DB37T 4051-2020 中兽药散剂中添加喹乙醇、乙酰甲喹的测定 超高效液相色谱-串联质谱法

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1、ICS11.220B 41DB37山东省地方标准DB37/T 40512020中兽药散剂中添加喹乙醇、乙酰甲喹的测定超高效液相色谱-串联质谱法Determination addition of olaquindox and mequindox in traditional chinese veterinary drughigh performance liqud chromatography- tandem mass spectrometry2020 - 07 - 09发布2020 - 08 - 09实施山东省市场监督管理局发布DB37/T 40512020目次前言II1范围12规范性引用文件

2、13原理14试剂或材料15仪器设备26测定步骤26.1提取26.2标准曲线的制备26.3仪器参考条件26.4测定37数据处理38检测方法的精密度4附录A（资料性附录）喹乙醇、乙酰甲喹特征离子质量色谱图5前言本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。本标准由山东省畜牧业专业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省兽药质量检验所。本标准主要起草人：章安源、牛华星、张传津、李有志、陈玲、刘霄飞、陆庆泉、陈志强、魏秀丽、张志民、杨修镇。6中兽药散剂中添加喹乙醇、乙酰甲喹的测定超高效液相色谱-串联质谱法1 范围本标准规定了中兽药散剂中喹乙醇、乙酰甲喹的

3、超高液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于中兽药散剂中喹乙醇、乙酰甲喹的测定。本方法喹乙醇、乙酰甲喹检出限均为50 mg/kg，定量限均为100 mg/kg。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法。3 原理中兽药散剂中的喹乙醇、乙酰甲喹用乙腈溶液提取，经超高效液相色谱仪分离后，串联质谱检测，保留时间和离子丰度比对照定性，外标法定量。4 试剂或材料除非另有规定，所用试剂均为色谱纯。4.1 水：符合GB/T 668

4、2一级水的规定。4.2 乙腈（CH3CN）：色谱纯。4.3 甲酸（HCOOH）：色谱纯。4.4 甲醇（CH3OH）：色谱纯。4.5 流动相（0.1 %甲酸水溶液）：量取甲酸（4.3）1 mL，溶于水，移入1 000 mL容量瓶中，稀释至刻度，过0.22 m微孔滤膜备用。4.6 初始流动相（5 %乙腈溶液）：量取乙腈（4.2）10 mL与水（4.1)190 mL，混匀后备用。4.7 60 %乙腈溶液：量取乙腈（4.2）60 mL与0.1 %甲酸水溶液（4.5）40 mL，混匀后备用。4.8 标准物质：喹乙醇，纯度99.5 %，乙酰甲喹，纯度99.6 %。4.9 标准储备液：准确称取喹乙醇、乙酰甲

5、喹标准物质（4.8）各10 mg（准确至0.000 01 g），加甲醇溶液分别转移置10 mL棕色容量瓶中，加甲醇（4.4）溶解并稀释至刻度，摇匀，得标准物质储备液。4.10 10 g/mL的混合标准溶液：准确吸取喹乙醇、乙酰甲喹标准储备液（4.9）各1.0 mL，置100 mL棕色容量瓶中，加甲醇（4.4）溶解并稀释至刻度，摇匀。得10 g/mL的混合标准溶液。现配现用。4.11 离心管。4.12 有机微孔滤膜：0.22 m。5 仪器设备5.1 超高效液相色谱串联质谱仪：电喷雾离子源（ESI）。5.2 分析天平：感量0.000 01 g，感量0.000 1 g，感量0.01 g。5.3 超声

6、波清洗器。6 测定步骤6.1 提取准确称取待测样品0.2 g（精确到0.001 g）于250 mL三角烧瓶中，加入50 mL 60 %乙腈溶液（4.7）超声提取15 min，转移置100 mL容量瓶中，加流动相（4.5）稀释至刻度。用滤纸过滤，收集续滤液。准确吸取续滤液1.0 mL，置10 mL容量瓶中，用流动相（4.5）稀释至刻度，摇匀，滤膜过滤，过滤液待测。同时按上述步骤做样品空白试验。6.2 标准曲线的制备准确吸取10 g /mL的标准溶液（4.10）5.0 mL，置100 mL容量瓶中，用空白试样溶液稀释至刻度，摇匀，得500 ng/mL的标准溶液。分别吸取500 ng/mL的标准溶液

7、适量，用空白试样溶液倍比稀释，得5 ng/mL、10 ng/mL、25 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、125 ng/mL、250 ng/mL的标准物质系列工作液。6.3 仪器参考条件6.3.1 高效液相色谱参考条件色谱柱：C18，100 mm2.1 mm，粒径1.7 m，或性能相当者。流动相A：乙腈。流动相B：0.1 %甲酸水溶液。流速：0.4 mL/min。进样量：5 L。柱温：35 。液相色谱梯度洗脱条件见表1。表1 液相色谱梯度洗脱条件时间minA%B%0.005952.005953.5050505.008812659575956.3.2 质谱参考条件扫描模式：电喷雾

8、正离子（ESI+）。离子喷雾电压：5 500 V。离子源温度：500 。气帘气：20 psi。雾化气：50 psi。加热气：50 psi。检测方式：多反应监测（MRM）。喹乙醇、乙酰甲喹的定性、定量离子对和碰撞能量见表2。表2 定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞能量品名定量离子对定性离子对去簇电压V碰撞能量eV保留时间min喹乙醇263.9143263.9143263.921297411.09乙酰甲喹21914321914321918582303.356.4 测定6.4.1 定性测定通过样品溶液色谱图的保留时间、各色谱峰特征离子与相应标准溶液的保留时间、各色谱峰的特征离子相对照定性。样品溶

9、液与标准溶液保留时间相对偏差应在2.5 %之内；样品溶液特征离子相对离子丰度与标准溶液的相对离子相对偏差不超过表3的规定，则可判断样品中存在乙酰甲喹、喹乙醇。表3 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度， %5020至5010至2010允许的相对偏差，%202530506.4.2 定量测定取样品溶液和标准溶液各5 L注入液相色谱串联质谱仪，在上述色谱-质谱条件下进行测定，记录特征离子质量色谱图，外标法定量。标准溶液中乙酰甲喹、喹乙醇特征离子的质量色谱图参见附录A。7 数据处理试样中喹乙醇、乙酰甲喹的含量按式（1）计算：(1)式中：X 试样中喹乙醇、乙酰甲喹的含量，单位为微克每千克（g

10、 /kg）；Cs 喹乙醇、乙酰甲喹标液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；A 试样中喹乙醇、乙酰甲喹峰面积；As 标准品喹乙醇、乙酰甲喹峰面积；V1 试样提取溶液总体积（100），单位为毫升（mL）；V2 分取提取液体积（1），单位为毫升（mL）；V3 定容体积（10），单位为毫升（mL）；m 试样的取样量，单位为克（g）。每个试样取两份进行平行测定，以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，结果保留三位有效数字。8 检测方法的精密度在重复性条件下两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20 %。AA附录A （资料性附录）喹乙醇、乙酰甲喹特征离子质量色谱图标准溶液中喹乙醇离子定量质量色谱图见图A.1。图A.1 标准溶液中喹乙醇离子定量质量色谱图标准溶液中喹乙醇离子定性质量色谱图见图A.2。图A.2 标准溶液中喹乙醇离子定性质量色谱图标准溶液中乙酰甲喹离子定量质量色谱图见图A.3。图A.3 标准溶液中乙酰甲喹离子定量质量色谱图标准溶液中乙酰甲喹离子定性质量色谱图见图A.4。图A.4 标准溶液中乙酰甲喹离子定性质量色谱图_