药物分析实验设计方案

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1、维生素C原料药、片剂、注射剂含量测定具体方案一、维生素c原料药含量测定具体方案碘量法：1. 原理：维生素C具有还原性，可被不同氧化剂定量氧化，可用氧化还原法测定含量。H0H0JHhOHHO抗壞血酸HOHOhh+ 212H+2仪器与材料：仪器：吸量管（25 mL）、安全吸球、容量瓶（100 mL）、烧杯（100 mL, 2个）、电磁加 热搅拌器、磁搅拌子、滴定管（25 mL）、锥形瓶（125 mL, 2个）材料：市售维生素 C、碘化钾（potassium iodide, KI）、0.025 M 碘酸钾（potassium iodate, KIO3）、1 M 盐酸（hydrochloric aci

2、d, HC1）、2%淀粉水溶液（starch）。3方法：维生素C原料的含量测定 取本品约0.2g精密称定一加新沸过的冷水100ml与 稀醋酸10m 1使溶解一加淀粉指示液1mlf立即用碘滴定液（0.1mo 1/L）滴定一显蓝色并在 30秒钟内不褪。4. 说明：（1）维生素C与碘的反应摩尔比是1:2，每1ml碘滴定液（0.1mol/L）相当于8.806mg 的维生素Co二维生素C片剂含量测定具体方案紫外分光光度法维生素C（VitC）又名抗坏血酸，可降低毛细血管通透性，降低血脂，增强机体的抵抗能力， 并有一定的解毒功能和抗组胺作用 1 。临床主要用于坏血病、急慢性中毒、心肌炎、 慢性肝炎等病症。对

3、于其含量测定，纵观各种质量标准均采用2， 6-二氯吲哚酚滴定法等滴 定分析法，该方法简便、快速、准确，中国药典（2000 年版）也采用碘量法。虽然该法对 于维生素C原料药的测定结果比较满意，但对于制剂中维生素C含量的测定结果就不甚满 意了。由于维生素C易被空气中的氧所氧化，再加上制剂辅料对测定的干扰，测定前必须 先做处理。采用紫外分光光度法测定维生素C时，存在于维生素C或复合维生素制剂中的 辅料一般不对测定产生干扰2。所以本法既可以测定维生素C各种制剂及复合维生素 片剂，也可以测定多种饮料中的维生素C的含量。1. 仪器与试剂UV-260紫外分光光度计，VitC对照品及VitC片（规格:50mg

4、）均由河南某药厂提供， 硫酸溶液（ pH=6）。2 实验操作2.1标准曲线的绘制精密称取VitC对照品0.05g溶于100ml硫酸溶液，再稀释成一系列不 同浓度的对照品溶液（014“g/m），分别测出其吸光度。然后以浓度为横坐标，以相应的 吸光度为纵坐标绘制出标准曲线。该曲线是经过原点的一条直线，可求出该曲线的斜率。2.2样品测定 取VitC20片，精密称定，研细，精密称出适量（相当于VitC50mg），置于 100ml量瓶中，加硫酸溶液溶解并稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液2ml置于另一 100ml 量瓶中，加硫酸溶液稀释至刻度，测出其吸光度A样。由标准曲线查出样品的浓度C样 品 3。2.3

5、结果计算根据精密称出的样品的质量、溶解及稀释的体积可求出C样。VitC含量=C样品/C样或VitC含量=A样/KxC样注:K为标准曲线的斜率。3 讨论维生素C的还原能力强而易被氧化，特别是在碱性溶液中更易被氧化。另外在碱性溶 液或强酸性溶液中还能进一步发生水解。因此，选择硫酸溶液使成弱酸性。测定时溶液pH的选择:维生素C的紫外最大吸收波长与溶液的pH值有着密切关系。在 pH=2.0时，溶液的最大吸收波长在245nm;在pH=12时，溶液的最大吸收波长在300nm;在 pH=510范围时，溶液的最大吸收波长在267nm,况且在pH=6.0时吸收度值最大。所以, 选择测定溶液的 pH=6.0。本方

6、法对仪器的要求不是很高，适用于大批量样品的定量分析。但是，若仪器搬动或重 新校正波长、或者更换仪器时，标准曲线必须重新绘制。参考文献：三.维生素C注射剂含量测定具体方案2，4-二硝基苯肼法1原理 总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸。样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱 氢抗坏血酸，再与 2， 4-二硝基苯肼作用生成红色脎，脎的含量与总抗坏血酸含量成正比， 进行比色测定。2. 仪器恒温箱：370.5C，可见-紫外分光光度计，打碎机3. 试剂 ：蒸馏水，试剂纯度均为分析纯。3.1 4.5mol/L硫酸：谨慎地加250ml硫酸（比重1.84）于700ml水中，冷却后用水稀释 至 1000ml

7、。3.2 85%硫酸：谨慎地加900ml硫酸（比重1.84）于100ml水中。3.3 2%2, 4-二硝基苯肼溶液：溶解2g 2, 4-二硝基苯肼于100ml4.5mol/L硫酸内，过滤。 不用时存于冰箱内，每次用前必须过滤。3.4 2%草酸溶液：溶解20g草酸于700ml水中，稀释至1000ml。3.5 1%草酸溶液：稀释500ml 2%草酸溶液到1000ml。3.6 1%硫脲溶液：溶解5g硫脲于500ml 1%草酸溶液中。3.7 2%硫脲溶液：溶解10g硫脲于500mll%草酸溶液中。3.8 lmol/L盐酸：取100ml盐酸，加入水中，并稀释至1200ml。3.9 活性炭：将100g活性

8、炭加到750ml lmol/L盐酸中，回流12h,过滤，用水洗数次, 至滤液中无铁离子（Fe3+）为止，然后置于110C烘箱中烘干。3.10 标准（1）抗坏血酸标准溶液（1mg/ml）:溶解100mg纯抗坏血酸于100ml 1%草酸溶液中。（ 2）标准曲线绘制加1g活性炭于50ml标准溶液中，摇动1min,过滤。取10ml滤液放入500ml容量瓶中，加5.0g硫脲，用1%草酸溶液稀释至刻度。抗坏血酸浓 度为20卩g/ml。取5，10, 20，25，40，50，60ml稀释液，分别放入7个100ml容量瓶中，用1%硫脲溶液 稀释至刻度，使最后稀释液中抗坏血酸的浓度分别为1，2，4，5，8， 10

9、及12gg/mlo 按样品测定步骤形成脎并比色。以吸光值为纵坐标，以抗坏血酸浓度（gg/m l）为横坐标绘制标准曲线。4. 操作步骤4.1 样品制备全部实验过程应避光。4.2氧化处理：取25ml上述滤液，加入0.5g活性炭，振摇1min,过滤，弃去最初数毫升滤 液。取10ml此氧化提取液，加入10ml 2%硫脲溶液，混匀。4.3 呈色反应4.3.1于三个试管中各加入4ml稀释液。一个试管作为空白，在其余试管中加入1.0ml 2%2,4-二硝基苯肼溶液，将所有试管放入370.5C恒温箱或水浴中，保温3ho4.3.2 3h后取出，除空白管外，将所有试管放入冰水中。空白管取出后使其冷到室温，然 后加

10、入1.0ml 2%2, 4-二硝基苯肼溶液，在室温中放置1015min后放入冰水内。其余步骤 同样品。4.3.3 85%硫酸处理：当试管放入冰水后，向每一试管中加入5ml85%硫酸，滴加时间至少需 要1min,需边加边摇动试管。将试管自冰水中取出，在室温放置30min后比色。4.3.4比色：用1cm比色杯，以空白液调零点，于500nm波长测吸光值。5. 标准曲线绘制(1) 加2g活性炭于50mL标准溶液中，振动lmin后过滤。吸取lO.OOmL滤液放入500mL 容量瓶中加5.0g硫脲，用1%草酸溶液稀释至刻度。抗坏血酸浓度20ug/mL。吸取5, 10, 20, 25, 40, 50, 60

11、mL稀释液，分别放放7个100mL容量瓶中，用1%硫脲 溶液稀释至刻度，使最后稀释液中抗坏血酸的深度分别为1, 2, 4, 5, 8, 10, 12ug/mL, 为抗坏血酸标准使用液。(2) 分别吸取4mL各不同深度的抗坏血酸标准使用液，于7个试管中，吸取4mL水于试 剂空白管，各加入1.0mL 2%2,4二硝基苯肼溶液，混匀，将全部试管放入37C5C恒温箱 或恒温水浴中，保温3h。3h后将8个试管取出，全部放入冰水冷却后，向每一试管中加入5mL 85%硫酸，滴加时间 至少需要1min,边加边摇，。将试管自冰水取出，在室温放置30min后，以试剂空白管调 零，并比色测定。以吸光值为纵坐标，抗坏

12、血酸含量(mg)为横坐标绘制标准曲线或计算回归方程。 五、结果计算cX = x100m式中X样品中总抗坏血酸含量mg/100g；c由标准曲线查得或由回归方程算得试样测定液总抗坏血酸含量(mg)；m测定时所取滤液相当于样品的用量(g)o计算结果表示到小数点后两位。6. 注意事项及说明1、利用普鲁士蓝反应可对铁离子存在与否进行检验：将2%亚铁氰化钾与1%盐酸等量混合， 将需检测的样液滴入，如有铁离子则产生蓝色沉淀。2、硫脲的作用在于防止抗坏血酸的继续被氧化和有助于脎的形成。3、加硫酸显色后，溶液颜色可随时间的延长而加深，因此，在加入硫酸溶液30min后，应 即立比色测定。4、检测过程中，测定样的吸

13、光值不落在标准曲线上，可重新调整测定样品的量或标准曲线 的浓度范围。5、本实验法在1卩g/ml12卩g/mL抗坏血酸范围内呈良好线性关系，最低检出限为0.1卩 g/mLo6、本实验适用于水果、蔬菜及其制品中总抗坏血酸的测定。7、食品分析中的总抗坏血酸是指抗坏血酸和脱氢抗坏血酸二者的总量，若食品中本身含有二酮古乐糖酸抗坏血酸的氧化产物，则导致检测总抗坏血酸含量偏高。7. 注意事项7.1 大多数植物组织内含有一种能破坏抗坏血酸的氧化酶，因此，抗坏血酸的测定应采用新鲜样品并尽快用2%草酸溶液制成匀浆以保存维生素Co7.2 若溶液中含有糖，硫酸加得太快，溶解热会使溶液变黑。7.3试管自冰水中取出后，颜色会继续变深，所以，加入硫酸后30分钟应准时比色。