酶工程考试复习题

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1、酶工程技术复习题考试题型：选择题、填空题、名词解释、判断题、简答题第一章知识点1. 酶2 SOD3 限制性核酸内切酶4 酶的活性中心5 酶工程6 酶催化反应的特点7 米氏方程（包括Km的知识）8 不可逆抑制剂、可逆抑制剂9 可逆抑制剂的种类10有无抑制剂存在时酶促反应进行的速度和Km值11酶的命名原则和六大类酶第二章知识点1.转录和翻译2.操纵子学说3.乳糖操纵子和色氨酸操纵子4.末端产物阻遏5.微生物发酵产酶的优点6.产酶微生物的分离和筛选7.活化和扩大培养8.六大营养要素9.酶生物合成的模式？哪种是最理想的模式？为什么？10.生物反应器11.发酵罐的设计原则第三章知识点1. 微生物细胞壁的

2、主要成分2. 细胞破碎的常用方法3. 常用离心方法4. 盐析法的原理5. 等电点沉淀的原理6. 萃取的原理7. 表面活性剂8. 透析的原理9. 微滤、超滤、反渗透10. 层析的原理11. 层析法的种类和原理12. HPLC13. 酶的浓缩14. 酶的结晶15. SDS-PAGE的原理和注意事项第四章知识点1. 单纯酶、结合酶、全酶、金属酶、金属激活酶2. 辅酶和辅基的区别3.单体酶、寡聚酶、多酶复合体4. 活性中心5. 活性中心的共性6. 三个酶的作用机理学说7. 酶活力、比活力8. 酶活力测定方法酶工程复习题选择题：1. 酶促反应试验中所用的酸性磷酸酯酶原酶液来源于 cA鸡蛋 B.黄豆 C.

3、萌发好的绿豆芽 D.猪血2 有无抑制剂存在时酶促反应的速度与Km值的变化情况，下列说法正确的是： bA存在竞争性抑制剂时，Vmax不变，Km减小B存在非竞争性抑制剂时，Vmax减小，Km不变C存在反竞争性抑制剂时，Vmax不变，Km减小D存在竞争性抑制剂时，Vmax减小，Km不变3.SDS-PAGE实验中，在配胶的过程中，五号液（过硫酸铵溶液）是在什么时候加入 bA胶溶液所有其他成分都配好之前，第一个添加的溶液B胶溶液所有其他成分都配好了后，将胶溶液注入玻璃板之前 C胶溶液所有其他成分都配好了后，将胶溶液注入玻璃板之后D在样品槽模板（梳子）插入之后填空题：1.酶的活性中心的必需基团包括： 结合

4、集团 和 催化集团2. 米氏方程是：3. 可逆抑制作用可分为竞争性抑制作用、 反竞争性抑制作用 、 非竞争性抑制作用 。 4. 酶的六大类型：1.氧化还原酶类(oxidoreductases)：催化氧化还原反应2.转移酶类(transferases)：催化功能基团的转移3.水解酶类(hydrolases)：催化水解反应 4.裂合酶类(lyases)：催化水,氨或co2 的去除或加入5.异构酶类(isomerases)：催化各种类型的异构作用6.合成酶类(ligases)：催化消耗ATP的成键反应 5.酶的催化作用特点包括： 专一性 、 高效性 、 条件温和 、 环境敏感性 、 可调控性 。 .

5、判断题：1.酶的本质是蛋白质，所有的酶都是由蛋白质构成。 错2.氧化还原酶主要包括氧化酶和还原酶。 错3.有意义链是指无转录功能的一条DNA链. 是DNA双链中按碱基配对规律能指引转录生成RNA的一股单链，又称编码链. 错4.大多数细菌的最适PH值是6.5-7.5。 对名词解释：1.酶的比活力：指每毫克酶蛋白所含的酶活力单位数.2.酶的激活剂; 凡是能增加酶的催化活性或使酶的催化活性显示出来的物质都称为激活剂（activator).3.狭义发酵： 微生物在无氧条件下，分解各种有机物质产生能量的一种方式。4. 调节基因： 是调节蛋白质合成的基因。它能使结构基因在需要某种酶时就合成某种酶，不需要时

6、，则停止合成，它对不同染色体上的结构基因有调节作用。5. 结合酶 ：需要酶蛋白和辅助因子同时存在时才能发挥作用的酶.6. 酶的固定化：采用各种方法，将酶与水不溶性载体结合，制备固定化酶的过程称为酶的固定化。7.电泳技术：是根据各种带电粒子在电场中迁移速度的不同而对物质进行分离的实验技术。8裂合酶：裂合酶催化底物分子裂解成为两个较小的化合物及其逆反应。9.密度梯度离心：样品在密度梯度介质中进行离心，使沉降系数比较接近的组分得以分离的一种区带分离方法。 常用的密度梯度溶液是蔗糖溶液。10.变构效应和变构酶：调节中心可以与小分子的代谢物相结合，使酶分子的构象发生改变，从而影响酶的活性。这种作用叫变构

7、效应(又叫别构效应)；具有变构效应的酶叫变构酶，引起变构的小分子物质叫变构剂(调节物)。11表面活性剂：表面活性剂(surfactant)，是指具有固定的亲水亲油基团，在溶液的表面能定向排列，并能使表面张力显著下降的物质。表面活性剂的分子结构具有两亲性：一端为亲水基团，另一端为憎水基团；12分解代谢物阻遏：指细胞内同时有两种分解底物（碳源或氮源）存在时，利用快的那种分解底物会阻遏利用慢的底物的有关酶合成的现象。简答：1. 19SDS-PAGE中SDS的作用原理是什么？SDS是一种阴离子去污剂，带有大量负电荷，与蛋白质结合后使蛋白质所带负电荷大大超过了天然蛋白质原有的负电荷，因而消除或掩盖了不同

8、种类蛋白质间原有电荷的差异。 SDS破坏蛋白质氢键、疏水键，巯基乙醇使二硫键打开，引起蛋白质构象改变，使蛋白质SDS复合物形状近似椭圆形，短轴相同（1.8nm），长轴与蛋白质分子量成正比。 因此，蛋白质SDS复合物(SDS-denatured protein)在凝胶中的迁移率不受蛋白质原有电荷和形状的影响，只与椭圆棒长度（蛋白质分子量）有关。2. 简述诱导契合学说当底物与酶相遇时，可诱导酶活性中心的构象发生相应的变化，其上有关的各个基团达到正确的排列和定向，因而使底物和酶能完全契合。当反应结束产物从酶分子上脱落下来后，酶的活性中心又恢复成原来的构象。3. RNA聚合酶有几个亚基？其中因子的作用

9、是什么？RNA聚合酶全酶形式为2，共5个亚基。其中亚基与RNA聚合酶的四聚体核心（2）的形成有关；亚基含有核苷三磷酸的结合位点；亚基含有与DNA模板的结合位点；而因子只与RNA转录的起始有关，与链的延伸没有关系，一旦转录开始，因子就被释放，而链的延伸则由四聚体核心酶（core enzyme）催化。所以，因子的作用就是识别转录的起始位置，并使RNA聚合酶结合在启动子部位。4.发酵罐的示意图 5.发酵罐的设计原则 稳定性 控制性 操作性 安全性 可视性6. 什么是启动子 启动子上有两个位点： （1）RNA聚合酶的结合位点（2）cAMP-CAP的结合位点。 只有cAMP-CRP复合物结合到启动子的位

10、点上，RNA聚合酶才能结合到其在启动子的位点上，酶的合成才能开始。7. 请说出下列缩写的中文名称：SDS-PAGE、Acr、Bis、Tris、APS、TEMEDSDS-PAGE十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳Acr丙烯酰胺Bis甲叉双丙烯酰胺Tris三羟甲基氨基甲烷APS过硫酸铵TEMEDN,N,N,N-四甲基乙二胺8. 请说出在血清中谷丙转氨酶的活性测定中， 2,4-二硝基苯肼的作用。 丙酮酸可与2,4二硝基苯肼发生加成反应，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，该产物在碱性环境中可转化成红棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅与丙酮酸的生成量，亦即与谷丙转氨酶活性的高低成正比。通过标准曲线可以查出

11、丙酮酸的生成量。9. 各种酶固定化法比较的优缺点 10.菌种保藏的方法有哪些低温保藏蒸馏水保藏法斜面传代保藏法液体石蜡保藏法干燥载体保藏法寄主保藏法基因工程菌的保藏（重组质粒）11.请阐述乳糖操纵子学说乳糖操控子是大肠杆菌中控制半乳糖苷酶诱导合成的操纵子。包括调控元件P(启动子)和O(操纵基因)，以及结构基因lacZ(编码半乳糖苷酶)、lacY(编码通透酶)和lacA(编码硫代半乳糖苷转乙酰基酶)。1、无乳糖时，调节基因lacI 编码阻遏蛋白，与操纵基因O 结合后抑制结构基因转录,不产生代谢乳糖的酶。2、只有乳糖存在时,乳糖可与lac阻遏蛋白结合，而使阻遏蛋白不与操纵基因结合，诱导结构基因转录

12、，代谢乳糖的酶产生以代谢乳糖。3、葡萄糖和乳糖同时存在时，葡萄糖的降解产物能降低cAMP含量，影响CAP与启动基因结合，抑制结构基因转录，抑制代谢乳糖的酶产生。 12. 简述产酶微生物的分离和筛选 1)样品的采集:从富含该酶作用底物的场所采集样品 2)富集培养: 投其所好，取其所抗 3)分离获得微生物的纯培养（pure culture）。 4)初筛：选出产酶菌种，以多为主。5)复筛：选出产酶水平相对较高的菌株，以质为主。13.根据本图讲述蛋白质合成的过程;14.根据本图简述色氨酸操纵子学说15. 酶的合成模式中最理想的是哪种？为什么？酶所对应的mRNA的稳定性以及培养基中阻遏物的存在是影响酶生

13、物合成模式的主要因素。其中，mRNA稳定性好的，可以在细胞生长进入平衡期以后，继续合成其所对应的酶；mRNA稳定性差的，就随着细胞生长进入平衡期而停止酶的生物合成；不受培养基中存在的某些物质阻遏的，可以伴随着细胞生长而开始酶的合成；受到培养基中某些物质阻遏的，则要在细胞生长一段时间甚至在平衡期后，酶才开始合成并大量积累。在酶的发酵生产中， 为了提高产酶率和缩短发酵周期，最理想的合成模式应是延续合成型。因为属于延续合成型的酶，在发酵过程中没有生长期和产酶期的明显差别。细胞一开始生长就有酶产生，直至细胞生长进入平衡期以后，酶还可以继续合成一段较长的时间。16. 简述酶活性中心的特点(1)活性部位只占酶分子很小的一部分（1-2%）。(2)活性部位是一个三维实体。(3)活性中心位于酶分子表面的疏水性裂缝中。(4)活性中心构象不是固定不变的（诱导契合）。(5)酶与底物通过盐键、氢键、范德华力和疏水作用等次级键结合。Merry Christmas