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1、接种箱使用规程1、接种箱必须放在清洁环境中使用。使用前，先用清水擦洗外壁，再用2%来苏尔溶液 清洗内壁和接种用具。2、按甲醛10mL/m3+高锰酸钾7g/m3对接种箱进行熏蒸处理。先将高锰酸钾倒入容器中， 再加甲醛，迅速盖好箱盖，利用产生的甲醛气体密闭熏蒸12小时以上。3、打开箱门通风30分钟，无明显刺激性气味时准备装箱。4、接种完毕要及时清扫掉落在箱内的培养物和棉球等杂物，擦拭干净接种用具，并用 清水擦拭箱内壁，再用甲醛10mL/m3+高锰酸钾7g/m3熏蒸接种箱，以备再用。接种的无菌操作规程1、接种前对接种箱进行彻底消毒，并准备好接种工具。2、操作人员用肥皂或消毒液洗手后装入菌包、菌种、接
2、种工具等必须物品，点燃菇保, 立即关闭箱门进行消毒。3、操作人员工作前换好工作服，并戴口罩，手套。4、操作人员在接种箱外用75%酒精棉擦拭双手，双手伸进箱内后，再用75%酒精棉球 擦拭双手，接种工具及菌种，点燃酒精灯，进行接种。在接种过程中，不能向箱内 传递物品，以免造成杂菌污染。5、酒精灯火焰不可过小，否则会缩小无菌区范围。6、二级菌种袋口需要用酒精灯火焰无菌区封闭，接种必须在无菌区内进行，注意避免 烧伤菌种。7、接种工具在使用前，应用火焰灼烧灭菌，接种工具需要进入菌袋的部分，不得与未 灭菌的物体接触，棉塞塞入袋口的部分拔出后不得与未灭菌的物体接触。8、接种要做到“轻、快、准” “轻”指接种
3、动作幅度不要太大，尽量减少空气流动；“快” 指接种动作要快，避免菌种和培养料在空气中停留的时间过长；“准”指接种动作要 准确到位，接种工具放置有序。9、接种过程中，不得把手伸出接种箱。二级种接种操作的具体过程1、将接种物品搬进接种箱菌包摆在接种箱的左侧（左撇子放在右侧，下面的左右均互 换），摆好接种用具，向箱内喷新吉尔灭。2、将检查好的菌种用消毒液擦拭或喷洒后，放入接种箱内。3、用菇保熏箱25分钟后，接种。4、接种前，操作人员戴好口罩、手套，在接种箱外用75%酒精棉擦拭双手，双手伸进 接种箱后，再次用75%酒精棉擦拭双手，特别是手指及指尖。5、接种耙用75%酒精棉擦拭。点燃酒精灯，接种耙在火焰
4、上灼烧灭菌，灼烧长度为略 大于一个试管长。6、右手握住接种耙柄的顶端，取一支试管种用75%酒精棉消毒试管外壁。拔掉棉塞， 用火焰灼烧试管口，灼烧时应不断转动管口，将试管口上沾染的少量杂菌烧死。7、将接种耙伸入到菌种试管内，先接触一下没有长菌种的培养基或内壁，待接种耙冷 却后，刮去爬壁的气生菌丝，根据不同菌种选择是否刮去培养基表面的气生菌丝（金针 菇的气生菌丝需要刮掉，白灵菇、猴头菇的气生菌丝不能刮掉）。8、用接种耙将菌种培养基横向切成1cm宽的菌种块，培养基离试管口近的部分由于薄 可切的更宽些，一支20mmX200mm规格的试管种可切成8块。然后将接种耙放在试管 内，试管放在试管架上，试管口要
5、在酒精灯的无菌区内。9、有少许75%酒精棉擦拭接种小钩，再在火焰上灼烧灭菌。将小钩戴在右手中指上，小钩位于手背侧。小钩不能碰触任何未灭菌的地方，如果碰到则应在火焰上反复灼烧灭 菌。10、左手取菌包，将其紧挨酒精灯放置，左手把住套环，右手拔下棉塞，握在手里，用 在火焰上灼烧后的小钩钩出预埋棒（每次拔棉塞前都要灼烧一次），左手拿起试管种用 接种耙将刚切好的小菌块再纵向切一刀，分成两块（培养基离试管口近的部分仍横向 切），每个菌包接入二次切好的菌块3块。11、迅速将棉塞过火后塞好。12、将接好菌种的菌包放在接种箱的右侧。摆时仍注意不能将料挤散。接种操作注意事项接种操作的程序中任何环节都很重要，稍有不
6、慎，就会导致失败。以下几个方面要特别1、菌包温度降至30oC以下方可接种，接种箱温度不应超过30oC，高温季节可在一日内 气温较低时操作，或采取降温措施。2、装箱时从筐中取菌包要拿包身，不可提袋口套环装箱，出箱、上架时亦是不可提套 环。装、出箱时菌包不能随意磕碰，以免碰散培养料或碰坏菌袋。在箱内摆包时也不要 过分挤压，以免使培养料过松无法摇菌上架。3、酒精灯火焰要高 影响酒精灯火焰大小的因素主要是酒精的浓度和灯芯。酒精浓 度越高，燃烧越好，所以，要使用95%高浓度的工业酒精。如果灯芯材料太实，塞得又 紧，内吸的酒精太少，火就不旺。灯芯最好用棉花捻制，并拔出适当长度。4、接种物和被接种的容器口要
7、消毒灭菌 接种操作前要将试管口用75%酒精棉球擦 拭。被接种的袋口一定不可远离酒精灯火焰。5、一切暴露菌种和基质的操作必须在火焰上方进行 菌种和被接种的袋子必须在火 焰上方打开，打开后就不能离开火焰，一直到接种操作完成封闭好。因为只有火焰周围 很小的范围内的空间才是绝对无菌的。6、接种工具一定要灼烧彻底 接种用的接种耙、接种钩、接种勺等要在火焰上灼烧 彻底，并注意工具的长度。接种工具灼烧长度以伸进试管的长度为度，重点是取种接种 的部位，以上部分在火焰上方反复灼烧35次即可。7、接种工具灼烧后要冷却 火焰灼烧灭菌后若直接切取菌种，温度太高会烫死菌种。8、接种工具的无菌状态 接种工具经火焰灼烧后其接触菌种的部位已达到绝对无菌 状态。在其接触菌种前绝对不可碰触任何非无菌状态的物品。一旦碰触一定要重新灭菌。9、棉塞的无菌状态 大包棉塞操作中要保持无菌状态。在操作中将棉塞露在袋子外 面的部分用手指夹起，塞入袋内的部分不可碰触，更不可拔下后置于台上。一旦不慎落 地，要在火焰上反复灼烧后方可使用。10、接种完毕后，要及时清理接种箱，排出接种时酒精燃烧放出的废气。
二级菌种接种规程
