银杏叶提取物加蝇蛆喂鸡对鸡生长性能及血清生化指标的影响说明书带开题
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银杏叶提取物对百草枯诱导PC12细胞凋亡的保护作康小刚,陈建中,徐峥,李海龙,王柏仁a.中医研究中心,老年性脑病中西医结合医学实验室,西京医院,中国公关b.全军神经生物学研究所,第四军医大学,西安,陕西710032,中国公关2006年3月17日收到,2007年2月14号接受,2007年2月21日可在线摘要以往的研究表明,银杏叶提取物(EGb761)对凋亡的神经元细胞或者通过MPTP诱导的神经元样细胞有潜在的保护作用。在这项研究中,已经测试过银杏叶提取物对百草枯(PQ伤害过的PC12细胞的影响,PQ是一种神经毒素。结果表明,孵育后,经过以银杏叶提取物对PC12细胞一起培养之前PQ的曝光,百草枯诱导的细胞存活率下降得到显着回升,线粒体膜电位(MMP)的减弱及细胞凋亡百分率均减少。此外,银杏叶提取物预处理使酪氨酸羟化酶的人数(TH)的正面和bcl- 2阳性细胞明显增加,经过与PQ处理过的细胞单独相比,经过PQ诱导过的PC细胞中的caspase- 3阳性细胞数显著退化。这项研究表明,银杏叶提取物对百草枯具诱导PC12细胞凋亡的保护作用。银杏叶提取物对百草枯- PC12细胞损伤的保护作用的基本机制可能与bcl -2的激活,增加维修基质金属蛋白酶的稳定性,并通过减少线粒体依赖性途径中caspase-3的活化有关。这一研究结果,为银杏叶提取物对帕金森病的治疗的潜在用途提供了一实验依据。2007爱思唯尔有限公司保留所有权利。关键词:帕金森氏病;百草枯;银杏叶提取物,细胞凋亡,PC12细胞,神经保护作用简介银杏叶是一种广泛使用的草药。标准化银杏叶提取物的称为EGB761,标准化的银杏叶提取物含有24的黄酮醇苷,萜,6(银杏内酯,白果内酯),7原花色素及其他成分(德Feudis,1991)。已经证明银杏叶提取物能有效保护神经元在不同的实验方式中引起的损害。因此,银杏叶已被提议作为一个治疗帕金森病(PD)的潜在试剂(克里森治疗,2001年)。研究表明,在MPTP诱导之前或之后银杏叶提取物均能有效地保护。防止1-甲基-4苯基吡啶离子诱导PC12细胞的凋亡(MPP系统+)。但是,尚未有任何有关报告银杏叶提取物对神经诱导剂百草枯(1,10-二甲基- 4,40-联吡啶,百草枯,PQ)的,一种广泛使用的非选择性除草剂也有类似的结构的MPP+产生影响。(清水等。,2001)电能质量,已证实有造成氧化的压力,导致对人类和动物有毒性,产生帕金森病症状(厚泽等人。,1990)。PQ和MPP+之间的结构相似性表明其作为一个潜在的可能产生帕金森病的致病因子。以往的研究表明,帕金森病的发病率和PQ曝光的等级之间有很强的相关性(刘等人,1996年。刘等,1997;。Morano等,1994)。利用动物模型的研究还表明,百草枯毒性作用可诱导黑质纹状体多巴胺能神经细胞(Thiruchelvam等。,2003)。PC12细胞,一个从大鼠肾上腺嗜铬细胞建立的细胞系(Greene和Tischler,1976),拥有多巴胺(DA)的细胞内合成的基板,以及代谢和运输(灿,1981;。Rebois等,1980年Tuler等,1989)。这些细胞含有的酶能够满足多巴胺的合成和分解的要求,如酪氨酸羟化酶(TH)和单胺氧化酶。PC12细胞中合成的膜受体与递质与位于中脑的多巴胺能神经元相似。因此,PC12细胞系统已作为帕金森病的研究的细胞模型(提摩太和威廉细胞模型,1991年)。在完成调查研究,通过PQ在PC12细胞中的情况,以测试银杏叶提取物对神经毒性可能产生的影响,以提供银杏叶提取物对帕金森病诊疗的潜在用途的实验依据。2。材料和方法3。结果 3.1。银杏叶提取物对百草枯诱导的细胞存活率下降 在与不同浓度的PQ经24小时(50-600 lmol/ L)的培养,采用MTT法对PC12细胞的细胞存活率测定。与对照组相比,降低了电能质量浓度依赖性(图1a)的细胞活力。在300 lmol/ PQ的L时,细胞存活率达53.35.1。当PC12细胞分别用300个不同时间lmol/ L的电能质量,细胞死亡增加的曝光时间(图1b)延长,达到24小时57 5.4,如图所示。 1C号,银杏叶提取物显着保护PQ对PC12细胞的毒性作用。银杏叶提取物对细胞活性的增加与浓度和时间相关,人们发现,细胞毒作用是由preincubations减毒10,20和40 lg/ml在PC12 细胞中。分别与对照组相比,EGb761/ mL的银杏叶提取物提高细胞存活率65.84.6,71.65.6and82.4 6.2。3.2。银杏叶提取物对百草枯引起的LDH释放为了进一步探讨银杏叶提取物的保护作用,设计LDH释放实验,LDH释放是细胞毒性的另一个指标,这个实验已经完成.实验的结果与MTT法测定的相似。 300 lmol/ L处理电能质量导致LDH释放在中期(236 8.8)(图1D)条的增加。孵育10,20和40 lg/ mL的银杏叶提取物,分别阻挡PC12细胞LDH释放系统的18910.3,168 135 9.8和8.6。3.3。银杏叶提取物对百草枯诱导的凋亡率增加PC12细胞染色既PI和FITC标记的膜联蛋白V(视听- FITC标记),以流式细胞仪分析细胞凋亡与细胞百分比。对坏死细胞由AV/ PI双+染色,自当失去了完整的PI膜进入细胞,并与核酸结合进行了论证。凋亡细胞被证明由AV+/ PI双染色,因为AV结合磷脂细胞凋亡过程中易位到细胞膜外层。AV+/ PI双染细胞+有可能迟到或坏死细胞凋亡和AV/ PI的细胞的存活细胞为代表。在对照组中,大部分细胞是可行的(92.9)(图2a)。当PC12细胞暴露于300 lmol/ L的PQ中,AV+细胞数显着增加(41.6)(图2b)。同时孵化(10,20和40 lg/ml)银杏叶提取物和PQ显着减少了与AV标记细胞的数量。细胞凋亡的比例显着下降,分别为33.8,25.7和19.4。(图2c-e)3.4。银杏叶提取物对百草枯诱导的基质金属蛋白酶破坏MMP在百草枯诱导PC12细胞和银杏叶提取物孵育结果是由罗丹明123,罗丹明123是一个特定的荧光染料,阳离子活性线粒体是容易被保留汇总评估的。和对照组相比,在PQ的治疗后,罗丹明123荧光在PC12细胞降低。银杏叶提取物预处理(10,20和40lg/毫升)依赖性地剂量可以逆转MMP减少造成的电能质量(图3a)。3.5。银杏叶提取物对百草枯诱导的DNA片段在细胞凋亡过程中,DNA片段引起内切酶的激活。核染色的强烈外观为支离破碎的DNA从细胞核凋亡产生30- OH的结束终端的标记。TUNEL阳性细胞的定量分析如图3B所示。PC12细胞暴露于300 lmol/ L的电能质量显着增加TUNEL阳性细胞计数总额的比率(20.51.02),而对照组为(5.60.93)。10,20和40 LG电子/ mL的银杏叶提取物预处理降低了TUNEL阳性细胞的比例,分别为19.40.73,13.70.95,和9.10.64。3.6。银杏叶提取物对TH和caspase- 3和bcl- 2表达的PQ的处理PC12细胞为了阐明与银杏叶提取物对PQ诱导的保护作用相关的可能的分子机制,免疫细胞化学染色TH和caspase- 3和bcl- 2进行。与对照组细胞的免疫染色表明,量词的TH阳性和bcl- 2阳性细胞和明显的caspase - 3的阳性细胞增加造成重大损失,观察电能质量,培养细胞。与此相反,只与百草枯相比,10,20和40 lg/ mL的银杏叶提取物预孵育显示,随着TH显着增加,与bcl- 2阳性细胞和比较,caspase - 3的阳性细胞减少。4。讨论近几年的研究聚焦在PQ的曝光和神经退行性疾病的关系。已经发现,PQ选择性杀伤实验动物的多巴胺神经元(Corasaniti等,1992;。Corasoniti等,1998;。麦科马克等,2002)或导致体外培养的多巴胺能神经元中脑损伤(惠子等人。,2003)。细胞凋亡被认为在百草枯引起的神经系统疾病的神经元丢失了中发挥了重要作用。然而,PQ的神经毒性的机制仍然不清楚。有研究表明百草枯诱导细胞凋亡是由氧化应激(Cappelletti等介导的,1998年;。Fabisiak等,1998;。McCarthya等,2004;。Mollace等。,2003)。目前的研究结果表明,电能质量在50-600 lmol/ L的诱导剂量影响PC12细胞凋亡。对PC12细胞暴露于300 lmol/ L的PQ的24小时显着降低细胞存活率用MTT法检测,增加培养液中乳酸脱氢酶的释放,产生细胞核染色质的浓缩,分散,导致MMP的破坏,结果导致bcl 2降低和caspase - 3活性增加。Bcl - 2的是在线粒体膜,核膜和内质网(布雷德森,1995年)的蛋白。它会阻止基质金属蛋白酶的各种刺激的去极化的诱导,抑制cytochromeric和其他蛋白酶从线粒体的释放,然后抑制caspase - 3的激活(克克等,1997;。清水等人,1995年;。杨等人,1997年)。中央细胞凋亡通路组件是caspase家族的蛋白酶。 Caspase - 3的是通过几种不同的途径引发了多种类型的哺乳动物细胞凋亡的强大效应,半胱氨酸蛋白酶在细胞色素的C -依赖的细胞凋亡途径(斯特拉瑟等。,2000)是一个最重要的。caspase - 3的活化似乎是细胞凋亡的关键。我们的研究结果显示,PQ的抑制Bcl - 2的激活,这可能加快基质金属蛋白酶的去极化和caspase -3的活化,从而导致对PC12细胞凋亡。银杏叶提取物的神经保护作用已经在研究中通过体外和体内模型得到证实。鉴定出银杏提取物具有抗氧化性和自由基清除活性,从而通过调节抗凋亡机制和抑制淀粉样b聚合给任何蜂窝系统提供保护(史密斯和罗,2004)。也被报导说银杏提取物降低了所有青年鼠和老年鼠在大脑区域内相关基因bcl-2/bax的比例(路等,2006),保护了在培养视网膜神经细胞的培养中谷氨酸的毒性(王等,2005),降低了在6-羟多巴胺,损毁大鼠的行为损失(金等人,2004),并防止顺铂引起的周围神经病包括一些功能和形态恶化(Ozturk等,2004)。在体外,银杏叶提取物保护星形孢菌素诱导的神经细胞死亡和抑制蛋白酶在培养皮层神经元的活动(Massieu等,2004),对保护的培养神经元死亡所致的过氧化氢(Guidetti等,2001),谷氨酸(朱等,1997),一氧化氮(Bastianetto等。2000A型,b)和MPTP的(杨等。2001年a,b)项。截至目前,已经没有关于银杏叶提取物对百草枯诱导的神经毒性的保护作用的可用数据。在这项研究中,PC12细胞与银杏叶提取物孵育2 h,然后再暴露24小时电能质量。结果表明:在电能质量管理之前,用银杏叶提取物预处理显着提高细胞活力,减少LDH释放,并减少核浓缩和基质金属蛋白酶的去极化。此外,有一对Bcl- 2的增加和银杏叶提取物预孵育后的caspase- 3活性下降。这些结果表明,银杏叶提取物可对PQ诱导的PC12细胞毒性有很好的保护作用,延缓的PQ诱导的细胞凋亡。对银杏叶提取物的保护作用机制可能与增加Bcl - 2的活化,维护稳定的MMP,并通过对PC12细胞线粒体依赖性途径降低caspase - 3的活化有关。这一发现为我提供了银杏叶提取物治疗帕金森病的潜在用途的实验依据。5.参考文献 一 标题:银杏叶提取物加蝇蛆喂鸡对鸡生长性能及血清生化的影响。二 摘要:银杏叶提取物是一种具有多种生物活性物质的物质。它在禽类的生产实际中越来越受到人们的重视。银杏叶提取物对于提高鸡的生长性能,免疫力,以及肉质和蛋的品质均有显著的影响。概述了银杏叶的活性成分、银杏叶提取物的生物学功能及其在禽类生产中的研究应用进展和展望。三 关键词:银杏叶提取物;蝇蛆;禽类;生长性能;血清生化。四 英文摘要五 正文:1.总论; 2.材料与方法; 3.结果与分析; 4讨论; 5结论 6结语六 致谢七 参考文献 目 录摘要Abstract前言11 材料与方法21.1 试验区概况21.2 试验动物与试验材料21.3 试验方法21.4 样品采集方法21.5 样品的检测31.5.1 AST活性的测定31.5.2 BUN活性的测定31.5.3 TC活性的测定41.6 数据分析与处理42.结果42.1 银杏叶提取物加蝇蛆喂鸡对鸡生长性能变化42.2 银杏叶提取物加蝇蛆喂鸡对鸡血清生化指标的变化42.3 银杏叶提取物加蝇蛆喂鸡对鸡死亡率的变化53.讨论与分析63.1 银杏叶提取物加蝇蛆喂鸡对鸡血清生化指标的影响63.2 银杏叶提取物加蝇蛆喂鸡对鸡血清生化指标的影响63.3 银杏叶提取物加蝇蛆喂鸡对鸡死亡率的影响74.小结7参考文献8致谢9I 银杏叶提取物加蝇蛆喂鸡对鸡生长性能及血清生化指标的影响摘要本试验主要研究银杏叶提取物加蝇蛆喂鸡对鸡部分血清生化指标和生长性能的影响。选用200 只1日龄的草鸡随机分为5个处理组,每组重复40只。对照组饲喂普通饲料,其余各组分别在普通饲料中添加0.1%,0.3%,0.6%银杏叶提取物和0.1%银杏叶提取物加1%蝇蛆。预试期10天,正常饲养至45日龄。结果显示:(1)添加银杏叶加蝇蛆喂鸡对鸡平均日增重提高显著(P0.05),提高饲料转化率效果明显。(2)与对照组相比,添加银杏叶提取物加蝇蛆可以显著降低血清尿素氮水平(P0.05),甘油三脂与总胆固醇含量有所降低,但没达到显著水平。(3)银杏叶提取物加蝇蛆喂鸡对鸡的死亡率也有所降低。结论:银杏叶提取物加蝇蛆喂鸡可降低鸡的血脂和尿素氮水平,提高生长性能,降低死亡率。关键词:银杏叶提取物;蝇蛆;血清生化;生长性能;草鸡9 Ginkgo biloba extract together with fly larvae feed the chickens on chicken growth performance and serum biochemical indexesAbstractThe main test of Ginkgo biloba extract plus some fly larvae feed the chickens on the chicken serum biochemical parameters and growth performance. 200 one-day-old chickens were selected and randomly divided into 5 groups, 40 chickens a group. The control group was fed with normal diet only, and the other experiment groups were fed with normal diet, mixed with some different additions, including 0.1%, 0.3%, 0.6% Ginkgo biloba extract or 0.1% Ginkgo biloba together with 1% fly maggots. Pre-trial for 10 days, and All groups were raised to 45 days old before sacrifice. The results showed that: 1) The group fed with Ginkgo biloba extract together with fly maggots has a significant gain of daily body weight (P0.05), feed conversion rate effect is obvious. 2) Compared to the control group, the group fed with Ginkgo biloba extract and fly maggots has a much lower serum urea nitrogen level. (P0.05), while the content of triglyceride and total cholesterol was lower, but not significantly. 3) The chicken death rate was also lowered when the group was fed with Ginkgo biloba extract and fly maggots. Conclusion: Ginkgo biloba extract plus some fly larvae to feed the chickens can reduce blood lipids and blood urea nitrogen level,improve growth index and reduce mortality.Key words: Ginkgo biloba extract, fly maggots, biochemical index of serum, growth index, chicken 前言银杏(Ginkgo biloba L.)又名白果树、鸭掌树、公孙树、鸭脚子,为落叶高大乔木,最早出现于3.45亿年前的石炭纪,地球生命历经千亿年的变动,银杏扔保持其原有的生物特性。银杏原产于中国,在第四纪大陆冰川覆盖之后,成为我国特有的树种,是世界上最古老的植物之一,在生物进化始上有“活化石”之称1。银杏叶是一种具有很高药用价值的植物,作为药用已经有很久远的历史,银杏叶具有“益心敛肺、化湿止泻、治胸闷心痛、心悸怔忡、止咳祛痰、泻痢”2之功效。目前已经从银杏叶中提取的化学成分大约有200 多种3。其中黄酮类和萜内酯类等是发挥银杏叶药理作用的主要成分,黄酮类是氧自由基清除剂, 与其有关的药理作用如抗炎、抗组胺、抗cAMP 磷酸乙酯酶等。萜内酯类在抗炎、肾病、胃肠道疾病、气管高过敏性疾病、神经系统及免疫系统等方面均具有显著作用4。其他成分主要包括有机酸、单糖类、多糖类、醇类、醛类、酮类、生物碱类、甾醇类、17种氨基酸和25种微量元素, 以及维生素、叶绿素、胡萝卜素等对维持肝功能和促进造血功能具有重要作用。白果内酯(Bilobalide)是目前唯一在银杏叶中发现的一种萜内酯类化合物, 具有独特的药理作用, 该成分为银杏叶所特有, 在其他植物中尚未发现5。苍蝇的幼虫又称为蝇蛆。蝇蛆以畜禽粪便和畜禽腐烂的尸体为食,生长繁殖速度极快,人工养殖不需很多设备,室内室外、城市农村均可养殖,而且具有成本低,周期短的优点。利用蝇蛆做饲料添加剂饲养的鸡,具有高蛋白、低脂肪、无药残、肉质鲜嫩、口感好、营养价值高等的特点。蝇蛆的人工养殖起源于20 世纪70 年代末80年代初。现在美国等发达国家已实现了蝇蛆生产的工厂化。蝇蛆是营养成分非常全面的优质蛋白资源。不管是蝇蛆本身还是由蝇蛆制成的蛆粉,粗蛋白含量等与鱼粉及肉骨粉相近或略高6,7,8,9。贾生福等10的结果表明鲜蛆含蛋白质18. 6%,脂肪5%, 碳水化合物和盐3. 5% , 水分71. 4% 和维生素B。干蝇蛆、蛹和蝇尸的粗蛋白质含量分别为60. 8%、58. 2% 和64. 2%; 粗脂肪为17. 1%、14. 5%和6.5% ; 灰分为9. 2% 、8. 1%和7. 5%; 相当于进口鱼粉蛋白质的含量, 超过国产鱼粉和豆饼的含量。蝇蛆虫体体壁富含几丁质,可用于提取壳聚糖及作为合成其他新型营养物质的原料。蝇蛆提取的甲壳素具有多种利用价值,能够排除人和动物体内蓄积的腐败物质,吸附人体内的有害金属毒素,并能有效的清除沉淀在血管及机体内的胆固醇,甲壳素还具有活化淋巴细胞、神经细胞和生殖细胞等作用。蝇蛆含有如此丰富的营养成分,使蝇蛆成为当今世界最受关注并大力开发的特种动物养殖品种之一。 我国是蛋白饲料资源十分短缺的国家。因此,利用蝇蛆养殖,开发利用蛋白资源作为饲料添加剂,对我国养殖业的可持续发展具有非常重大的意义。银杏叶加蝇蛆作为饲料添加剂的研究,在国内外文献中还尚未见先例。本试验旨在研究银杏叶提取物加蝇蛆喂鸡是否具有提高鸡的生长性能,以及对鸡的血清生化有哪些影响, 从而为动物保健工作的研究和新型饲料的研制提供一些借鉴。1.材料与方法1.1 试验区概况 本次试验时间为2011年2月到4月,在南通文圣生态特种养殖有限公司进行,场址位于江苏省南通市海安县墩头镇,本养殖场改变了传统的养殖模式,形成了有自己特色的生态养殖模式。用饲料养猪,畜禽粪便养蛆,再用鲜活蝇蛆喂养畜禽、水产等。以降低饲料成本,提高畜禽、水产的生长速度,同时提高畜禽、水产抗病能力及产品的品质,也更好的解决了家畜、家禽粪便的排放问题,改善了环境。本次试验正是借助于养殖场内的设施,以及专门的养殖人员,科学的饲养管理条件下进行的试验。 1.2 试验动物与试验材料200只1日龄草鸡雏鸡、离心管、高速离心机(sigma 3-18k)、水浴锅(HH-4数显恒温水浴锅)、移液枪(Pipetlite SL-100)、液氮罐(成都液氮容器厂 金凤牌YDS-10)、电子天平(北京赛多利斯天平有限公司产)、分光光度计(UV765 上海精科产)、BUN、TC及AST测定试剂盒(南京建成生物工程研究所产)等。1.3 试验方法将雏鸡随机分成5组,分别为:A.饲喂普通饲料(对照组)B.饲喂普通饲料+0.1%银杏叶提取物 C.饲喂普通饲料+0.3%银杏叶提取物 D.饲喂普通饲料+0.6%银杏叶提取物 E.饲喂普通饲料+1%蝇蛆粉+0.1%银杏叶提取物。在正式试验前,先将小鸡进行3天的适应性饲养,严格按照鸡场日常饲养标准进行。小鸡前22天饲喂全价颗粒饲料,配以不同浓度的蝇蛆和银杏叶提取物,22天之后饲喂的是自配饲料(即:28%豆粕+62%玉米+5%预混料+5%麸皮)。试验期间自由饮水和采食,试验全程24h/d的光照。试验开始后每天早晚各投料一次,并记录投料量以及次日剩余的饲料量,每一周称量一次体重并记录。及时注意观察各组小鸡的死亡数量并记录。整个试验过程采取正常的饲养管理及免疫程序。1.4 样品采集方法在严格按照试验要求和饲养管理程序饲养了45天以后,每组随机取25只鸡,采取心脏采血的方式,每只鸡采血4ml放入离心管,随即放入离心机以3000rpm离心10min,用移液枪取上层血清,放入血清管标号并冷冻保存,用于分析谷草转氨酶(Aspertate aminotransferase,AST)、尿素氮(Urea nitrogen,BUN)、总胆固醇(Total cholesterol ,TC),甘油三酯(Triglyceride,TG)等血清生化指标. 1.5 样品的检测1.5.1 AST活性的测定按照AST活性检测试剂盒提供的操作方法进行检测。取5只干净的试管分别标上0、1、2、3、4号,各管加入0.1mol/L的磷酸缓冲溶液0.1ml,按照管号分别加入2mol/ml丙酮酸标准液0ml,0.05ml,0.1ml,0.15ml,0.20ml;基质缓冲液0.50ml,0.45ml,0.40ml,0.35ml,0.30ml;再加入2,4-二硝基苯肼液。混匀,37水浴锅中加热20min,各管加入0.4mol/L氢氧化钠5ml,室温放置10min,分光光度计OD(505nm)值。测得的各管吸光度值减去0号管吸光度值,所得的差为纵坐标;0-4号管酶活力(卡门式单位)依次为0,24,61,114,190,并以它们作为横坐标,作标准曲线。测定管中加入样品血清0.1ml,测定管和对照管加入基质液0.5ml。混匀,37水浴30min,各管加入2,4-二硝基苯肼液0.5ml,对照管再加入样品血清0.1ml。混匀,37水浴20min,各管加入0.4mol/L氢氧化钠5ml,室温放置10min,分光光度计测OD(505nm)值。查标准曲线,求得AST的活力单位。1.5.2 BUN活性的测定 按照BUN活性检测试剂盒提供的操作方法进行检测。取8只干净的试管分别标上0,1,2,3,4,5,6,7号,然后在1号管中加入蒸馏水0.02ml,27号管分别加入不同BUN标准液(10mmol/L)0.02ml,浓度分别10mmol/L,8 mmol/L,5 mmol/L,4 mmol/L,2 mmol/L,1 mmol/L,0.5 mmol/L。再在各管中加入1g/ml的肟溶液各1ml和酸应用液各1ml。混匀,置沸水中水浴15min,立即用自来水冷却。分光光度计测OD(520nm)值。测得的各管吸光度值减去0号管吸光度值,所得的差为纵坐标;以不同浓度的BUN标准溶液为横坐标,作标准曲线。测定管中加入待测样本0.02ml,再在管中加入1g/ml的肟溶液各1ml和酸应用液各1ml。混匀,置沸水中水浴15min,立即用自来水冷却。分光光度计测OD(520nm)值。根据测得的OD值,通过计算,求得BUN含量。280.1样本测试前的稀释倍数=尿素氮含量mg/L1.5.3 TC活性的测定按照TC活性检测试剂盒提供的操作方法进行检测。取3只干净的试管分别为空白管(B)、标准管(S)、测定管(T)。再在空白管中加入蒸馏水3l,标准管中加入标准液3l,测定管中加入血清3l。混匀,置37水浴锅中水浴5min,以空白管校零,在546nm波长下比色读取各管OD值,通过计算,求得TC值。总胆固醇含量(mmol/L)=ATCS/AS1.6 数据分析与处理试验结果用平均数(MeanSD)表示,统计分析采用SPSS软件(For Windows Version 17.0)。采用单因子方差(One-Way ANOVA)分析,以P0.05为显著水平。2.结果2.1 银杏叶加蝇蛆喂鸡对鸡生长性能变化试验结果见表1。由表1可见,B组,C组,E组末重分别比对照组提高了2.8%,4.5%,8.1%。平均日增重分别比对照组提高3.12%,7.53%,10.7%。料肉比各组均比对照组有所降低,其中以E组降低最明显。各组料肉比分别比对照组降低5.0%,13.3%,4.7%,13.7%。方差分析结果表明,E组末重和平均日增重与对照组相比均达到差异显著水平(P0.05)。E组相比较于B,D组平均日增重也达到差异显著水平(P0.05)。表1 银杏叶加蝇蛆喂鸡对鸡生长性能的影响项目A组B组C组D组E组11日龄重g80.53.4bc81.34.4c74.72.4a75.73.9a78.63.3b45日龄重g382.544.4ab393.124.2bc399.831.5bc366.225.4a413.526.3c平均日增重g8.630.36ab8.900.48bc9.280.30cd8.300.43a9.560.40d料肉比3.00:12.85:12.60:12.86:12.59:1注:同一行数据间标有字母不相同者,差异显著(P0.05),E组甘油三脂与总胆固醇指标与对照组相比有所降低,但没有达到差异显著水平。E组尿素氮水平与对照组相比明显降低,并达到差异显著水平(P0.05)。B组,C组与对照组相比也达到差异显著水平(P0.05)。表2 银杏叶加蝇蛆喂鸡对鸡血清生化指标的影响项目A组B组C组D组E组谷草转氨酶U/L240.016.4a220.87.1a212.02.5a217.316.0a232.322.6a甘油三脂m mol/L0.630.41a0.550.05a0.610.33a0.520.07a0.590.07a总胆固醇m mol/L3.130.93a2.860.12a2.930.67a2.730.45a2.670.44a尿素氮m mol/L0.960.03c0.760.10a0.790.08ab0.940.09bc0.700.07a注:同一行数据间标有字母不相同者,差异显著(P0.05)。2.3 银杏叶加蝇蛆喂鸡对鸡死亡率的变化试验结果见表3。由表3可见,各组死亡率为12.5%、2.5%、5%、2.5%、2.5%。与对照组相比,死亡率均不同程度降低。 3.讨论与分析3.1 银杏叶提取物加蝇蛆喂鸡对鸡生长性能的影响本试验中,银杏叶提取物加蝇蛆喂鸡能显著提高鸡的生长性能,相比单独添加银杏叶提取物的组别对鸡的生长性能的提高效果要好。原因可能是银杏叶提取物中富含黄酮苷类、萜内酯类、有机酸、单糖类、多糖类、有机醇类、氨基酸和多种微量元素,蝇蛆中则富含优质蛋白质和氨基酸等,这些营养物质是机体生长和疾病防治的物质基础,可不同程度地对机体的代谢产生影响。已有研究表明,银杏叶提取物具有促进绍兴鸭生长的作用。主要作用化学物质是黄酮,黄酮可以调节动物的下丘脑垂体靶器官生长轴,提高绍兴鸭体内生长激素(GH)的分泌。生长激素(GH)可以促进机体新陈代谢,调节生理机能,从而促进动物的生长发育11。另外,黄酮还可以影响阿片肽受体的水平,对动物摄食行为也发挥调节作用,从而提高动物的食欲,增加采食量,提高鸡的生长性能。银杏内酯具有抗血小板活化因子的作用,能溶解血栓,降低血液粘稠度,加快血液循环,增加体内物质的转化率,进而提高代谢水平,增加饲料转化率4。银杏叶提取物还可以影响5-羟色胺、乙酰胆碱等肠神经递质的释放而调节肠道平滑肌的活动,促进血液循环,提高营养物质的吸收,提高生产性能12。另有研究表明蝇蛆能够提高试验鸡的生长性能主要是由其高蛋白质和氨基酸含量、高蛋白质和氨基酸消化率共同作用的结果13。结果表明,单独以蝇蛆和适宜浓度的银杏叶提取物作为饲料添加剂喂鸡,可以有效地提高鸡的生长发育和提高饲料转化率,以适宜浓度的银杏叶提取物混合蝇蛆共同作为饲料添加剂对鸡的效果,比单独添加蝇蛆和银杏叶提取物更好。 3.2 银杏叶提取物加蝇蛆喂鸡对鸡血清生化指标的影响转氨酶的含量是反应肝脏健康状态的重要指标。当转氨酶含量升高时,表明肝脏发生病变或组织受到损伤,解毒能力下降。因此,转氨酶活性维持在一定水平,对发挥肝脏解毒功能,维持机体的代谢平衡具有重要作用。试验中E组与其他各组谷草转氨酶与对照组相比差异均不显著,说明日粮添加银杏叶提取物和蝇蛆没有显著影响鸡只的肝胆和心血管健康,也没有使骨组织和成骨组织的生长发育受到影响。血清总脂由胆固醇、甘油三酯、磷脂类及游离脂肪酸组成,其中甘油三脂与总胆固醇是反映血脂水平的两个重要指标。徐琪等研究表明,蝇蛆喂鸡可以显著降低鸡血脂水平14。国内有研究报道,银杏叶提取物对鸡血脂水平也有很好的降低作用15。其调节血脂作用机制是减少外源性脂质的吸收,促进体内脂质的排泄。和这本试验中E组甘油三酯和总胆固醇的指标比对照组有所降低的结果是一致的。E组尿素氮水平与对照组相比明显降低,并达到差异显著水平。说明银杏叶加蝇蛆喂鸡可以有效降低鸡血清尿素氮指标。一般来说,高蛋白饮食可以引起血清尿素氮含量的增加,若尿素氮含量持续升高,表明体内蛋白质分解代谢增强,氮沉积减少或肾功能不正常16。试验结果表明,银杏叶中配合蝇蛆喂鸡可以有效降低其尿素氮水平,维持肾功能,保持蛋白质代谢稳定,并以添加0.1%银杏叶提取物效果最好。3.3 银杏叶提取物加蝇蛆喂鸡对鸡死亡率的影响有药理试验表明,银杏叶提取物具有清除体内自由基、改变血液化学、降低血液粘度、改善微循环、提高免疫能力、抗菌、消炎、抗过敏、抗病毒等药理作用17。蝇蛆具有高蛋白,低脂肪,多种氨基酸以及铁,锌等微量元素,营养价值非常高。因此,银杏叶提取物加蝇蛆作为生物饲料添加剂对鸡的抵抗力可能会产生一些影响。本试验结果表明,与对照组相比,银杏叶加蝇蛆作为饲料添加剂喂鸡可以降低鸡的死亡率,其它各组也均不同程度地降低了鸡的死亡率。原因可能是由于雏鸡体内免疫系统发育尚未完全,免疫功能还不是很完善,比较容易受到病原微生物的感染,从而引发疾病,导致死亡。因此,在鸡日粮中添加银杏叶加蝇蛆能使其健康生长。4.小结以上研究表明,在鸡饲料中添加适量的银杏叶提取物,对鸡的生长起到积极的作用。而将银杏叶加蝇蛆作为生物饲料添加剂,可以有效提高鸡的生长性能,促进平均日增重,提高饲料转化率,维持蛋白质代谢平衡,减少鸡的死亡率。因此,研究银杏叶加蝇蛆作为新型饲料添加剂,对改善我国蛋白质缺乏的状况和研究中药无残留抗病药物具有重要意义。 参考文献1 中国科学院中国植物志编辑委员会. 中国植物志M.北京: 科学出版社,1979.2 江苏新医学院.中药大辞典(上)M.上海: 上海科学技术出版社,1986.3 高锦明, 王 蓝, 张鞍灵, 等. 银杏叶中有效成分的研究 J. 西北林学院学报, 1995, 10(4): 94- 100.4 管孝鞠. 银杏内酯药理作用研究进展J. 国外医学药学分册, 1995, 22(3) : 129- 1325 Chen j,Cheng w,Huang h.protective effects of ginko biloba extract against lyosopho sphatidy lcholine-in-duced vascular endithelial cell damage J .Acta Pharmacol sin ,1998,19(4) :359-3646 雷朝亮,钟昌珍.蝇蛆蛋白的开发利用的现状与前景J.湖北渔业,1990(2): 1219.7 李广宏,钟昌珍,宗良炳,等.蝇蛆蛋白粉的营养评价J.昆虫知识, 1997, 34(6): 347350.8 马惠钦.苍蝇的利用J.特种经济动植物, 1999(6):12.9 郑灵玲.不同基料配比培养蝇蛆的效果J.广东饲料,2002(10):1415.10 贾生福, 马彦彪. 蝇蛆粉对肉仔鸡增重效果试验J. 中国家禽,2007, 29(12) : 39,41.11 赵茹茜, 周玉传, 徐银学,等. 大豆黄酮对高邮鸭增重及血清某些激素水平和垂体GH mRNA表达的影响J. 农业生物技术学报,2002,10(2):1762179. 12 李红敬,李红胜,杨霁虹,等.银杏叶提取物对肠道平滑肌收缩幅度的影响J.信阳师范学院学报,1997,10(3):35-39. 13 任静雷,吴银宝等.蝇蛆粉对矮脚黄鸡生长性能和屠宰性能的影响J.中国家禽,2011,33(1)8-11.14 徐琪,谢恺舟,谢芳,等.萧山鸡血浆胆固醇含量及其与生产性能相关性分析J. 畜禽业, 2003(2):6-7.15 杨义芳,吴国友.银杏叶药理研究进展J.现代应用药学,1995,12(6):5-7.16 杨玉芬,卢德勋,许梓荣,等. 日粮纤维对于肥育猪生产性能和血清参数的影响J. 江西农业大学学报(自然科学版) , 2002, 24 (5) : 578 - 58217 邵继平, 王伯初, 陈 欣, 等. 银杏叶提取物药用价值的研究进展J. 重庆大学学报, 2003, 26(1): 132. 致谢经过近半年的努力,在老师和同学的帮助下,终于完成了本科阶段毕业设计及论文撰写。由于性资鸳钝,本论文涉及的很多知识对我而言,都是一个新的领域。之所以能够完成本论文,得益于诸多方面的关心和帮助,在本论文即将完成之际,向所有关心、帮助和支持我的人们谨致诚挚谢意。首先,我由衷的感谢我的指导教师张淼博士对我的试验和论文的精心指导和大力支持。张淼老师严谨的治学态度,缜密的思维逻辑,孜孜不倦的工作作风和大胆创新的进取精神对我产生了重要影响。他渊博的知识、开阔的视野和敏锐的思维给了我深深的启迪。同样,我要感谢给我们试验提供大力支持的南通文圣生态特种养殖有限公司的老总刘文正先生,刘总曾说过,不仅要跟他学技术,更要跟他学做人。年轻人一定要多看多想多做多吃苦,对此我感受颇深,也真真切切跟刘总学到很到实用技术和做人的道理,令我受益匪浅,终生受用。四年的本科阶段学习生活对我专业知识的丰富和个人人格的塑造有着深刻的影响,感谢学院的各位老师对我四年大学生活的悉心教导和热心帮助。感谢陪我走过四年美好时光的所有的同学和朋友们,正是因为有了你们的支持和鼓励,我的大学生活才会如此绚丽多彩,再次对关心帮助我的老师和同学们表示衷心地感谢。 设 计(论 文)开 题 报 告1结合毕业设计(论文)课题情况,根据所查阅的文献资料,每人撰写不少于1000字的文献综述:银杏叶在我国作为药物使用已经有500多年历史,银杏叶的提取物含有黄酮类、内酯类、酚类等多种生物活性成分,已成为一种全天然、无公害的绿色饲料添加剂, 在畜禽养殖中的应用前景十分广阔。据报道, 目前从银杏叶中提取分离和已证实的化学成分约有200 多种,其中主要有黄酮苷类、萜内酯类、有机酸、单糖类、多糖类、有机醇类、醛类、酮类、生物碱类、甾醇类、17 种氨基酸和25 种微量元素,以及维生素、叶绿素、胡萝卜素等。其中黄酮类和萜内酯类等是银杏叶中发挥独特药理活性的有效成分。黄酮类化合物含量为22% 27%。黄酮类是氧自由基清除剂, 其药理作用如抗炎、抗组胺、抗cAMP 磷酸乙酯酶等活性均与此有关。萜内酯类化合物在抗炎、肾病、胃肠道疾病、气管高过敏性疾病、移植物的排异反应、神经系统及免疫系统等方面均具有显著作用 银杏叶提取物具有十分独特的功能。银杏叶提取物含有黄酮类、内酯类、酚类等多种活性成分, 具有免疫调节功能, 能抑制病原微生物,提高动物的生殖能力和生长性能及抗氧化应激能力, 对家畜、家禽的健康和提高抗病能力均有明显作用, 且无毒副作用, 可广泛用于猪、鸡、牛、羊、鱼、虾等多种畜禽、水产动物中。此外, 银杏叶提取物具有改善肉鸡生长性能、提高增重速度、改善饲料转化率、降低腹脂率和改善胴体品质等作用, 作为饲料添加剂应用前景广阔。蝇蛆,即为苍蝇的幼虫。蝇蛆是营养成分全面的优质蛋白资源。分析测试结果表明,蝇蛆含粗蛋白5565、脂肪2612,无论是原物质或是干粉、蝇蛆的粗蛋白含量都与鲜鱼、鱼粉及肉骨粉相近或略高,蝇蛆的营养成分较全面,含有动物所需要的17种氨基酸,且每种氨基酸的含量均高于鱼粉,必需氨基酸和蛋氨酸含量分别是鱼粉的23倍和27倍,赖氨酸含量是鱼粉的26倍。蝇蛆原物质和干粉中的必需氨基酸总量分别为4409和4383,均超过联合国粮食与农业组织和世界卫生组织提出的参考值40,必需氨基酸和非必需氨基酸总量值分别为079和078,均超过联合国粮食与农业组织和世界卫生组织提出的参考值06。同时,蝇蛆还含有多种生命活动所需要的微量元素,如铁、锌、锰、磷、钴、铬、镍、硼、钾、钙、镁、铜、硒、锗等正因为银杏叶提取物和蝇蛆有特殊的营养价值,所以通过设计实验,用蝇蛆和银杏叶提取物饲喂实验小鸡,30日龄后检测鸡的生长能力,如平均日增重、饲料转化率等,以及各种血清学生化指标如谷草转氨酶、谷丙转氨酶、总蛋白,白蛋白,球蛋白,尿素氮等等,从而全面获得银杏叶饲喂鸡对鸡产生的影响,进而对日常家禽饲料的添加,提高生产效率起到指导作用。参考文献:1陈发兴, 赖钟雄. 银杏愈伤组织细胞生长及其黄酮苷含量J. 福建农林大学学报: 自然科学版, 2004, 33( 4) : 456- 458.2高锦明, 王蓝, 张鞍灵, 等. 银杏叶中有效成分的研究J. 西北林学院学报, 1995, 10( 4) : 94- 100.3马忠开, 何关福, 印万芬. 中国特有种子植物高山三尖杉叶双黄酮成分J. 植物学报, 1984, 25( 4) : 416- 418.4博丰永, 刘永隆, 尚天民, 等. 黄酮类化合物在植物界的分布J. 植物学报, 1980, 22( 1) : 87- 92.5Chen J , Chen W, Huang H. Protective effects ofGinkgo biloba extract against loysopho sphatidy lcholine- inducedvascular endithelial cell damage J. Acta PharmacolSin, 1998, 19(4): 359- 364.6盛建国, 黄东余. 银杏叶提取工艺及其抑菌性能探讨J. 食品工业科技, 2005, 26( 1) : 65- 67.7 雷朝亮,钟昌珍.蝇蛆蛋白的开发利用的现状与前景J.湖北渔业,1990(2): 1219.8 李广宏,钟昌珍,宗良炳,等.蝇蛆蛋白粉的营养评价J.昆虫知识, 1997, 34(6): 347350.9 马惠钦.苍蝇的利用J.特种经济动植物, 1999(6):12.10 郑灵玲.不同基料配比培养蝇蛆的效果J.广东饲料,2002(10):1415.11 雷朝亮,钟昌珍,宗良炳,等.蝇蛆几丁糖的免疫调节作用研究J.华中农业大学学,1997(3):259260.12裴凌鹏, 惠伯棣, 金宗濂, 等. 黄酮类化合物的生理活性及其制备技术研究进展 J. 食品科学, 2004, 25( 2) : 204.13叶 敏, 果德安. 银杏萜内酯的研究概况 J . 世界科学技术-中医药现代化, 2003, 5( 1 ) : 35-36.14 田季雨, 刘澎涛, 李 斌, 等. 银杏叶提取化学成分及药理活性研究进展 J . 国外医学中医中药分册, 2004, 26( 3) : 142.15 张建平, 许利剑, 徐凛峰, 等. 银杏叶提取物对大鼠实验性重症胰腺炎肠黏膜屏障功能的影响 J . 江苏医药, 2004, 30( 1) : 18-20.16 王琼, 程景林, 赵维中, 等. 银杏叶提取物对胃黏膜保护作用的实验研究J. 中华消化杂志, 2001, 21( 2) : 120-121.17Shetty R, Kumary M U, Atankar K S. Effect of Ginkgo biloba extract on ethanol - inducedgastic mucosal Iesions in ratsJ. Indian J Pharmacol, 2000, 32(5): 313- 317.设 计(论 文)开 题 报 告2本课题要研究或解决的问题和拟采用的研究手段(途径):研究解决的问题:通过合理的试验设计,借助南通文圣草鸡养殖的设备进行实验,判定银杏叶提取物加蝇蛆喂鸡对鸡生长性能及血清生化指标的影响,并提出对生产实际有一定指导意义的饲料配方。研究手段:1.查阅文献,设计实验 2.根据设计的实验,进行实验并记录数据和情况 3.整理数据,撰写论文毕业设计(论文)预期成果及创新:1预期成果:毕业论文一篇;2. 课题研究意义及创新:设计的一种新的饲喂方案对鸡抗应激能力的影响,研究了银杏叶的药用价值,计算出对生产实际合适的剂量,对生产实际有一定的指导意义。扩大规模化生产,提高经济效益。设 计(论 文)开 题 报 告指导教师意见:1对“文献综述”的评语:2对本课题的深度、广度及工作量的意见和对设计(论文)结果的预测:3.是否同意开题: 同意 不同意指导教师: 年 月 日所在专业审查意见:负责人: 年 月 日
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