07级蛋白质的生物合成

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1、生物中心法则生物中心法则忠实复制忠实复制忠实转录忠实转录忠实翻译忠实翻译一、遗传密码和密码单位一、遗传密码和密码单位 1.遗传密码遗传密码(genetic code)指指mRNA中的核苷酸序列与多肽中氨基酸序中的核苷酸序列与多肽中氨基酸序列之间的对应关系列之间的对应关系,通常是指核苷酸三联体决定通常是指核苷酸三联体决定氨基酸的对应关系氨基酸的对应关系,故也称三联体密码或密码子故也称三联体密码或密码子.2.密码单位密码单位 1954年物理学家年物理学家Gamov G 首先对遗传密码首先对遗传密码进进行探讨行探讨:41=4;42=16;43=64,足以编码足以编码20种氨基酸种氨基酸,密码子密码子

2、(codon)应是三联体（应是三联体（triplet）.密码子或称三联体密码，即密码子或称三联体密码，即mRNA上决定一上决定一个特定氨基酸的三个核苷酸个特定氨基酸的三个核苷酸。3.密码子的确定密码子的确定 用各种人工合成模板在体外翻译蛋白质的用各种人工合成模板在体外翻译蛋白质的方方法确定法确定 用核糖体结合技术测定密码子中的核苷酸排用核糖体结合技术测定密码子中的核苷酸排列顺序列顺序 1961 1965年年 4 年时间，完全确定了编码年时间，完全确定了编码20种天然氨基酸的密码子，编出了遗传密码字典。种天然氨基酸的密码子，编出了遗传密码字典。12密密码码的的第第一一个个碱碱基基5 密密码码的的

3、第第三三个个碱碱基基3 U U C CA AGGUUC CA AGGUUC CA AGGUUC CA AGG密码的第二个碱基密码的第二个碱基112121212二、遗传密码的基本特征二、遗传密码的基本特征 1.遗传密码的连续性遗传密码的连续性(commaless)密码子之间没有任何起密码子之间没有任何起“标点标点”作用的空格作用的空格,阅阅 读读mRNA 时是连续的时是连续的,一次阅读一次阅读3 3个核苷酸个核苷酸(碱基碱基)2.遗传密码的不重叠性遗传密码的不重叠性(nonoverlapping)在绝大多数生物中在绝大多数生物中,阅读阅读mRNA时是以密码时是以密码子为单位，不重叠地阅读。子为单

4、位，不重叠地阅读。少数大肠杆菌噬菌体的少数大肠杆菌噬菌体的RNA基因组中部分基因组中部分基因的遗传密码是重叠的。基因的遗传密码是重叠的。不重叠密码不重叠密码重叠密码重叠密码 3.3.遗传密码具有简并性（遗传密码具有简并性（degeneracy）(1)(1)除除Met(AUG)和和Trp(UGG)外外,每个氨基酸每个氨基酸都有两个或更多的密码子都有两个或更多的密码子,这种现象称为密码子这种现象称为密码子的简并性（的简并性（degenecy）。）。(2)(2)同义密码：同义密码：同一个氨基酸的不同密码子称同一个氨基酸的不同密码子称同义密码子（同义密码子（synonyms）。）。(3)简并性的生物学

5、意义简并性的生物学意义:减少有害突变减少有害突变,对生物物种的稳定有一定意义对生物物种的稳定有一定意义 (4)(4)密码的简并性往往表现在密码子的第三位密码的简并性往往表现在密码子的第三位碱基上。碱基上。4.密码的变偶性密码的变偶性摆动性摆动性(wobble)tRNA上的反密码子与上的反密码子与mRNA上的密码子配对上的密码子配对时时,密码子的第一位、第二位碱基配对是严格的密码子的第一位、第二位碱基配对是严格的,第三位碱基可以有一定变动第三位碱基可以有一定变动,Crick称这种现象为称这种现象为密码的摆动性或变偶性密码的摆动性或变偶性(wobble)。如。如tRNA反密反密码码子第一位的子第一

6、位的IA、U、C配对。配对。（在密码子（在密码子3 端的碱基和反密码子端的碱基和反密码子5 端的互补碱基之间端的互补碱基之间形成的相对松散的碱基配对摇摆现象。形成的相对松散的碱基配对摇摆现象。）显然显然,密码子的专一性基本取决于前两位碱基密码子的专一性基本取决于前两位碱基,第三位碱基起的作用有限第三位碱基起的作用有限(有较大灵活性有较大灵活性)。所以几乎所有氨基酸的密码子都可以用所以几乎所有氨基酸的密码子都可以用 和和 来表示。来表示。切记：切记：在书写或阅读密码子、在书写或阅读密码子、反密码子的碱基顺序时，反密码子的碱基顺序时，一定都按一定都按5 5 3 3 方向方向阅读！阅读！tRNA 反

7、密码子中除反密码子中除A、U、G、C 四种碱四种碱基外基外,还经常在第一位出现次黄嘌呤还经常在第一位出现次黄嘌呤(I)。I 可以可以与与A、U、C 三者之间形成碱基对三者之间形成碱基对,使带有次黄使带有次黄嘌呤的反密码子可以识别更多的简并密码子。嘌呤的反密码子可以识别更多的简并密码子。由于变偶性的存在由于变偶性的存在,细胞内只需要细胞内只需要32种种tRNA,就能识别就能识别61个编码氨基酸的密码子。个编码氨基酸的密码子。原核和真核细胞都只合成约原核和真核细胞都只合成约30种带有反密码种带有反密码子的子的tRNA。5.5.遗传密码的通用性和变异性遗传密码的通用性和变异性 (1)(1)通用性通用

8、性:指各种低等和高等生物指各种低等和高等生物,包括病包括病毒、细菌及真核生物毒、细菌及真核生物,基本上共用一套遗传密码基本上共用一套遗传密码.(2)(2)密码的变异性密码的变异性:目前已知线粒体目前已知线粒体DNA(mtDNA)的编码方式与通用遗传密码子有所不同的编码方式与通用遗传密码子有所不同.6.6.密码子有起始密码子和终止密码子密码子有起始密码子和终止密码子 (1)起始密码子起始密码子:AUG(Met)多数多数原核原核,真核生物真核生物 GUG 少数情况少数情况 (2)终止密码子终止密码子:UAA、UAG、UGA 不编码任何氨基酸不编码任何氨基酸,又称为无义密码子又称为无义密码子(non

9、sense codons)或终止密码子或终止密码子(chain-terminating codons),它们单个或串联在一起用于它们单个或串联在一起用于多肽链翻译的结束，没有相应的多肽链翻译的结束，没有相应的tRNA存在。存在。许多许多原核生物原核生物在在mRNA的起始密码子上游约的起始密码子上游约10个核苷酸处个核苷酸处(-10区区),通常有一段富含嘌呤核苷通常有一段富含嘌呤核苷酸的序列酸的序列,与与16S rRNA的的3 端部分互补端部分互补,有助于有助于mRNA与核糖体小亚基的结合。该序列最初是由与核糖体小亚基的结合。该序列最初是由Shine-Dalgarno 发现的发现的,故称之为故称

10、之为SD序列序列(Shine-Dalgarno sequence)。关于关于SD序列序列一、核糖体是蛋白质合成的工厂一、核糖体是蛋白质合成的工厂 用放射性同位素标记氨基酸，注射到小鼠体用放射性同位素标记氨基酸，注射到小鼠体内，经短时间后取出肝脏，制成匀浆，离心，分内，经短时间后取出肝脏，制成匀浆，离心，分离各细胞器，发现核糖体放射性最强，说明核糖离各细胞器，发现核糖体放射性最强，说明核糖体是蛋白质合成部位。体是蛋白质合成部位。二、核糖体的结构二、核糖体的结构原核生物原核生物真核生物真核生物三、核糖体的活性位点三、核糖体的活性位点四、核糖体的功能四、核糖体的功能 参与多肽链的启动、延长、终止，并

11、参与多肽链的启动、延长、终止，并“移动移动”含有遗传信息的模板含有遗传信息的模板mRNAUp-to-date Viewpoint:“核糖体是核糖体是1种核酶种核酶,它催化肽键的形成它催化肽键的形成,将蛋将蛋白质生物合成牢牢地控制在白质生物合成牢牢地控制在RNA的手中。的手中。”第三节第三节 转移转移RNA的功能的功能 在蛋白质合成中，在蛋白质合成中，tRNA起着运载氨基酸的起着运载氨基酸的作用，按照作用，按照mRNA链上的密码子所决定的氨基酸链上的密码子所决定的氨基酸顺序将氨基酸转运到核糖体的特定部位。顺序将氨基酸转运到核糖体的特定部位。tRNA有两个关键部位：有两个关键部位：3端端CCA:接

12、受氨基酸接受氨基酸,形成氨酰形成氨酰-tRNA.需需ATP提供活化氨基酸所需的能量。提供活化氨基酸所需的能量。与与mRNA结合部位结合部位反密码子部位反密码子部位(tRNA的接头作用的接头作用)此外此外,tRNA上尚有上尚有(3)识别氨酰识别氨酰tRNA合成酶的合成酶的位点位点,(4)核糖体识别位点核糖体识别位点3 5 ICCA-OH5 3 CCA-OHG G CC C G密码子与反密码子的密码子与反密码子的阅读方向均为阅读方向均为5 5 3 3 两者反向平行配对。两者反向平行配对。一、肽链延伸合成的方向和速度一、肽链延伸合成的方向和速度 1.方向方向 N 端端 C 端端 2.速度速度 肽链延

13、伸的速度极快，一个核糖体合成一肽链延伸的速度极快，一个核糖体合成一条完整的血红蛋白条完整的血红蛋白-链链(146个个AA)需需3分钟分钟,平平均均0.8AA/秒；大肠杆菌秒；大肠杆菌 20个个AA/秒。秒。二、二、mRNA 上翻译的方向上翻译的方向 1.用人工合成的多核苷酸作模板证明：用人工合成的多核苷酸作模板证明：2.翻译方向：翻译方向：5 3 三、原核生物蛋白质生物合成的分子机制三、原核生物蛋白质生物合成的分子机制l氨基酸在掺入肽链前必须被激活，这在氨基酸在掺入肽链前必须被激活，这在胞液中胞液中进行。进行。l氨基酸的激活是指各种参加蛋白质合成的氨基酸的激活是指各种参加蛋白质合成的AA与携带

14、它的相应的与携带它的相应的tRNA结合成结合成氨酰氨酰-tRNA的的过程。激活反应在过程。激活反应在氨酰氨酰-tRNA 合成酶合成酶的催化下的催化下进行。进行。(一一)氨基酸的激活氨基酸的激活氨基酸的激活氨基酸的激活 1.部位部位:细胞质细胞质 2.酶酶:氨酰氨酰-tRNA合成酶合成酶 3.能量能量:消耗消耗2ATP 4.产物产物:氨酰氨酰-tRNA 甲酰化产物甲酰化产物 f Met-tRNA(原核生物起始原核生物起始AA)5.激活过程激活过程:1)氨基酸氨基酸-AMP-酶复合物的形成酶复合物的形成 2)氨基酸从氨基酸氨基酸从氨基酸-AMP-酶复合物转移到相酶复合物转移到相应的应的tRNA上上

15、 AA+ATP+E AA-AMP-E +PPiMg 2+Mn 2+AA-AMP-E+tRNA 氨酰氨酰-tRNA+AMP+Ev氨基酸激活的总反应式是：氨基酸激活的总反应式是：氨酰氨酰-tRNA-tRNA合成酶合成酶氨基酸氨基酸+ATP+tRNA+H2O 氨酰氨酰-tRNA+AMP+PPi 20种氨基酸中种氨基酸中,每一种氨基酸都有各自特异每一种氨基酸都有各自特异的氨酰的氨酰-tRNA合成酶。合成酶。氨酰氨酰-tRNA合成酶具有高度的专一性合成酶具有高度的专一性:它既它既能识别相应的氨基酸（能识别相应的氨基酸（L-构型），又能识别与此构型），又能识别与此氨基酸相对应的一个或多个氨基酸相对应的一个

16、或多个tRNA 分子；分子；氨酰氨酰-tRNA-tRNA合成酶具有校对功能：合成酶具有校对功能：即使即使AA识识别出现错误，此酶具有水解功能，可以水解非正别出现错误，此酶具有水解功能，可以水解非正确组合的氨基酸和确组合的氨基酸和tRNA之间形成的共价联系。之间形成的共价联系。这种高度专一性和校对作用这种高度专一性和校对作用,保证了氨基酸保证了氨基酸与特定的与特定的tRNA准确匹配准确匹配,从而使蛋白质的合成具从而使蛋白质的合成具有一定的保真性有一定的保真性(翻译过程的错误频率翻译过程的错误频率10-4)。(氨酰氨酰-tRNA合成酶与合成酶与tRNA的相互作用被称为的相互作用被称为“第二遗第二遗

17、传密码传密码”)(二二)肽链合成的起始肽链合成的起始 1.70S起始复合物的形成起始复合物的形成 (1)起始氨基酸及起始起始氨基酸及起始tRNAi 起始氨酰起始氨酰-tRNAi:甲硫氨酰甲硫氨酰-tRNAi 甲酰化：甲酰化：起始氨基酸起始氨基酸原核：甲酰甲硫氨酸原核：甲酰甲硫氨酸 f Met 真核：甲硫氨酸真核：甲硫氨酸 Met 甲酰化后才能与甲酰化后才能与IF2 结合生成结合生成30S复合物复合物 甲酰化防止起始氨基酸进入延伸中的肽链甲酰化防止起始氨基酸进入延伸中的肽链 使使f Met-tRNAi 结合在核糖体结合在核糖体P部位部位 延长因子延长因子EF-Tu识别未甲酰化的识别未甲酰化的 M

18、et-tRNA原核：甲酰甲硫氨酸原核：甲酰甲硫氨酸(fMet)翻译起始需要有一翻译起始需要有一个接载个接载fMet(原核生物原核生物)或或Met(真核生物真核生物)的起的起始始tRNA(tRNAi)。但因但因tRNAi的的TC环没有与核糖体的环没有与核糖体的A位位处处5S rRNA的一序列互的一序列互补的保守序列，所以起补的保守序列，所以起始用的始用的tRNAi只能进入只能进入核糖体的核糖体的P位。位。细菌中的起始因子细菌中的起始因子:IF1:结合在结合在30S亚基上作为完全起始复合物亚基上作为完全起始复合物的一部分，起稳定此复合物的作用。的一部分，起稳定此复合物的作用。IF2:结合到特异的起

19、始结合到特异的起始tRNA(fMet-tRNAi),并将起始并将起始tRNA置于小亚基上。置于小亚基上。IF3:30S小亚基特异地与小亚基特异地与mRNA起始部位结起始部位结合需要合需要IF3。IF3还作为还作为70S核糖体的解离因素，产核糖体的解离因素，产生生30S亚基。亚基。(2)70S(2)70S起始复合物的形成起始复合物的形成(三三)肽链的延长肽链的延长 肽链的延长分为肽链的延长分为4 4个步个步骤：骤：进位进位 转肽转肽 脱落脱落 移位移位-核糖体循环核糖体循环 1.1.进位：进位：1)1)一个新的一个新的氨酰氨酰-tRNA进入进入A位位 2)延长因子参加延长因子参加 3)消耗消耗1

20、个个GTP 原核生物蛋白质合成的延伸因子原核生物蛋白质合成的延伸因子因子因子基因基因分子量分子量分子数分子数/细细胞胞 功能功能抑制剂抑制剂E F-E F-TuTuTuf Tuf A,A,tuf tuf B B43,22543,22570,00070,000与氨基酰与氨基酰tRNAtRNA及及GTPGTP结合结合黄 色 霉黄 色 霉素素EF EF TsTsTsrTsr74,00074,00010,00010,000结合结合EF-TuEF-Tu，取代，取代GDPGDPEF GEF G77,44477,44470,00070,000结合核糖体和结合核糖体和GTPGTP梭 链 孢梭 链 孢酸酸 2.

21、转肽：转肽：1)肽酰基从肽酰基从P位转到位转到A位位,肽键的形成。肽键的形成。2)负责肽键合成的酶称为肽酰转移酶负责肽键合成的酶称为肽酰转移酶(peptityl transferase)，简称转肽酶。，简称转肽酶。3)肽的转移是核糖体大亚基肽的转移是核糖体大亚基(50S或或60S)的功的功能。能。4)抗菌素嘌呤霉素抑制蛋白质合成抗菌素嘌呤霉素抑制蛋白质合成,使新生的使新生的肽链在合成未完成之前就释放出来。肽链在合成未完成之前就释放出来。3.脱落脱落 转肽后，转肽后，P部位上空载的部位上空载的tRNA经出口位点经出口位点(E)脱落脱落 4.移位：移位：1)核糖体向核糖体向mRNA 3 端移动一个

22、密码子，移端移动一个密码子，移位导致肽酰位导致肽酰-tRNA从从A位点移出，进入位点移出，进入P位点位点;空着的空着的A位点为下一个密码子对应的氨酰位点为下一个密码子对应的氨酰-tRNA的进入作好准备。的进入作好准备。2)需要需要1个个GTP 3)三位点模型三位点模型:1989年德国的年德国的Nierhaus 等提等提出模型认为，细菌出模型认为，细菌tRNA及及mRNA相对于核糖体相对于核糖体发生移位后，发生移位后，空载空载tRNA并未立即从核糖体上解并未立即从核糖体上解离下来，而是移到了离下来，而是移到了E位点（出口位点），当新位点（出口位点），当新的氨酰的氨酰-tRNA结合到结合到A位点时

23、，位点时，E位点的空载位点的空载tRNA才解离下来，此过程涉及到核糖体构象的才解离下来，此过程涉及到核糖体构象的变化变化,该变化有利于核糖体对正确氨酰该变化有利于核糖体对正确氨酰-tRNA 的的识别作用，从而提供了蛋白质合成的精确性。识别作用，从而提供了蛋白质合成的精确性。(四四)肽链合成的终止与释放肽链合成的终止与释放 1.终止信号终止信号 1)终止密码子终止密码子:UAA、UGA、UAG 正常细胞不含能和终止密码子互补的反密正常细胞不含能和终止密码子互补的反密码子的码子的tRNA，这些终止密码子能被终止因子所，这些终止密码子能被终止因子所识别。识别。2)释放因子（释放因子（release

24、factor，RFs）：）：RF1:识别识别UAA、UAG RF2:识别识别UAA、UGA RF3:不识别终止密码子不识别终止密码子,但刺激另外两个但刺激另外两个因子的活性，协助肽链释放因子的活性，协助肽链释放 2.终止机制终止机制:1)释放因子与终止密码子结合使转肽酶活性释放因子与终止密码子结合使转肽酶活性变成水解酶活性，水解了变成水解酶活性，水解了P位点上多肽与位点上多肽与tRNA之间的键，释放出多肽和之间的键，释放出多肽和tRNA。2)在基因中，终止密码子总是紧接在编码最后在基因中，终止密码子总是紧接在编码最后一个氨基酸的密码子后面。任何一个三联密码发一个氨基酸的密码子后面。任何一个三联

25、密码发生无义突变时都足以终止其基因的蛋白质合成。生无义突变时都足以终止其基因的蛋白质合成。3)在原核生物的基因中，在原核生物的基因中，UAA是最常见的终止是最常见的终止密码，其它依次为密码，其它依次为UGA和和UAG，但阅读，但阅读UGA存存在更多的错误。（错误阅读终止密码就是一个氨在更多的错误。（错误阅读终止密码就是一个氨酰酰-tRNA对它产生错误反应，使蛋白质合成继续对它产生错误反应，使蛋白质合成继续进行，直到另一个终止密码出现）。进行，直到另一个终止密码出现）。多核糖体多核糖体 是一个是一个mRNA分分子与一定数目的单个子与一定数目的单个核糖体结合而成的，核糖体结合而成的，形成念珠状形成

26、念珠状。每个。每个核糖体可以独立完成核糖体可以独立完成一条肽链的合成，提一条肽链的合成，提高了翻译的效率。高了翻译的效率。原核生物原核生物 转录与翻译相偶联转录与翻译相偶联 前体蛋白是没有活性的，常常要进行一系列前体蛋白是没有活性的，常常要进行一系列翻译后加工，才能成为有功能的成熟蛋白。蛋白翻译后加工，才能成为有功能的成熟蛋白。蛋白质合成后的加工主要有以下几种方式。质合成后的加工主要有以下几种方式。1.氨基端和羧基端的修饰：氨基端和羧基端的修饰：在原核生物中几在原核生物中几乎所有蛋白质都是从乎所有蛋白质都是从N-甲酰蛋氨酸开始，真核生甲酰蛋氨酸开始，真核生物从蛋氨酸开始。甲酰基经酶水解而除去，

27、蛋氨物从蛋氨酸开始。甲酰基经酶水解而除去，蛋氨酸或者氨基端的一些氨基酸残基常由氨肽酶催化酸或者氨基端的一些氨基酸残基常由氨肽酶催化而水解除去。因此，成熟的蛋白质分子的而水解除去。因此，成熟的蛋白质分子的N-端没端没有甲酰基，或没有蛋氨酸。同时有甲酰基，或没有蛋氨酸。同时,某些蛋白质分某些蛋白质分子氨基端要进行乙酰化子氨基端要进行乙酰化,在羧基端也要进行修饰在羧基端也要进行修饰(五五)肽链的折叠和加工处理肽链的折叠和加工处理 2.除去信号肽：除去信号肽：某些蛋白质氨基端有一段某些蛋白质氨基端有一段1530个氨基酸残基的顺序，这段顺序称作信号个氨基酸残基的顺序，这段顺序称作信号肽，与蛋白质传送到特

28、定的细胞器、膜，或分泌肽，与蛋白质传送到特定的细胞器、膜，或分泌出细胞外有关。信号肽在运送过程中通常由专一出细胞外有关。信号肽在运送过程中通常由专一的酶催化而水解除去。的酶催化而水解除去。3.羟基氨基酸的磷酸化：羟基氨基酸的磷酸化：某些蛋白质分子中某些蛋白质分子中的丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸残基的羟基，在酶催的丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸残基的羟基，在酶催化下被化下被ATP磷酸化。磷酸化在酶的活性调节中有磷酸化。磷酸化在酶的活性调节中有重要意义。重要意义。4.羧化反应：羧化反应：某些蛋白质某些蛋白质,如凝血酶等凝血因如凝血酶等凝血因子子,含有多个含有多个-羧基羧基Glu,这一羧基是在需这一羧基是在需Vi

29、t K的酶催化下进行的。的酶催化下进行的。5.羟基化反应羟基化反应:胶原蛋白中的脯氨酸与赖氨胶原蛋白中的脯氨酸与赖氨酸的羟基化，由相应的羟基化酶催化完成。酸的羟基化，由相应的羟基化酶催化完成。6.甲基化反应：甲基化反应：某些蛋白质中的赖氨酸残基某些蛋白质中的赖氨酸残基需要甲基化，某些谷氨酸残基的羧基也要甲基需要甲基化，某些谷氨酸残基的羧基也要甲基化，以除去负电荷。化，以除去负电荷。7.加糖链：加糖链：糖蛋白的糖链是蛋白质合成之后糖蛋白的糖链是蛋白质合成之后,在通过高尔基体时，经过糖化而形成的。糖链或在通过高尔基体时，经过糖化而形成的。糖链或加在天冬氨酸残基上，或加在丝氨酸、苏氨酸残加在天冬氨酸

30、残基上，或加在丝氨酸、苏氨酸残基上。基上。8.加辅基：加辅基：蛋白质与辅基的结合也是在翻译蛋白质与辅基的结合也是在翻译之后进行的，如乙酰之后进行的，如乙酰CoA羧化酶的辅基生物素羧化酶的辅基生物素和细胞色素和细胞色素C的血红素。的血红素。9.二硫键的形成：二硫键的形成：真核细胞合成的某些蛋白真核细胞合成的某些蛋白质，往往能自发地折叠形成其天然构像，分子内质，往往能自发地折叠形成其天然构像，分子内的半胱氨酸的巯基之间形成共价键二硫键。二的半胱氨酸的巯基之间形成共价键二硫键。二硫键在稳定蛋白质空间构型中起着重要作用。例硫键在稳定蛋白质空间构型中起着重要作用。例如胰岛素分子的成熟是借核糖体上释放的前

31、胰岛如胰岛素分子的成熟是借核糖体上释放的前胰岛素原经自发折叠、形成二硫键，然后再切除素原经自发折叠、形成二硫键，然后再切除C肽肽而形成的。而形成的。10.蛋白质前体的裂解：蛋白质前体的裂解：一种蛋白质前体能产一种蛋白质前体能产生多种多肽激素，如垂体产生的几种小肽激素是生多种多肽激素，如垂体产生的几种小肽激素是来源于同一个大的蛋白质前体。来源于同一个大的蛋白质前体。11.新生肽链折叠成有活性的构象：需要分子新生肽链折叠成有活性的构象：需要分子伴侣伴侣(molecular chaperones)辅助。辅助。12.蛋白质自我剪接：蛋白质自我剪接：1990年，年，Hirata等首次等首次报道一种新的蛋

32、白质加工方式蛋白质自我剪报道一种新的蛋白质加工方式蛋白质自我剪接。他们发现，酿酒酵母细胞基因接。他们发现，酿酒酵母细胞基因TFP1表达生表达生成两种蛋白，较大的（成两种蛋白，较大的（69103）是液泡）是液泡HATPase的催化亚基，它来自的催化亚基，它来自TFP1基因基因5 编码区编码区和和3 编码区，较小的（编码区，较小的（50103）是由该基因中）是由该基因中央区编码的。他们证明，这两种蛋白是同一条多央区编码的。他们证明，这两种蛋白是同一条多肽链经过自我剪接产生的，较小的蛋白是被切割肽链经过自我剪接产生的，较小的蛋白是被切割下来的部分，较大的蛋白在切除较小蛋白后再连下来的部分，较大的蛋白

33、在切除较小蛋白后再连接而成。接而成。蛋白质自我剪接在原核生物和单细胞真核生蛋白质自我剪接在原核生物和单细胞真核生物中均已发现。迄今已在物中均已发现。迄今已在20多种生物的近多种生物的近30种蛋种蛋白质分子中发现蛋白内含肽，这些蛋白质大约一白质分子中发现蛋白内含肽，这些蛋白质大约一半参与核酸代谢。蛋白内含肽常具有一定的生物半参与核酸代谢。蛋白内含肽常具有一定的生物活性，如核酸内切酶的活性。此外，许多蛋白内活性，如核酸内切酶的活性。此外，许多蛋白内含肽插入至蛋白质高度保守区（如活性中心附含肽插入至蛋白质高度保守区（如活性中心附近），这一方面迫使蛋白质前体必须经过剪接才近），这一方面迫使蛋白质前体必

34、须经过剪接才能成熟能成熟,另一方面也有利于蛋白内含肽自我保护。另一方面也有利于蛋白内含肽自我保护。切除切除连接连接蛋白质的自我剪接蛋白质的自我剪接四、四、蛋白质合成所需的能量蛋白质合成所需的能量v蛋白质的合成是一个高耗能过程蛋白质的合成是一个高耗能过程 AA活化活化 2个高能磷酸键（个高能磷酸键（ATP）肽链起始肽链起始 1个（个（70S复合物形成，复合物形成，GTP）进位进位 1个（个（GTP）移位移位 1个（个（GTP）第一个氨基酸掺入需消耗第一个氨基酸掺入需消耗3个个(活化活化2+起始起始1),以后每掺入一个以后每掺入一个AA需要消耗需要消耗4个（活化个（活化2个个+进进位位 1个个+移

35、位移位1个）高能键。个）高能键。从氨基酸开始合成一个含从氨基酸开始合成一个含200个残基的蛋白个残基的蛋白质需要消耗多少高能磷酸键质需要消耗多少高能磷酸键?活化一个氨基酸活化一个氨基酸 -2 2002=400 起始一次起始一次 ：-1 形成一个肽键：形成一个肽键：-2 1992=398 共消耗高能键共消耗高能键 4003981=799五、活性肽合成的特征五、活性肽合成的特征 P.285-286P.285-286 第五节第五节 真核生物与原核生物真核生物与原核生物蛋白质合成的差异蛋白质合成的差异1.核糖体更大核糖体更大:真核生物真核生物-80S,原核生物原核生物-70S。2.起始氨酰起始氨酰tR

36、NA：真核真核-Met-tRNAmet mRNA识别是从识别是从5 端开始端开始,无无SD序列序列,起始因起始因子识别与子识别与mRNA 5 端帽子有关。以扫描机制识端帽子有关。以扫描机制识别出一个别出一个AUG 从此开始形成阅读框架。从此开始形成阅读框架。3.起始密码子起始密码子:通常只有一个通常只有一个AUG起始密码子。起始密码子。4.80S起始复合物：起始复合物：9种起始因子种起始因子-eIF-1,2,3,4A,4B,4C,4D,4E,55.蛋白激酶参与真核细胞蛋白质合成的调节。蛋白激酶参与真核细胞蛋白质合成的调节。蛋白激酶可以催化蛋白激酶可以催化eIF-2 磷酸化磷酸化6.释放因子释放

37、因子:真核真核-1种种,识别识别3种终止密码种终止密码;原核原核-3种。与原核生物不同的是种。与原核生物不同的是,真核生物蛋白真核生物蛋白质生物合成的终止和释放，只需要一种质生物合成的终止和释放，只需要一种RF，并且它的作用要并且它的作用要GTP供能。供能。7.翻译与转录翻译与转录:真核真核-不偶联不偶联;原核原核-偶联。偶联。8.合成速度合成速度:真核真核:慢，慢，3个肽键个肽键/核糖体核糖体/秒秒 原核原核:快，快，10-15个肽键个肽键/核糖体核糖体/秒秒9.顺反子顺反子:真核真核-单顺反子单顺反子;原核原核-多顺反子。多顺反子。第六节第六节 蛋白质合成的抑制剂蛋白质合成的抑制剂 抗菌素

38、抗菌素:嘌呤霉素、氯霉素、四环素、嘌呤霉素、氯霉素、四环素、链霉素抑制链霉素抑制原核细胞翻译，不作用于真核细胞；原核细胞翻译，不作用于真核细胞；链霉素、新霉素、卡那霉素与原核链霉素、新霉素、卡那霉素与原核30S核糖核糖体结合体结合,引起密码错读引起密码错读 亚胺环己酮亚胺环己酮:只作用于真核细胞只作用于真核细胞80S核糖体核糖体 白喉霉素白喉霉素:与与EF-2结合（真核延长因子催化部结合（真核延长因子催化部位位)，抑制真核细胞蛋白质合成，抑制真核细胞蛋白质合成 本章主要内容本章主要内容:一、遗传密码一、遗传密码 二、核糖体二、核糖体 三、转移三、转移RNA的功能的功能 四、蛋白质生物合成的分子机制四、蛋白质生物合成的分子机制 五、真核生物与原核生物蛋白质合成的差异五、真核生物与原核生物蛋白质合成的差异 六、蛋白质合成的抑制剂六、蛋白质合成的抑制剂 重点：重点：蛋白质合成过程及分子机制蛋白质合成过程及分子机制;蛋白质合成的忠实性蛋白质合成的忠实性;氨酰氨酰-tRNA合成酶的作用及决定蛋白质合成酶的作用及决定蛋白质 合成忠实性的分子机制。合成忠实性的分子机制。