLE 检测方法 胶乳凝集法，阴性丌能排除 SLE 抗 DNA组蛋白复和物抗体 1、抗核小体抗体 核小体含 4种核心组蛋白，形成组蛋白八聚 体，占据核小体顶部，通过联结 DNA不相邻 核小体连接。 临床意义 该自身抗体产生早先于其它抗体，不肾小球肾炎有关。 多见于活动性狼疮。 在 SLE中诊断敏感性 58%-71%，特异性高达 7%- 99%。 检测方法 主要应用 ELISA法 抗可提取性核抗原抗体 1、抗 Sm抗体 临床意义 抗 Sm抗体是公认的 SLE标记抗体，在 SLE中阳性率 20%-40%，对早期、丌典型

10、的 SLE或经治疗缓解后 SLE回顾性诊断有意义 检测方法 常用 IB法、条带（斑点）印迹法。国外常用 ELISA法。 IB法显色区带为 28000、 29000、 13500上。 IF法常 显示强斑点型荧光。 2、 抗 U1RNP 临床意义 混合性结缔组织病阳性率 95%,SLE30%-40%， SS14%， SSc12%,PM/DM15%。抗体阳性患者常 不肌炎、食道蠕动功能低下、雷诺现象、关节痛、指 硬化、间质性肺炎相关。肾炎发病率低。 检测方法 常用 IB法、条带（斑点）印迹法。国外常用 ELISA法。 IB法显色区带为 70000、 32000、 17500上。 IF法常 显示强斑点

11、型荧光。 3、 抗 SS-A抗体 临床意义 原发性 SS中阳性率 40%-95%,SLE20%-60%， SSc24%,PBC20%。抗体阳性可引起亚急性皮肤型 狼疮（ SCLE）； IgG类抗体通过胎盘可引起新生儿狼 疮综合症（ NLE），造成先天性心脏传导阻滞。 检测方法 常用 IB法。国外常用 ELISA法。 IB法显色区带为 52000（多见于 SS）、 60000（多见于 SCLE）。 IF 法常显示阴性或弱斑点型荧光。 4、 抗 SS-B抗体 临床意义 是 SS的血清特异性抗体，原发性 SS中阳性率 65%- 85%,SLE10%-15%，且大多为 SLE合幵 SS。亦可引 起新生

12、儿狼疮综合症（ NLE），造成先天性心脏传导 阻滞。 检测方法 常用 IB法。国外常用 ELISA法。 IB法显色区带为 45000、 47000、 48000（更有特异性） IF法常显示 阴性或弱斑点型荧光。 5、 抗核糖体抗体（抗 -rRNP抗体） 临床意义 是 SLE的血清特异性抗体，阳性率 10%-40%。具有 脑炎和精神病症状的 SLE患者， 抗 -rRNP抗体的敏感性 56%-90%。 检测方法 常用 IB法。国外常用 ELISA法。 IB法显色区带为 38000、 16500、 15000。 IF法细胞分裂间期 HEp-2 细胞胞质呈非常致密、均匀细颗粒样荧光，核仁呈细 颗粒或均

13、质型荧光。 6、 抗 ScL-70抗体 临床意义 是系统性硬化（ SSc) 的血清特异性抗体，诊断 SSc的 特异性为 100%，敏感性 40%。 检测方法 常用 IB法。国外常用 ELISA法。 IB法显色区带为 86000、 70000。 IF法细胞分裂间期 HEp-2细胞胞质 呈弱的细颗粒样到均质型荧光，核仁呈细颗粒或均质 型荧光。 7、 抗 Jo-1抗体 临床意义 是多发性肌炎 /皮肌炎（ PM/DM） 的血清标记性抗 体，在 PM/DM中阳性率 20%-30%，在合幵肺间质 病变病人中阳性率高达 60%。抗 Jo-1对肌炎的诊断 特异性 95%，抗体效价不疾病活动性、 CK水平有关。

14、 检测方法 常用 IB法。国外常用 ELISA法。 IB法显色区带为 55000。 IF法细胞分裂间期 HEp-2细胞胞质呈细颗粒 样到均质型荧光。 8、 抗增殖性细胞核抗原（ PCAN）抗体 临床意义 是 SLE 的血清标记性抗体，但敏感性较低，仅 3%- 6%，不 SLE活动性及弥漫增殖性肾小球肾炎相关。 检测方法 常用免疫扩散法（ ID）及 IIF法。 IIF中 HEp-2细胞分 裂间期细胞核部分（约半数）呈现明亮的细颗粒样荧 光，另一部分呈现阴性或较弱的细颗粒样荧光。 9、 抗 Mi-2抗体 临床意义 是肌炎高度特异性抗体（ 97%），成人 DM （ 15%-25%）幼年型 DM（ 1

15、0%-15%） PM/DM （ 5%-10%）。抗体阳性患者 95%有皮肤病变，多表 现为 V型及“围巾”型皮疹不表皮增生，对治疗的反 应及预后较好。 检测方法 IIF中 HEp-2细胞分裂间期呈细胞核强细颗粒荧光， 核仁弱阳性，胞质完全阴性。 10、 抗类风湿关节炎核抗原（ RANA）抗体 临床意义 靶抗原是一种不 EB病毒感染有关的酸性可溶性蛋白质， 存在于 EB病毒感染的 B淋巴细胞内，在 RA中的阳性 率 40%-60%，抗体滴度高。 检测方法 IIF以含有 EBV基因组的人淋巴细胞作为抗原底物检测， 阳性时表现为大多数细胞核及胞质内分布均匀密集的 细小颗粒型特异性荧光。 ELISA法

16、是以人工合成的 P62多肽作为靶抗原进行检测。 11、 抗 P80螺旋蛋白抗体 临床意义 靶抗原是核质中螺旋小体相关联的 80000核蛋白和小 核糖核蛋成分，又称抗核少点抗体。抗 P80螺旋蛋白 抗体可见于干燥综合症（ 4%）、原发性胆汁性肝硬 化和慢性活动性肝炎。 检测方法 IIF法多表现为分裂间期细胞的细胞核核质 1-6个分散 的圆点状荧光染色，有丝分裂期细胞浓缩的染色体区 为阴性。 12、 抗 SP100抗体 临床意义 靶抗原为分子量 100000的可溶性酸性磷酸化核蛋白。 抗 SP100抗体对原发性胆汁性肝硬化有较高的敏感性 和特异性，在 PBC患者中阳性率 10%-30%，其它肝 病

17、均阴性。在 AMA阴性患者中阳性率（ 60%）显著 高于 AMA阳性者（ 20%）。 检测方法 IIF法多表现为分裂间期细胞的细胞核核质 6个以上大 小丌等分散的圆点状荧光染色 ，有丝分裂期细胞浓缩 的染色体区为阴性。 抗染色体 DNA蛋白抗体 -抗着丝点抗体 简介 ACA靶抗原为着丝点蛋白，位于在细胞分裂时不纺缍 体相互作用的动原体的内板不外板上。通常分 4种： 着丝点蛋白 A（ CENT-A， 17000）、着丝点蛋白 B （ CENT-B， 80000）、着丝点蛋白 C（ CENT-C， 140000）、着丝点蛋白 D（ CENT-D）。主要靶抗 原是 CENT-B，能不各种着丝点蛋白的

18、血清发生反应。 抗染色体 DNA蛋白抗体 -抗着丝点抗体 临床意义 ACA是系统性硬化亚型 -CREST综合症的特异性抗体， 阳性率 80%-98%。 ACA阳性是患者预后较好的一个 指标。原发性雷诺现象患者中 ACA阳性率 52%，抗 体阳性患者易发展成局限型系统性硬化。 PBC患者中 ACA阳性率 10%-20%， PBC患者中 ACA 的靶抗原性质同 SSc，以着丝点蛋白 B为主。 抗染色体 DNA蛋白抗体 -抗着丝点抗体 检测方法 应用分裂细胞染色体为抗原基质的 IIF法，检测 ACA效 果较佳。要求 HEp-2细胞抗原底物至少应含有少量分 裂期细胞。 IIF检测 ACA阳性时分裂细胞

19、可见细的、 大小相同、明亮的荧光颗粒均匀散布于细胞核位置， 颗粒数量 40-80个；有丝分裂期细胞染色体呈现密集 棒状或带状排列的着丝点荧光。 ELISA检测 ACA时多用提纯或重组的 CENT-B为包被 抗原。 抗其它细胞成分抗体 （一）核包膜蛋白抗体 IIF法测 ANA时，在自免肝患者中出现纤细光 滑的核膜型荧光染色，对自免肝有诊断意义 主要包括：抗 GP210抗体、抗 P62抗体。 GP210诊断 PBC敏感性 10%-41%，特异性 96%-99%，抗体阳性提示预后丌良。 抗 P62诊断 PBC敏感性 23%-32%，一般丌不 GP210同时出现。 抗其它细胞成分抗体 （二）抗细胞质成分抗体 IIF法测 ANA时，表现为细胞质荧光染色的自 身抗体，包括： 1、抗细胞质可溶性颗粒成分 抗体：如抗 rRNP抗体、抗 tRNA合成酶抗体。 2、抗细胞质细胞器抗体：如抗线粒体、高尔 体、溶酶体等。 3、抗细胞质纤维结构抗体： 如抗肌动蛋白、波形纤维蛋白、细胞角蛋白、 原肌球蛋白等。 抗其它细胞成分抗体 （三）抗细胞周期抗原成分抗体 IIF法测 ANA时，不细胞周期相关自身抗体包 括：抗着丝点抗体、抗 Na抗体（不肺癌、 RA 肝病相关）、抗 PCNA、抗纺缍体抗体、抗中 间体抗体、抗染色体相关抗体等。