《生物2 微生物的培养与应用 选修1》由会员分享，可在线阅读，更多相关《生物2 微生物的培养与应用 选修1（39页珍藏版）》请在装配图网上搜索。
1、专题专题2微生物的培养与应用微生物的培养与应用判断下列说法是否正确：1分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源( )2利用稀释涂布平板法只能分离微生物不能对微生物进行计数( )3消毒和灭菌实质是相同的( )一、培养基及无菌技术1种类：液体培养基、固体培养基。2营养成分：一般都含有水、 、 、无机盐和生长因子。3无菌技术消毒方法： 、巴氏消毒法和化学药剂消毒。灭菌法：灼热灭菌、干热灭菌、 灭菌。碳源碳源氮源氮源煮沸消毒法煮沸消毒法高压蒸汽高压蒸汽 二、微生物培养的基本技术 1配制培养基：称量混合溶化调pH分装包扎。 2灭菌：加水加培养基密封排冷气维持压力取出倒平板(或搁置斜面)。接种
2、环、涂布器接种环、涂布器 平板划线平板划线 稀释涂布稀释涂布 1.高温无菌的原理是什么？ 提示：高温可以使菌体细胞内的蛋白质、核酸变性失活，从而达到灭菌的目的。 2用酒精消毒时，为什么70%的酒精杀菌效果最好？ 提示：浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌力减弱。三、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1分离原理：土壤中细菌之所以能分解尿素，是由于它们能合成 ，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起催化作用。2统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用 法。3实验流程：土壤取样制备 微生物的培养与观察细菌的计数。脲酶脲酶稀释涂布平板法、显微镜直接计数稀释涂布平板
3、法、显微镜直接计数稀释液稀释液刚果红刚果红 纤维二糖和葡萄糖纤维二糖和葡萄糖 3实验流程：土壤取样、 、梯度稀释、将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上、挑选产生 的菌落。选择培养选择培养透明圈透明圈 3.分离微生物的方法有哪些？ 提示：从混合样品中获得某种微生物的方法通常有两种： (1)利用该分离对象对某一营养物质有“嗜好”的原理，专门在培养基中加入该营养物质，从而使它成为一种加富培养基。 (2)利用该分离对象对某种抑菌物质的抗性，在混合培养物中加入该抑制物，经培养后，原来占优势的微生物生长受抑制，而分离对象却可乘机大大增殖，在数量上占优势。 1微生物的营养：碳源、氮源、水、无机盐和生长因子
4、。 2微生物培养的无菌技术 进行无菌操作主要是为了防止外来杂菌的入侵，重点是消毒和灭菌。 3微生物的纯化培养平板划线法与稀释涂布平板法方法方法平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法注注意意事事项项(1)接种环的灼烧接种环的灼烧第一次划线前：接种环上的微第一次划线前：接种环上的微生物，避免污染培养物生物，避免污染培养物每次划线前：杀死残留菌种，每次划线前：杀死残留菌种，保证每次划线菌种来自上次划线保证每次划线菌种来自上次划线末端末端划线结束后：杀死残留菌种，划线结束后：杀死残留菌种，避免污染环境和感染操作者避免污染环境和感染操作者(1)稀释操作时：稀释操作时：每支试管及其中每支试管及其
5、中的的9 mL水、移液水、移液管等均需灭菌；管等均需灭菌；操作时，试管口操作时，试管口和移液管应在离和移液管应在离火焰火焰1 cm2 cm处处方法方法平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法注注意意事事项项(2)灼烧接种环之灼烧接种环之后，要冷却后再进后，要冷却后再进行操作，以免温度行操作，以免温度太高杀死菌种太高杀死菌种(3)划线时最后一划线时最后一区域不要与第一区区域不要与第一区域相连域相连(4)划线用力要大划线用力要大小适当，防止用力小适当，防止用力过大将培养基划破过大将培养基划破(2)涂布平板时涂布平板时涂布器用体积分数为涂布器用体积分数为70%酒精消酒精消毒，取出时，让多余酒
6、精在烧杯中毒，取出时，让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃器在酒精灯火焰上引燃不要将过不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精中，以免引燃其中的酒精酒精灯与培养皿距离要合适，移酒精灯与培养皿距离要合适，移液管管头不要接触任何物体液管管头不要接触任何物体方法方法平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法目的目的在培养基上形成由单个菌种繁殖而来的子在培养基上形成由单个菌种繁殖而来的子细胞群体细胞群体菌落菌落培养培养平板冷凝后倒置培养，使培养基表面的水平板冷凝后倒置培养，使培养基表面的水
7、分更好地挥发，防止皿盖上水珠落入培养分更好地挥发，防止皿盖上水珠落入培养基造成污染基造成污染 1下列关于微生物的培养与应用的叙述错误的是() A通过消毒不能杀死物体内所有的微生物 B利用平板划线法可以统计样品中活菌的数目 C微生物所用的培养基的成分和植物组织培养所用的培养基的成分不同 D平板划线法和稀释涂布平板法常用于微生物的接种 解析：消毒是指杀死部分对人体有害的病原微生物，但不一定能杀死细菌的芽孢，故A正确；统计样品中活菌的数目要用稀释涂布平板法，平板划线法办不到，故B错误；不同的培养对象，所需的营养成分不同，培养基中所加入的物质就不同，故C正确；微生物接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂
8、布平板法，故D正确。 答案：B 2如图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为12345。下列操作方法正确的是() A操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌 B划线操作须在火焰上进行 C在5区域中才可以得到所需菌落 D在12345区域中划线前后都要对接种环灭菌 解析：本题考查平板划线操作方法。在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼烧，接种时划线操作是在火焰边进行。在5个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落。 答案：D 1筛选菌株 (1)原则：人为提供有利于目的菌生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物的生长。 (2)菌株筛选原理的比较土壤中分解尿素的细菌土壤中分解
9、尿素的细菌分解纤维素的微生物分解纤维素的微生物常用选择培养基进行筛常用选择培养基进行筛选，即提供有利于目的选，即提供有利于目的菌株生长的条件，如营菌株生长的条件，如营养、温度、养、温度、pH等，同时等，同时抑制其他微生物的生长抑制其他微生物的生长 刚果红染色法，即在含有纤刚果红染色法，即在含有纤维素的培养基中，加入刚果红维素的培养基中，加入刚果红时，刚果红与培养基中的纤维时，刚果红与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素素形成红色复合物。当纤维素被分解后，该复合物不能形被分解后，该复合物不能形成，培养基中出现以纤维素分成，培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈解菌为中心的透明圈 2.设置对
10、照 (1)目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 (2)方法：证明培养基未被污染，用空白培养基作对照。 证明选择培养基的选择作用，用基础培养基接种等量同种菌液作对照。 3分离纤维素分解菌的实验过程中，下列操作有误的是() A经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 B富集培养这一步可省略，但培养的纤维素分解菌少 C经稀释培养后，用刚果红染色 D对照组可用同样量的培养液涂布到不含纤维素的培养基上 答案：A 统计菌落数目的方法 (1)显微镜直接计数法 原理：利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；方法：用计数板计数；缺点：不
11、能区分死菌与活菌。 (2)间接计数法(活菌计数法) 原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 计算公式：每克样品中的菌数(CV)M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。 (2017西铁一中模拟)下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是() A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板 B取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上 C将实验组和对照组平板
12、倒置，37 恒温培养2448小时 D确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数 解析：本题以“土壤中细菌的计数”为命题点，考查对基础知识的识记情况。为防止培养皿盖上凝结的水珠落在培养基表面造成杂菌污染，应将平板倒置。在细菌计数时，为保证实验结果的准确性，应至少涂布三个平板，选择菌落数在30300的平板进行计数；然后求出平均数，再根据对应的稀释度计算出样品中的细菌数。 答案：D 1.(2017南昌一中质检)在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。产生A同学结果的原因可能有() 土样不同培养基污染操作失误没
13、有设置对照 ABCD 答案：A 消毒与灭菌的区别灭菌灭菌方法方法条件条件结果结果常用方法常用方法消毒消毒较为温和较为温和的物理或的物理或化学方法化学方法仅杀死物体表面仅杀死物体表面或内部一部分对或内部一部分对人体有害的微生人体有害的微生物物(不包括芽孢和不包括芽孢和孢子孢子)煮沸消毒法，还有煮沸消毒法，还有化学药剂化学药剂(如酒精、如酒精、氯气、石炭酸等氯气、石炭酸等)消消毒、紫外线消毒毒、紫外线消毒灭菌灭菌强烈的理强烈的理化因素化因素杀死物体内外所杀死物体内外所有的微生物，包有的微生物，包括芽孢和孢子括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌菌、高压蒸汽灭菌 关于灭菌和消毒
14、的理解不正确的是() A灭菌是指杀灭环境中一切微生物的细胞、芽孢和孢子 B消毒和灭菌实质是相同的 C接种环用灼烧法灭菌 D常用灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌等 解析：灭菌是指杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 答案：A 2.细菌培养过程中，分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理方法，这些方法可依次用于消灭或杀灭哪些部位的杂菌() A接种针、手、培养基 B培养基、手、接种针 C手、接种针、培养基 D培养基、接种针、手 答案：B 1用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时() 可以用相同的培养基都需要使用接种针进行接种都需要在火焰旁进行接种都可以用来计数活菌 AB
15、 C D 解析：平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基；平板划线法采用接种针进行操作，而稀释涂布平板法采用涂布器进行操作；纯化时，要进行无菌操作，需要在火焰旁接种，避免空气中的微生物混入培养基；平板划线法一般用于分离而不是计数。 答案：C 2有关稀释涂布平板法的叙述中，错误的是() A首先将菌液进行一系列的梯度稀释 B然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面 C适宜条件下培养 D结果都可在培养基表面形成单个的菌落 答案：D 3关于纤维素分解菌选择培养的正确叙述是() A可以增加纤维素分解菌的浓度 B可以减少纤维素分解菌的浓度 C所用培养基是固体培养基 D所用培养基是平板培养基
16、答案：A 4有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题： (1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于_培养基。 (2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即_和_。 (3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力_。 (4)通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、_和_。无菌技术要求实验操作应在酒精灯_附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。 解析：(1)从受原油污染的土壤中筛选出能高效
17、降解原油的菌株，使用的培养基应是以原油为唯一碳源的选择培养基，通过控制碳源这种营养成分，来促进能高效降解原油的菌株的生长，抑制其他微生物的生长。(2)菌种纯化培养时，常采用平板划线法和稀释涂布平板法接种。(3)当固体培养基上长出单菌落后，可通过比较菌落周围分解圈的大小，来判断菌株降解原油能力的大小。一般来说，分解圈越大说明该菌株的降解能力越强，反之则越弱。 (4)实验室培养微生物的过程中，常用灼烧灭菌法对接种环、接种针、试管口、瓶口等进行灭菌；用高压蒸汽灭菌法对培养基、试管等进行灭菌；用干热灭菌法对玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等进行灭菌。实验操作应在酒精灯火焰旁进行，因为酒精灯火焰旁可形成一个无菌环境，可防止微生物的污染。 答案：(1)原油选择(2)平板划线法稀释涂布平板法(3)强(4)干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰
生物2 微生物的培养与应用 选修1
