鉴别试验课件

第二章第二章 鉴别试验鉴别试验Contents 概述概述 鉴别试验项目鉴别试验项目 鉴别方法鉴别方法 鉴别试验条件鉴别试验条件概述概述v药物的鉴别试验（药物的鉴别试验（identification test）v目的目的判断药物的真伪，是药品质量检验的判断药物的真伪，是药品质量检验的首项任务首项任务 药典收载的鉴别试验药典收载的鉴别试验均为用来证实贮均为用来证实贮藏的药物是否为其所标示的药物藏的药物是否为其所标示的药物 这些方法有一定的专属性，但不能赖以鉴这些方法有一定的专属性，但不能赖以鉴别未知物别未知物 对于原料药，还应结合性状项下的外观和对于原料药，还应结合性状项下的外观和物理常数进行综合判断物理常数进行综合判断鉴别试验的项目鉴别试验的项目性状（性状（description）鉴别（鉴别（identification)鉴别鉴别（identification)性状：反映了药物特有的物理性质性状：反映了药物特有的物理性质 1、外观、外观聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质 2、溶解度、溶解度 3、物理常数、物理常数相对密度、熔点、比旋度、吸收系数等相对密度、熔点、比旋度、吸收系数等v晶型晶型 药物的多晶型现象极为普遍，晶型不同，它们的药物的多晶型现象极为普遍，晶型不同，它们的物理性质如密度、熔点、硬度、外观、溶解度和物理性质如密度、熔点、硬度、外观、溶解度和溶出速度等方面均有显著性差异，从而影响药物溶出速度等方面均有显著性差异，从而影响药物稳定性、生物利用度、毒副反应等稳定性、生物利用度、毒副反应等P39 鉴别晶型主要是依据不同晶型具有不同的理化鉴别晶型主要是依据不同晶型具有不同的理化特性及光谱学特性，采用熔点法、热分析法、红特性及光谱学特性，采用熔点法、热分析法、红外分光光度法及外分光光度法及X-射线衍射法等进行鉴别射线衍射法等进行鉴别v熔点熔点 定义定义 固体固体液体的温度（液体的温度（1.01.5/min）熔融同时分解的温度（熔融同时分解的温度（2.5 3.0/min）初熔至全熔的一段温度初熔至全熔的一段温度vChP收载的方法收载的方法 第一法：测定易粉碎的固体药品第一法：测定易粉碎的固体药品 第二法：测定不易粉碎的固体药品第二法：测定不易粉碎的固体药品 第三法：测定凡士林或其他类似物第三法：测定凡士林或其他类似物v要求报告初熔和终熔要求报告初熔和终熔v比旋度比旋度 tD是手性药物特性及其纯度的主要指标是手性药物特性及其纯度的主要指标 在一定波长（在一定波长（589.3nm）与温度（）与温度（20）下，偏）下，偏振光透过长振光透过长1dm，含旋光性物质，含旋光性物质1g/1mL的溶液时的溶液时测得的旋光度测得的旋光度，称为比旋度。，称为比旋度。注意：溶剂，注意：溶剂，pH，浓度等对比旋度的影响，浓度等对比旋度的影响v吸收系数吸收系数 在给定波长、溶剂和温度等条件下，吸光物在给定波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度（质在单位浓度（C）、单位液层厚度（）、单位液层厚度（L）时的吸）时的吸光度，称为吸收系数（光度，称为吸收系数（E1%1cm）vE1%1cm：中国药典收载的方法是指在一定波长下，：中国药典收载的方法是指在一定波长下，溶液浓度为溶液浓度为1%（W/V），厚度为），厚度为1cm是的吸光度是的吸光度一般鉴别试验一般鉴别试验依据某一类药物的依据某一类药物的化学结构或理化性化学结构或理化性质的特征，通过化质的特征，通过化学反应来鉴别药物学反应来鉴别药物的真伪的真伪无机药物无机药物阴、阳离子的阴、阳离子的特殊反应特殊反应有机药物有机药物典型的官能团反应典型的官能团反应阴、阳离子的特殊反应阴、阳离子的特殊反应v例：钠盐、钾盐、钙盐的焰色反应例：钠盐、钾盐、钙盐的焰色反应取铂丝，盐取铂丝，盐酸湿润，蘸酸湿润，蘸取供试品，取供试品，无色火焰中无色火焰中燃烧，火焰燃烧，火焰显各离子的显各离子的特征色特征色钠离子钠离子钾离子钾离子钙离子钙离子v典型官能团反应典型官能团反应 丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类、丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类、有机氟化物类、水杨酸盐、枸橼酸盐、乳酸盐等有机氟化物类、水杨酸盐、枸橼酸盐、乳酸盐等鉴别反应鉴别反应 例：有机氟化物鉴别例：有机氟化物鉴别 v氟离子的茜素氟蓝比色法氟离子的茜素氟蓝比色法有机氟化物经氧瓶燃烧有机氟化物经氧瓶燃烧法破坏，被碱性溶液吸法破坏，被碱性溶液吸收成为无机氟化物，与收成为无机氟化物，与茜素氟蓝、硝酸亚铈在茜素氟蓝、硝酸亚铈在pH4.3溶液中形成蓝紫溶液中形成蓝紫色络合物色络合物v专属鉴别试验专属鉴别试验 根据每一种药物化学结构的差异及其所引起根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性不同，选用某些特有的灵敏的定的物理化学特性不同，选用某些特有的灵敏的定性反应，来鉴别药物的真伪。是证实性反应，来鉴别药物的真伪。是证实某一种某一种药物药物的依据的依据例：例：巴比妥类巴比妥类药物药物 甾体激素类甾体激素类药物药物三、鉴别方法三、鉴别方法v常用的方法有：化学法，光谱法，色谱法常用的方法有：化学法，光谱法，色谱法v要求：专属，再现，灵敏，操作简便，快速要求：专属，再现，灵敏，操作简便，快速 1.化学鉴别法化学鉴别法呈色，沉淀，荧光，气体呈色，沉淀，荧光，气体三氯化铁三氯化铁酚羟基（紫色）酚羟基（紫色）重氮化重氮化-偶合偶合芳伯胺基（橙红）芳伯胺基（橙红）茜素氟蓝法茜素氟蓝法有机氟化物（蓝紫色）有机氟化物（蓝紫色）双缩脲双缩脲氨基醇结构（蓝紫色）氨基醇结构（蓝紫色）Vitali反应反应托烷生物碱类（深紫色）托烷生物碱类（深紫色）四氮唑四氮唑肾上腺皮质激素类（红色或蓝色）肾上腺皮质激素类（红色或蓝色）茚三酮茚三酮类似氨基酸结构（蓝紫色）类似氨基酸结构（蓝紫色）v沉淀、荧光反应沉淀、荧光反应 硝酸银硝酸银丙二酰脲类、氯化物、微丙二酰脲类、氯化物、微C银镜反应银镜反应异烟肼异烟肼氧化亚铜氧化亚铜葡萄糖葡萄糖铜盐铜盐磺胺类磺胺类三氯化铁三氯化铁苯甲酸盐苯甲酸盐重金属离子重金属离子利多卡因利多卡因生物碱沉淀剂生物碱沉淀剂氮杂环类氮杂环类在硫酸性溶液中本身有荧光在硫酸性溶液中本身有荧光硫酸奎宁硫酸奎宁于适当试剂反应产生荧光于适当试剂反应产生荧光维维B1的硫色素反应的硫色素反应v气体反应气体反应强碱处理强碱处理氨气氨气强酸处理强酸处理硫化氢气体硫化氢气体直火加热直火加热碘蒸气碘蒸气硫酸水解，加乙醇硫酸水解，加乙醇醋酸乙酯香味醋酸乙酯香味使试剂褪色使试剂褪色如维如维C的二氯靛酚反应；司可的二氯靛酚反应；司可巴比妥钠与溴、碘试液的反应巴比妥钠与溴、碘试液的反应测定生成物熔点测定生成物熔点操作繁、费时，应用少操作繁、费时，应用少v其它反应其它反应v光谱鉴别法光谱鉴别法 1、紫外光谱法（、紫外光谱法（UV）（1）测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长）测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长（2）测定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸光度）测定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸光度（3）规定吸收波长和吸光度比值法）规定吸收波长和吸光度比值法（4）经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性）经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性v应用举例应用举例 地蒽酚的鉴别试验：地蒽酚的鉴别试验：取含量测定项下的溶液扫描取含量测定项下的溶液扫描240400nm范范围，在围，在257、289与与356nm的波长处有最大吸收。的波长处有最大吸收。规定：规定：A257/A289应为应为1.061.10 A356/A289应为应为0.900.94 对于一个药物多个吸收峰的峰值相差较大时对于一个药物多个吸收峰的峰值相差较大时，采用单一浓度不易观察到全部吸收峰，可采用，采用单一浓度不易观察到全部吸收峰，可采用两种浓度的供试液分别测定其最大吸收波长。两种浓度的供试液分别测定其最大吸收波长。v红外光谱法（红外光谱法（IR）IR是一种专属性强、应用广（固体、液体、是一种专属性强、应用广（固体、液体、气体样品）的鉴别方法。主要用于气体样品）的鉴别方法。主要用于组分单一、结组分单一、结构明确构明确的原料药，特别适合用于其他方法不易区的原料药，特别适合用于其他方法不易区分的同类药物，如磺胺类、甾体激素类和半合成分的同类药物，如磺胺类、甾体激素类和半合成抗生素类药品抗生素类药品 测定方法：测定方法：标准图谱对照法（标准图谱对照法（ChP）对照品比较法（对照品比较法（USP）中国药典试样制备方法中国药典试样制备方法v用于固体用于固体（溴化钾）压片法、糊法（溴化钾）压片法、糊法v用于液体用于液体膜法、溶液法膜法、溶液法v测定前应录制测定前应录制聚苯乙烯薄膜光谱图聚苯乙烯薄膜光谱图，并与标准谱，并与标准谱图对照，应检查仪器性能图对照，应检查仪器性能v注意问题注意问题 （1）规定样品前处理方法）规定样品前处理方法 （2）当未规定药用晶型时，可采用对照品，并用适当）当未规定药用晶型时，可采用对照品，并用适当溶剂进行重结晶溶剂进行重结晶 （3）已规定药用晶型的，则应采用相应药用晶型的对）已规定药用晶型的，则应采用相应药用晶型的对照品依法比对照品依法比对v制剂的红外鉴别制剂的红外鉴别 （1）品种正文中规定预处理方法）品种正文中规定预处理方法 （2）辅料无干扰，与原料药的标准图比对）辅料无干扰，与原料药的标准图比对 （3）如辅料干扰不能完全消除，在指纹区可规定）如辅料干扰不能完全消除，在指纹区可规定35个待测成份的特征吸收峰（个待测成份的特征吸收峰（cm-1），其误差应小于），其误差应小于0.5%一些新的鉴别方法一些新的鉴别方法v近红外光谱法（近红外光谱法（128004000cm-1）v核磁共振法（核磁共振法（NMR）亚硝酸戊酯的亚硝酸戊酯的NMR法鉴别（法鉴别（USP法）法）亚硝酸戊酯（亚硝酸戊酯（Amyl Nitrite）是）是3-甲基甲基-1-丁醇丁醇和和2-甲基甲基-1-丁醇亚硝酸酯的混合物丁醇亚硝酸酯的混合物vX射线粉末衍射法射线粉末衍射法 例如：氨苄西林四种固体的粉末例如：氨苄西林四种固体的粉末X-射线衍射射线衍射图谱图谱 P33色谱（色谱（TLC,HPLC,GC）鉴别法）鉴别法v利用物质各自的特征色谱行为（利用物质各自的特征色谱行为（Rf值或值或tR值）进值）进行鉴别试验行鉴别试验v采用与对照品在相同条件下进行色谱分离，根据采用与对照品在相同条件下进行色谱分离，根据两者保留行为和检测结果是否一致来验证药品的两者保留行为和检测结果是否一致来验证药品的真伪真伪鉴别试验条件鉴别试验条件影响因素影响因素v被测物浓度被测物浓度v试剂的用量试剂的用量v溶液的温度溶液的温度v溶液溶液pHv反应时间反应时间v共存的干扰物质等共存的干扰物质等v鉴别试验必须在规定条件下完成，否则将会影响鉴别试验必须在规定条件下完成，否则将会影响结果的判断结果的判断鉴别试验的专属性要求鉴别试验的专属性要求v空白试验（阴性对照）空白试验（阴性对照）在与供试品鉴别试验完全相同的条件下，除在与供试品鉴别试验完全相同的条件下，除不加供试品外（或以等量溶剂代替供试液），其不加供试品外（或以等量溶剂代替供试液），其它试剂均同样加入而进行的试验它试剂均同样加入而进行的试验v对照试验（阳性对照）对照试验（阳性对照）取被检纯品与供试品同法鉴别取被检纯品与供试品同法鉴别本章学习要求本章学习要求掌握：掌握：v比旋度、吸收系数等重要的物理常数的定义比旋度、吸收系数等重要的物理常数的定义v典型化学法、光谱法和色谱法鉴别药物的原理和典型化学法、光谱法和色谱法鉴别药物的原理和应用应用熟悉：熟悉：v鉴别试验条件对结果的影响鉴别试验条件对结果的影响v鉴别试验专属性要求鉴别试验专属性要求课外泛读课外泛读v阅读中国药典二部附录阅读中国药典二部附录一般鉴别试验，附录一般鉴别试验，附录分光光度法分光光度法