考试报高中生物实验试剂配制方法

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1、高中生物实验试剂配制方法 徐以润 江苏灌南县高级中学(222500)1、斐林试剂试剂甲:将34.5克结晶硫酸铜溶于500亳升水中,加0.5亳升硫酸,混合均匀。试剂乙:将125克氢氧化钠和137克酒石酸钾钠溶于500毫升蒸馏水中。(贮于带橡皮塞的瓶中)临用时试剂甲与试剂乙等量混合斐林试剂是由氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的溶液和硫酸铜的质量分数为0.05 g/mL的溶液配制而成的。它与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下,能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀因此,斐林试剂常用于检测可溶性的还原性糖的存在与否。2、双缩脲试剂取10 g氢氧化钠放入量筒中,加水至100 mL,待充分溶

2、解后倒入试剂瓶中,配成质量浓度为0.1 g/mL的氢氧化钠溶液,瓶口塞上胶塞,贴上标签,写上试剂A。取1 g硫酸铜放入量筒中,加水至100 mL,待充分溶解后倒入试剂瓶中,配成质量浓度为0.01 g/mL的硫酸铜溶液(蓝色)。瓶口塞上胶塞,贴上标签,写上试剂B。双缩脲试剂使用时,先向蛋白质溶液中加入NaOH溶液(2mL),振荡摇匀,然后再加入34滴CuSO4溶液,与蛋白质发生紫色反应,因此,双缩脲试剂常用于检测蛋白质的存在与否注意林试剂和双缩脲试剂都由NaOH溶液和CuSO4溶液组成,但二者有如下三点不同: (1)溶液浓度不同 斐林试剂中NaOH溶液称为斐林试剂甲,其浓度为0.1g/ml,Cu

3、SO4溶液称为斐林试剂乙,其浓度为0.05g/ml;双缩脲试剂中NaOH溶液(双缩脲试剂A)的浓度为0.1g/ml,CuSO4溶液(双缩脲试剂B)的浓度为0.01g/ml。 (2)使用原理不同 斐林试剂是新配制的Cu(OH)2溶液,它在加热条件下与醛基反应,被还原成砖红色的Cu2O沉淀,可用于鉴定可溶性还原糖的存在。用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时,溶液的颜色变化过程为:浅蓝色棕色砖红色(沉淀)。 鉴定生物组织中是否含有蛋白质时,常用双缩脲法,使用的是双缩脲试剂,发生的是双缩脲反应。双缩脲反应实质是在碱性环境下的Cu2+与双缩脲试剂发生的紫色反应。而蛋白质分子中含有很多与双缩脲(H2NOC-NH-

4、CONH2)结构相似的肽键,所以蛋白质都能与双缩脲试剂发生紫色反应,可以用双缩脲试剂鉴定蛋白质的存在。 (3)使用方法不同 斐林试剂使用时,先将 NaOH溶液和CuSO4溶液混合(将45滴CuSO4溶液滴入2mlNaOH溶液中),而后立即使用:双缩脲试剂使用时,先加入NaOH溶液(2mL),振荡摇匀,造成碱性的反应环境,然后再加入34滴CuSO4溶液,振荡摇匀后观察现象。 3、苏丹试剂:(用于脂肪的检测)0.1克苏丹溶于20毫升95%酒精中,因脂肪可溶于酒精中,因此染色脂肪不得超过10分钟。4、二苯胺试剂:(用于DNA的鉴定)将1克二苯胺溶液于100ML冰醋酸中,再加2.75毫升浓硫酸(置冰箱

5、中可保存根6个月,使用前在室温下摇匀)。 5、苔黑酚乙醇溶液(用于RNA的鉴定) 溶解6克苔黑酚于是100毫升95%乙醇中,(可在冰箱中保存1个月) 6、班氏试剂:(用于尿糖的检测)溶85克柠檬酸钠及50克无水碳酸钠于400毫升水中。另溶8.5克硫酸铜于500毫升热水中。将硫酸铜溶液缓缓倾入柠檬酸钠碳酸钠溶液中,边加边搅拌。如有沉淀可过滤, 此混合液可长期使用。7、醋酸洋红染液(用于染色体的染色)冰醋酸45ML55ML蒸馏水0.5克洋红先将洋红溶于蒸馏水中,再加入冰醋酸充分摇匀后,加热煮沸 10分钟,待冷却后,即可使用。8、有丝分裂细胞解离液 38%盐酸和95%酒精按1:1的比例配成解离液。9、有丝分裂细胞染液医用紫药水和蒸馏水按1:16的比例混合 配成染色液。10、吲哚酚试剂(用于VC的鉴定)将 0.1克吲哚酚粉未溶于是100ML水中。13、卡诺氏固定液(用于细胞有丝分裂根尖的固定)酒精:冰醋酸=3:1(体积比)12、20%肝脏研磨液(用于酶的高效性验证)1份肝脏4份水。用剪子迅速将肝脏剪碎,先加少量的水研研磨,用剩余的水冲洗。

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