血液实验-血液病的诊断.ppt
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1、实验九、白血病的实验室诊断(设计性实验),北华大学医学院 血液检验教研室,实验目的1、通过实验初步了解临床白血病的诊断和 鉴别诊断的步骤和流程。2、熟悉血细胞化学染色的方法、结果判断 和临床意义。,实验安排,学生根据病例,设计实验室诊断流程,教师指导学生实验的选择、操作,学生根据实验结果,诊断疾病,教师总结实验,给出病例,病例讨论,病 例 某患者,男,27岁,近一个月经常小腿痛,三天前突然高热39.5,服药无效后前来就医,贫血貌,查体:口腔粘膜有溃疡,颈部有出血点,胸骨压痛,淋巴结肿大。,白血病典型的临床特征: 发热、贫血、出血、组织浸润,出血点,血常规,Hb:67g/L WBC:96109/
2、L 涂片中有大量原始细胞, 占52%。 PLT :75109/L,白血病的诊断鉴别诊断的步骤,结合临床症状,怀疑患者是白血病,血常规、血象检查,骨髓象检查,细胞化学染色,染色体检查,细胞免疫检查,骨髓活检,骨髓象检查,实验材料: 患者骨髓涂片 实验方法: 瑞氏染色 显微镜检查,步骤1,过氧化物酶染色临床应用: 鉴别急性白血病类型实验原理: 过氧化物酶可以使过氧化氢释放出新生态氧, 氧使无色的底物四-甲基联苯胺氧化成蓝色, 该物质又自行氧化成棕色或棕黑色化合物, 固定在酶存在的部位胞浆中。,步骤2,4-甲基联苯胺法,试剂 1、四-甲基联苯胺混合试剂: 取1% TMB乙醇溶液5ml,加亚硝基铁氰化
3、钠饱和溶液 50l,混匀。 2、稀过氧化氢(新鲜配置) 3、瑞氏染液 材料 患者新鲜骨髓涂片,操 作 步 骤1、取新鲜干燥的骨髓涂片,滴加新配置的四-甲基联苯胺混合试剂0.5ml,1分钟。2、再加稀过氧化氢溶液0.7ml,混匀,染色6分钟。3、倾去染液,待干,瑞氏染液复染1520分钟。4、流水冲去染液,待干,镜检。,注意事项,1、血片或骨髓片必须是新鲜的,否则,过氧化物酶活性会下降。 2、过氧化氢必须新鲜配置,浓度适当。 3、四-甲基联苯胺有毒,避免接触皮肤。,结果判断1、阴性:胞浆中无棕黑色颗粒(如:急淋)2、弱阳性:胞浆中细小的兰色颗粒,分布稀疏(如:急单) 阳性:胞浆中棕黑色颗粒稍粗,分布较密。 (如:急粒) 强阳性:胞浆中棕黑色颗粒粗大,密布整个胞浆。(如:急粒),骨髓象,骨髓增生极度活跃,同一类原始细胞占90%以上,核染色质细致,有核仁。有些细胞胞体略小。其它系列受抑制,数量均减少。,实验小结,实验结果,过氧化物酶阳性: 颗粒稍粗,分布较密。,急性粒细胞性白血病,急性粒细胞性白血病未分化型(M1),原始细胞90%,病例诊断步骤,临床症状疑似白血病,血常规检查支持白血病,骨髓象检查诊断白血病,鉴别急性白血病类型,实 验 作 业,对病例进行诊断,写出诊断流程和依据。,思 考 题,如何鉴别急性白血病?,
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