高中生物实验教参奥赛实验教材

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1、 生物实验的根本技术第一节 细胞学实验技术【知识概要】一、玻片标本的制作技术制作玻片标本对认识生物体的形态结构具有重要意义。玻片标本有临时玻片标本如涂片、压片、临时装片和永久玻片标本如永久装片、切片。1涂片法涂片法是将材料均匀地涂布在载玻片上的一种制片方法。涂片材料有单细胞生物、小型藻类、血液、细菌培养液、动植物的疏松组织、精巢、花药等。涂片时应注意：1载玻片必须清洁。2载玻片要持平。3涂层须均匀。涂抹液滴在载玻片中间偏右，用解剖刀刃或牙签等涂匀。4涂层要薄。用另一载玻片作推片，沿滴有涂抹液的载玻片面二载玻片夹角应为3045由右向左轻轻推动，涂成均匀一薄层。5固定。如需固定可用化学固定剂或枯燥

2、法细菌固定。6染色。细菌用亚甲基蓝，血液用瑞氏染液。染色液要盖住全部涂面。7冲洗。用吸水纸吸干或烤干。8封片。长期保存用加拿大的树胶片片。2压片法压片法是将生物材料置于载玻片和盖片之间，施加一定压力，将组织细胞压散的一种制片方法。压片法的一般过程：1取材。观察细胞分裂，应选取细胞分裂旺盛、新鲜的组织细胞为材料。如根尖、茎尖分生组织、骨髓细胞、花药花粉母细胞。精巢精母细胞等。2固定。材料固定可根据需要而定，取材后立即压片观察，可不作单独固定处理与染色同步进行；取材后不立即视察，可将材料用固定液一般用醋酸酒精固定液固定。固定224小时因材料而异后用95乙醇清洗，保存于70乙醇中，备用。3离析。对细

3、胞不易散开材料用水解别离液如1N HCl或盐酸一酒精液处理，一般处理620min，解离后经水漂洗前方能染色。4染色。染色剂种类很多。观察染色体常用醋酸洋红染色液染色。5压片。将材料放在载玻片上，加一滴清水或染液，盖上盖玻片用拇指轻轻压片。6观察。压片后，即可在显微镜下观察。3装片法装片法是将生物材料采取整体封固制成玻片标本的方法，用此法可制成临时或永久装片。装片材料有：微小生物如衣藻、水绵、变形虫、水螅，植物的叶表皮；昆虫的翅、足、口器，人的口腔上皮细胞等。装片法制作时应注意：1手持载玻片时，应注意持平，或放在平台上。滴水时水量要适当，以恰好被盖玻片盖满为度。2应将材料用解剖针或镊子展开不使重

4、叠，展平在同一平面上。3放盖玻片时，从一侧慢慢盖在水滴上，防止出现气泡。4染色时，将一滴染色液滴在盖玻片的一侧，用吸水纸从另一侧吸引，使盖玻片下的标本均匀着色。着色后，用同样的方法，滴一滴清水，把染色液吸出后，在显微镜下观察。二、显微镜根本实验技术1低倍镜4X、10X的使用方法显微镜操作主要包括两个方面：1光度调节。正确对光是能否成功地观察到物象的首要条件。对光时，先把聚光器上提，翻开可变阑，转动反光镜，这时一边看镜内视野，一边调节聚光器螺旋，直至视野内得到均匀而明亮的光线。2焦距的调节。调焦时，先把观察的切片，用推进器对正通光孔中央。然后分两步调焦。先用粗调器定焦，用左眼看目镜，使粗调器慢慢

5、上升，直到能清楚地看到标本为止。随后调节细调器，使镜筒微微升降，至物象更清晰为止。2高倍镜40X的使用方法1将在低倍镜中找到的物象欲放大局部移到视野中央。2转动物镜转换器，使40X物镜对准通光孔，转动时从侧面注视物镜，以防镜头紧压玻片。3调节细调螺旋，使物象清晰。3油镜100X的使用方法l先用低倍镜找到欲观察细微结构，将其结构移至视野中央换高倍镜。2下降镜台，在玻片标本上滴一滴香柏油，转换油镜。从侧面注视油镜，把镜台上升，使油镜头浸在香柏油滴中。3转动细调螺旋，使物象清晰，进行观察。4观察完毕，用镜头纸擦去油镜头和玻片上的香柏油，再用少许二甲苯或乙醚 / 无水乙醇把镜头擦干净。4安装指针的简易

6、方法将目镜的上盖一片透镜旋下，剪取一小段头发其长度约等于目镜的半径，用镊子夹住一端，将另一端蘸少许中性胶，将其粘在目镜内壁的金属光栏一铁圈上。稍干后，旋紧上盖，即可使用。三、单细胞的计数方法在细菌培养和体外细胞培养，以及环境监测血液检查中常常需要统计细菌、细胞、单细胞藻类、原生动物、血细胞、花粉等数量。细胞计数方法的原理是把一定体积的细胞液体，在显微镜下直接计算其个数，利用所得结果推算出每毫升水体中的单细胞数。具体方法如下：1水滴计数法用管口圆而平滑、大小适宜的吸管，吸取1mL水，然后测定这一吸管1rnL水可滴出多少滴水反复测定，直到准确为止。这样可以计算出该吸管滴出的每一滴水的体积。用吸管取

7、样时，如果单细胞是活动的要用碘杀死后，再计数；如果样品浓度太大，计数困难，按倍数稀释到适宜的浓度；另外，取样前必须搅拌，搅拌后，立即取样。取样后，在显微镜下计数，得到一滴水中细胞数的平均值后，可依以下公式求出1mL水体中所含细胞的数目。1mL水体中含细胞数计数平均值定量吸管每毫升的滴数稀释倍数2血球计数板计数法血球计数板是由一块厚玻片特制而成，其中央有两个计数室。每个计数室划分出9个大方格见以下图，每格面积1mm2，加盖玻片后的深度为0.1mm。因此，每大方格容积为0.1mm。另外，中央大方格以双线等分为25个中方格。每个中方格又分16个小方格，供细胞计数用。 1 2 3 4血球计数板的构造l

8、顶面观 2侧面观 3放大后的网格 4放大后的计数室计数方法：首先用吸管吸取少许稀释倍数的单细胞悬液，从盖片端滴一小滴不宜过多，液体自行向内渗入，静置数分钟后，再放在微镜下观察计数。一般选取计数室内四个角及中央五个中方格80小方格计数，假设细胞位于小方格的线上，应遵循“数上线不数下线，数左线不数右线的原那么，以减少误差。计数应重复3次，取其平均值。数完毕后，依下式计算：每1mL悬液细胞数或每克细胞数80个小方格细胞总数 / 8040010000稀释倍数四、显微测微尺的应用方法显微测微尺是在显微镜下测量生物细微结构的测微工具，用它测量细胞各局部的厚薄和大小。显微测微尺见以下图包括目镜测微尺目尺和物

9、镜测微尺台尺，测量时须将其配合使用方可到达测量目的。目镜测微尺为一圆形玻片，玻片中央有一横线刻有大小格的等距离线。物镜测微尺有一特制的玻片，中央圆圈内有一1mm长分为100个等距小格的刻线，每一小格即10m。目镜测微尺 物镜测微尺显微测微尺测量方法：首先须算出目镜测微尺的每一格在不同倍物镜下各为多少m。即取下接目镜卸下透镜，装上目镜测微尺。然后将物镜测微尺放在镜台中央，眼观目镜，调好焦距，使两种测微尺上的刻度平行并重叠在一起。按下面公式计算出目镜测微尺每格的实际长度。目镜测微尺每格的长度m物镜测微尺的格数 / 目镜测微尺的格数10计算出目镜测微尺每格的实际长度后，再在镜台上放上需要测量的物体标

10、本或玻片标本，即可用目镜测微尺测出它们的长度。五、显微结构图的绘制技巧生物绘图是科学记录的一种方法。绘图时应注意：1绘科学图以精确为主，不能艺术加工渲染。2只在纸的一面绘图。绘图时要用2H以上绘图铅笔，纸面力求整洁。3绘图大小适宜，布局合理。一般要求图画在纸的稍偏左侧，留出图注的位置。4图的各局部的位置和比例，应与显微镜中实际观察的一致，而要注意突出显微结构的每个特征。5显微构造图的点线不要重复描绘。以实线表示轮廓，虚线表示被遮蔽但需表现的轮廓，用圆点的疏密来表示明暗、凹凸等层次。点点时笔尖直立。点的大小、疏密要均匀、整齐、浑圆。6绘图时，一般先草拟轮廓图，经检查无误后，再以准确、清晰的线作最

11、后的描绘。【解题指导】例1 用显微镜观察洋葱根尖细胞的有丝分裂，要看清各时期细胞内染色体的变化情况，目镜、物镜的合理搭配应该是 A 目镜24X、物镜10X，NA0.25B 目镜 5X、物镜40X，NA0.65C 目镜10X、物镜40X，NA0.65D 目镜24X、物镜40X，NA0.65析 此题属镜像亮度问题。镜像亮度与物镜镜口率NA平方成正比，与总放大倍数成反比。由此，在总放大倍数相同情况下，要使物像亮度增加，应该使用高镜口率NA的物镜与低倍目镜配合，根据这一原理应选择C。例2 在观察显微镜时，经常遇到以下5种现象：1视野亮度晃眼；2视野不圆；3对光时视野中出现窗棂、树影等物现象；4只见视野

12、不见图像；5图像结构不完整，试分析出现这些现象的可能原因，并提出排除方法。析 1视野亮度晃眼，可能原因：反光镜直射强光源；光照到通光孔上缘。排除方法：用平面镜斜对光源；挪镜。2视野不圆的可能原因：遮光器或转换器没有转到头；遮光器或转换器螺丝动。排除方法：把两者转到头弹簧片入槽；拧紧螺丝。3对光时视野中出现其他物象，其可能原因是镜筒太高或太低，调节一下镜筒即可消除。4只见视野不见图像，可能是操作不仔细，低倍镜头偏于一旁。排除方法：将低倍镜头对准通光孔。5图像结构不完整的可能原因是未根据材料的不同折光性用光，应调节光圈使透明度一致。例3 某架显微镜由于磨损，低倍镜上的放大倍数看不清，而高倍物镜尚看

13、得出是40倍，借助实验台上的哪些材料可帮你测出低信镜的放大倍数？说明测定方法。实验台上有显微镜、目镜测微尺、物镜测微尺、刻度尺、放大镜析 此题可利用显微测量技术测定。利用实验台上的显微镜和测微尺进行测量。由于目镜测微尺每格的实际长度因不同物镜的放大倍数有所不同，因此可以在相同目镜下，测量变换高40X、低倍物镜下的视野直径，由于放大倍数与视野直径成反比，按下式计算即可求出低倍镜的放大倍数。高倍镜放大倍数 / 低倍镜放大倍数低倍镜视野直径 / 高倍镜视野直径例4 在一黄粉岬幼虫尾部45节的节间刺一针，用毛细吸管取14mL血淋巴，再用毛细吸管取1520mL生理盐水，用血球计数板计细胞数区别脂类颗粒、

14、组织碎片与细胞，计算血淋巴细胞浓度填入下表。30min重复一次针刺部位前移一体节，60min重复一次针刺部位再前移一体节。1将有关数据填入下表：时间间隔min血淋巴长度amL生理盐水bmL细胞数数25个中方格细胞密度个mL030602将细胞密度变化绘成曲线，并答复以下问题：计数时怎样处理压线细胞？用一句话答复。给出计算细胞密度的公式。用一句话答复为什么血盖片较一般盖玻片厚。注意：针刺幼虫时，食指与中指夹住头部，拇指按住尾部，使其不动。针刺不要过深，不要挑动，以免虫死亡或使头部器官的细胞或杂物进入血淋巴。虫不可死。析 此题按血球计数极计数的方法操作，所得数据镇入表中。根据绘制函数曲线原理，以时间

15、间隔为横坐标，细胞密度个mL为纵坐标，绘制曲线。在计数时，对压线细胞采取“数上线不数下线，数左线不数右线的原那么处理。计算细胞数方法：每mL悬液细胞数80个小方格细胞总数 / 8040010000稀释倍数血盖片比普通盖玻片厚是因为要盖住计数板上的计数室沟槽。【稳固练习】1某同学在做观察洋葱根尖细胞有丝分裂装片时，有两次出了过失。第一次是解离时间为2min，第二次是60min。请你推出实验结果并说明原因。第一次是因 ，所以观察到的是 。第二次，那么因 ，所以 。2在照明充分的情况下，在显微镜视野内可看清洋葱鳞茎表皮细胞无色的细胞壁，但看不清液泡，为了能显示细胞质与液泡的界面，此时应 A 改用凹面

16、反光镜，放大光圈 B 改用凹面反光镜，缩小光圈C 改用平面反光镜，放大光圈 D 改用平面反光镜，缩小光圈3在显微镜视野中观察玻片标本，物镜测微尺和目镜5X测微尺在0点处重合时，物境测微尺的80格与目镜测微尺的55格处也相重叠时，试问目镜测微尺一格的长度是 m；如观察测量某种植物的细胞大小时，测量其长为7个小格，那么此细胞的实际长度是 m。4撕取所给叶片的下表皮，放在显微镜下观察，绘出保卫细胞及表皮细胞的特征。随机取五个视野计算气孔数，取其平均值，计算气孔密度个cm2。低倍物镜视野直径为1.5mm，目镜统一用10倍第二节 物理学和化学分析技术【知识概要】、别离技术别离技术主要是利用物理学和化学的

17、原理建立起来的各种别离、纯化方法。常用的别离技术有以下几种：1纸层析法层析技术是从一个混合物中别离和纯化一种或几种生物化合物的最简便的方法，用滤纸为支持物的层析法，叫纸层析法。纸层析用的展层溶剂大多由水和有机溶剂组成。滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱，因此在展层时，水是静止相，纸是静止相的支持物，有机溶剂是流动相，它沿着滤纸流动。假设将生物样品提取液点在滤纸上此点称为原点进行展层，样品中的各种溶质如叶绿体中的四种色素，各种氨基酸等即在两相溶剂中不断进行分配。由于它们的分配系数不同，不同溶质随流动相移动的速率不等，于是就将这些溶质别离开来，形成距原点不等的层析点。纸层析的具体方法：1

18、制样。将样品经研磨、过滤制备成提取液；2制备滤纸条。将滤纸剪成长10cm、宽1cm的纸条。在一端用铅笔画一横线点样线；3点样。用毛细吸管将滤液沿点样线画一直的滤液细线；4层析：将层析液石油醚、丙酮、苯的混合液倒入烧杯，然后将滤纸条靠烧杯内壁轻轻插入层析液中。5结果。几分钟后，出现层析现象。2电泳法电泳技术主要是根据不同物质所带的电荷的数量和性质不同，因而在电场移动中的速度和方向就不同。生物分子如氨基酸、多肽、蛋白质、酶和核酸等都具有可电离的集团，在溶剂中能形成带电荷的分子，由于在不同的溶剂介质中所带的电荷的数量和性质的差异，在电场中泳动的速度迁移率不同，由此可以别离各种物质成分。电泳的方法很多

19、，有纸电泳、琼脂平板电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等，其中较简单的是纸上电泳法，它是用滤纸作为电泳载体的一种电泳方法。纸上电泳一般操作过程以别离血清蛋白为例：1仪器准备。电泳设备主要是电泳仪和电泳槽见以下图。电泳槽是供两极电泳别离和盛装缓冲液之用。电泳仪提供可控电源。一般采用电压在100500V，电流在0mA50mA或100mA。2配制缓冲液。缓冲液的种类很多，可用0.5M、pH5.6巴比妥缓冲液或 Ph8.6硼酸缓冲液。缓冲液配好后直接参加两侧电泳槽中。3裁剪滤纸。取电泳滤纸，按220cm剪裁，于一端约1/3处用铅笔划点样线，将纸用缓冲液浸湿。4点样。在点样线上，用50L微量注射器点样，一般为10

20、mL。点样后，将滤纸放在电泳槽两极隔板上，两端浸入缓冲液中。5电泳。接上电源，按滤纸长和宽选用电压8Vcm和电流0.4mAcm，以点样线一侧为负极，向正极泳行。6烘干。取下电泳纸条在烤箱90105迅速烘干。7染色。将烘干滤纸条浸入溴酚兰染液10min，取出以0.5醋酸溶液脱色，逐渐显出电泳带。8比色。将各条区带滤纸剪下，以电泳空白滤纸为对照，在分光光比色计上比色。9计算。按光密度值计算出各局部蛋白质的百分数。水平电泳槽装置3离心法离心法是一种利用物质在溶液中的密度、大小和形状的不同，以及它们沉降系数、质量、浮力因子等方面的差异，通过强离心力的作用使其别离、浓缩、提纯的技术，并可用于分子量的测定

21、。在生物学研究中，常用离心方法从组织匀浆中别离各种细胞器及各种蛋白质、核酸等生物大分子。离心的设备主要是离心机，它是利用离心力对混合液进行别离和沉淀的专门仪器。离心机的种类很多，有低速离心机4000/ min以下、高速离心机4000/ min以上，20000/ min以下和超速高心机20000/ min以上。离心别离方法很多，常用的是差速离心机，是指低速和高速离心交替进行，用不同强度的离心力使不同质量的物质分批别离的方法。例如，利用离心机的不同转数rpm，即/ min和时间，从鼠肝匀浆中别离各种亚细胞组分的过程以下图：大白鼠肝脏匀装分级别离各种亚细胞组分图解二、测定技术1定性测定比色法生物材料

22、化学成分的测定技术很多，在生物学实验中最常用的简便方法是比色法。比色法是利用生物组织中的有机物与某些化学试剂相互作用，能产生颜色反响的原理，可以根据颜色反响鉴定生物组织中某种有机物的存在。从细胞组织中，鉴定有机物的常用比色法，参见下表。成分试剂作用颜色反响复原糖斐林Fehling试剂使自由醛或酮基的糖氧化产生棕红色Cu2O沉淀蛋白质双缩脲试剂肽锭在碱性环境中与CuSO4结合产生红紫色的络合物淀粉碘液淀粉与碘结合蓝色反响脂肪苏丹酒精溶液脂肪与苏丹结合红色反响维生素A三氯化锑一氯仿溶液与SbCl3作用蓝色反响维生素B1重氮化氨基苯磺酸溶液在碱性溶液中发生作用红色反响核酸亚硫酸复红溶液与DNA发生作

23、用呈红色或紫色2定量测定滴定法滴定法是将一定浓度的标准溶液滴入被测物质溶液中，当反响到终点后，根据所用标准溶液的体积计算被测物质的含量，这是一种常用的容量分析法。滴定法常用的仪器是滴定管。它是带有刻度和活栓的玻璃管，用它放送体积的溶液。滴定法的一般操作技术以维生素C定量测定为例：1样品制备。将样品洗净蔬菜20g，加2草酸100g，置组织搅拌机中打成浆状。称取5g浆状物倒入50mL容量瓶中以2草酸溶液稀释至刻度。静置10min，过滤备用。2滴定。标准液滴定：准确吸取标准抗坏血酸Vc溶液 1mL含0.1mgVc置100mL锥形瓶中，加9Ml1草酸，微量滴定管以0.12，6-二氯酚靛酚滴至淡红色，并

24、保持15sec即为终点。由所用染料的体积计算出1mL染料相当于多少mg抗坏血酸。样液滴定：准确吸取滤液两份，每份10mL分别放入两个100mL锥形瓶内，测定方法同前。计算：VT / W100100g样品中含抗坏血酸Vcmg数式中：V滴定时所用去染料毫升数。T1mL染料能氧化Vc毫克数。W10mL样液相当于含样品之克数。【解题指导】例1 叶绿体中色素的提取和别离：1提取和别离叶绿体的色素，可采用 方法。2用毛细吸管在滤纸上划出滤液细线时，线条越细越好，这样可以防止 ，以便取得较好的 。3叶绿体b为黄绿色，层折后的位置是在滤纸条的 。4实验应尽量在通风处进行，实验后一定要将手洗净，这是因为 。析

25、提取和别离叶绿体中的色素可采用纸层析法。在点样划线时，越细越好，这样可防止色素带之间局部重叠，以便取得较好的别离效果。层析后，滤纸条上自上而下有4条色素带。因为该实验使用了苯、丙酮等有毒化学药品，实验时应通风，实验后要洗手，确保平安。例2 在鸡血DNA的粗提取与鉴定实验中，请答复：1为什么使用NaCl溶液离析DNA？2为什么使用乙醇纯化DNA？3为什么甲基绿能鉴定DNA？析 DNA在NaCl溶液中有一定的溶解度，并随着NaCl溶液的溶度变化而改变。当NaCl的质量浓度为0.14ML时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可促使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。DNA不溶于乙醇，但细胞中的某些物质

26、可以溶于乙醇。利用这一原理，可以进一步取出较纯洁的DNA。DNA遇甲基绿会被染成蓝绿色。因此，甲基绿可用作鉴定DNA的特定试剂。例3 利用纸电泳法别离血清蛋白。血清蛋白中含有5种蛋白质，依分子量由小到大排列为清蛋白A、1、2、球蛋白。试问：1电泳后，滤纸上出现几条区带？离点样线最远者是什么蛋白质？说明其原因。2欲计算各局部蛋白质的百分数，请说明计算方法。析：电泳后，在滤纸上应出现5条区带，因为分子量小的蛋白质，电场中泳动的速度快，也就是迁移率大。因此，离点样线最远者为清蛋白A，依次是1、2、球蛋白。计算各蛋白质的百分数，可通过比色法测定，在分光光电比色计上对各条区带进行比色，波长在580nm6

27、00nm，记录各自的光密度。然后按光密度总和TA12的各光密度值，计算出各局部蛋白质的百分数：清蛋白 AA / T100；球蛋白11 / T100其他蛋白质依次类推。【稳固练习】5在实验台上有天平、100mL烧杯、培养皿6个、红墨水、I2-KI溶液、苏丹溶液、双缩脲试剂、显微镜、刀片、镊子、小麦种子、菜豆种子、蓖麻种子将以上种子分出一半浸泡使局部种子刚好发芽，然后将每种种子浸泡过的和枯燥的分别装于培养皿中。试问：1绘图说明培养皿中各种材料各局部的结构名称。2测定各类种子萌发所需的吸水量g水 / g种子，并写明实验过程。3测定各类种子潜在的萌发率，并写明实验过程。4各类种子贮存有机物有何特点？依

28、据是什么？6研磨叶肉细胞后放入离心管中离心，细胞壁和核物质沉淀在管底，这些沉淀物为P1，上清液为S1。将S1倒入另一管离心，别离出椭球或球形颗粒P2和上清液S2。将S2再倒入另一离心管离心，别离出棒状的颗粒民P3和上清液S3。再将S3倒入另一离心管离心，别离出上清液S4和含粒状小体的沉淀物P4。而S4中只含有溶解于水的物质。见以下图。请在AE中选正确答案填入以下各问中。A P1 B P2 C P3 D P4 E S4 1合成蛋白质的结构存在于 。2DNA含量最多的是 。3含有将CO2和H2O合成C6H12O6的反响所需酶的是 。4含有将葡萄糖分解成酒精的反响所需酶的是 。7用碘液、乙醇、苏丹溶

29、液、盐酸液、氢氧化钠溶液、硫酸铜溶液、氯化钾溶液、醋酸洋红溶液、亚甲基蓝溶液、丙酮等药品，如何证明面粉团用纱布包起来在清水中搓洗后，纱布中的面筋是蛋白质？洗出来的白浆是淀粉？8将花盆横放在转盘上，假设转盘以最大速度旋转时，花枝朝什么方向生长？并说明其原因？9用小刀将数十只萤火虫发光器割下，枯燥后研成粉末状，取两等分分别装入两只小玻璃瓶中各参加少量的水，使之混合，可见到玻璃瓶中有淡黄色荧光出现，经过15min荧光消失。这时，再将ATP溶液参加其中一只玻璃瓶中，将葡萄糖溶液参加另一只玻璃瓶中，可观察到加ATP溶液的玻璃瓶中荧光出现，而加葡萄溶液的瓶中没有荧光出现。以上现象说明了1 ；2 ；3 。第

30、三节微生物培养技术【知识概要】一、培养基的制作技术制作培养基是微生物实验的根底。培养基的制作有以下几个环节：1玻璃器皿的清洁在制作培养基前，首先应准备好符合要求的清洁玻璃器皿。一般用肥皂液煮沸30min，或浸入用重铬酸钾和浓硫酸配制的洗液数10min，然后用清水冲洗，晾干后保存备用。2培养基的制作过程1配制液体培养基 根据需要配制培养基的数量，先在大杯中注入局部蒸馏水；按培养基配方称量各种成分的原料，依次参加使之溶解；补足需水量；如用肉膏等配制时，需加热溶解；加热后，补足因加热所蒸发的水分，即成液体培养基。2配制固定培养基 在液体培养基里加凝固材料琼脂，参加后继续加热使之融化，即成固体培养基。

31、3调整 pH值 配好培养基后用pH试纸测试，用10% HCl或10NaOH调到所需的pH。4过滤分装 用滤纸或纱布趁热过滤，将过滤液分装于试管中，其量约为试管的1/41/3不要沾污管壁，塞上棉塞。5灭菌 将分装好的培养基，经高压蒸汽灭菌30min，保存备用。3制平面或斜面培养基在分装时，如装入培养皿那么成平面培养基。欲制成斜面培养基，那么将灭菌后的琼脂培养基，趁热倒入试管，盖上棉塞，并将试管摆放在小木条支架上，呈适当斜度见以下图，凝固后即成斜面培养基，可保存备用。培养基的斜面摆法4细菌培养基的制法培养不同的微生物需制备不同的培养基。培养细菌主要用牛肉膏培养基牛肉膏0.5g；蛋白胨1g；食盐0.

32、5g；琼脂1.5g；水100mL。制法是：按照配方先配好各种成分的培养液，加热使之充分溶解，并补足所失水分。调pH为7.47.8灭菌后的pH为 7.27.6。分装后灭菌，制成斜面，即成肉膏蛋白胨培养基。二、分病菌技术别离菌技术主要包括接种和稀释技术。微生物的各项实验操作均应在无菌条件下进行。1接种技术1接种设备 接种时可在无菌操作箱见以下图或超净工作台上操作。无此设备条件也可直接在酒精灯上操作。接种工具有接种环、接种针和接种钩。无菌操作箱1通气孔；2移动门；3手孔2接种的方法步骤 用品的消毒灭菌。接种箱和接种用品用紫外灯灭菌。双手用75乙醇消毒。采种。菌种由窗门放入，两手从袖套伸进接种箱，点燃

33、酒精灯，用左手并排拿起有菌种的试管和培养试管，试管口靠近酒精灯火焰，旋松棉塞；右手的拇指和食指拿起接种环，放在火焰上烧红灭菌。接种。用右手的中指、无名指和小指夹下两个棉塞，把两个试管口放在火焰上燎一下。把灭菌的接种环伸进菌种试管，挑取一点菌落，再插入培养基试管里，在培养基斜面上由管底向管口连续轻轻地划几道曲线，使菌落涂在培养基上。然后抽出接种环，将试管口再在火焰上燎一燎，塞上棉塞，连续操作使所有培养基试管都涂上菌落。参看以下图接种方法示意图保温培养。接种后，将试管放保温箱37恒温培养，34天后，在培养基上可以看到正在发育的菌落。接种方法示意图1接种环灭菌；2采种；3接种；4试管口灭菌；5装好棉

34、塞2稀释技术在自然界，微生物都是混杂生活在一起的，要想研究某种细菌，必须从混杂的细菌群体中别离得到一种细菌。这种纯培养别离菌种的方法很多，较简单的有稀释倒平皿法。这种方法是将待别离的材料作一系列稀释如110、1100、11000、110000等，取不同稀释液各少许与已溶化并冷却至45的琼脂培养基相混合，倾入灭过菌的培养皿中，待培养基凝固后，保温培养一定时间，即有菌落出现如以下图。如果稀释得当，平皿中出现分散的单个菌落便可能由一个细菌繁殖而成，挑取此单个菌落或再重复以上操作数次，便可得到纯培养的菌株。稀释倒平皿别离法三、染色技术鉴别细菌主要采用革兰氏染色法。按照细菌对这种染色反响的不同，分为革兰

35、氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类。染色方法要点是：细菌先经草酸结晶紫染色处理，用媒染剂碘液处理后，再用酒精脱色，最后番红或沙黄复染。如果细菌不脱色不复染，呈紫色，称为革兰氏阳性细菌用G表示，如芽孢杆菌、放线菌、酵母菌和多数球菌呈阳性反响；如果细菌被酒精脱色而被番红或沙黄复染成红色的称为革兰氏阴性细菌用G表示，如大多数无芽孢杆菌和某些球菌、螺旋菌，呈阴性反响。【解题指导】例1 现提供以下实验条件：显微镜一台、革兰氏染色用具一套、血球计数板一套、吸管、小烧杯、天平、测微尺一套、试管、吸水纸、二甲苯、香柏油。请进行以下实验并答复以下问题。1请设计一实验来判断：成型颗粒样品A。该样品可能含有何种生物细胞？

36、该成型颗粒样品A中生物细胞含量为多少？个/g假设该成型颗粒全为生物细胞组成，试求出每个细胞的重量？要求写出实验过程、所用器材，测定的数据、计算公式、结果等2有材料C，请对其进行革兰氏染色。判断该细菌为何形态？染色结果如何？绘出该细胞的形态图？要求同上析 1实验提供的样品A为市售干性活酵母。先将定量样品A用定量无菌水稀释成菌液，然后用革兰氏染色法鉴别该菌的类型并在显微镜下识别该菌的形态。实验结果呈革兰氏阳性反响，再根据形态说明该样品可能是酵母菌。通过显微测量，用血球计数板测定样品A的细胞含量个/g和每个细胞的重量g个。2材料C为短杆菌。通过革兰氏染色后，在油镜下观察细胞的形态，并绘出该细胞的形态

37、图。例2 将10mL酵母液放在适宜温度下培养，并于不同时间内等量均匀取样4次，分别测定样品中酵母菌的数量和pH，结果如下表。请分析答复。1表中样品的取样先后次序为 。2对酵母菌而言，100mL该培养液的环境负荷量为 个。3假设第5次均匀取样时，样品中的酵母菌数量为760个/mm3。产生这一结果的原因是 。析 1根据样品菌数，越在先菌数越少，由此取样顺序为2、4、1、3。2经过培养10mL培养液中有菌数1210个/mm3，环境负荷量应为1.21107。3培养液中的营养物质不断被消耗，pH值减小，局部酵母菌因营养缺乏不适应而死亡并解体。【稳固练习】10有材料A1和A2。A1为接种后经32培养10小

38、时的样品；A2为接种同样菌种并经培养12h后的样品，假设接种后该菌种细胞即开始以指数生长即12482n，这里n表示细胞分裂的次数，请通过试验测定出该微生物分裂一次所需要的时间。用G表示，单位为min要求：1判断该生物细胞是什么？2记录一些重要的测定数据并写出计算公式。3写出测定所需要的主要设备、器材。注：材料为培养的啤酒酵母。11有某一浓度的细菌悬液B，假设不用血球计数极，请用实验台上给出的材料C测出该细菌悬液的浓度。请在试卷上写出测定过程和测定的结果B为细菌培养液，C为浓度的鸡血。12有平板培养材料D。请对其进行革兰氏染色并指出形态及革兰氏染色结果。该材料是否有自主运动真性运动？如何简便判断

39、？如能运动，请判断该菌鞭毛类型。要求写出实验过程及结果第四节 植物解剖与生理测定技术一、植物解剖技术见下表植物各种器官解剖与观察方法名称材料解剖方法观察顺序总结根洋葱或小麦根尖压片法纵剖面、徒手切片法横切面，显微镜下观察表皮外皮层内皮层中柱中柱鞘、维管束根结构特点茎1新生杨树枝条2玉米幼茎1取枝条插在红墨水中，叶片显红色后，用解剖刀横切和纵切，直接观察2徒手切片法，显微镜下观察1树皮表皮皮层韧皮部筛管木质部导管髓2表皮机械组织维管束导管、韧皮部双子叶木质茎构造特点单子叶草质茎构造特点叶蚕豆叶或青菜叶徒手切片法，显微镜下观察上表皮气孔叶肉栅栏组织、海绵组织叶脉下表皮气孔叶结构特点花桃花玉米雌、雄

40、花用镊子分层解剖，将花的各局部摆在白纸上直接观察花萼萼片数花冠花瓣数雄蕊花丝、花药雌蕊柱头、花柱、子房花托单性花和两性花结构特点，花图式果实桃核果番茄浆果蚕豆角果苹果梨果用解剖刀将果实纵剖或横剖后，直接观察荚壳果皮外果皮、内果皮果肉子房壁种子胎座不同果实的结构特点二、徒手切片技术徒手切片是将要观察的材料切成极薄的片，以到达了解其形态结构的一种方法。徒手切片步骤如下：1选择材料和夹持物可作徒手切片的材料有各种植物的叶片、较软的嫩茎等。由于能作徒手切片的材料较柔软，切片时须有夹持物辅助。夹持物一般用胡萝卜或白萝卜的圆锥根、马铃薯的块茎等。对于较薄的叶可直接夹在夹持物的劈口中；对于较厚的材料，那么须

41、按材料大小先在夹持物的劈口上挖成适宜的凹穴，把材料加进去，再开始切片。2正确手持材料和持刀方法应用左手持材料，夹在拇指和食指或其他四指之间，材料略高于拇指和食指。拇指略低于食指，以免切时刀刃伤手。右手持刀剃刀或刮脸刀片，刀身要放平，刀口向着切片材料见右图。3切片技术先将材料和刀口蘸些水，切去材料上端不整齐的一段，然后再正式切，切时要保持在同一水平面上，由左前外方向右内方即向着自己迅速拉动，动作要快。切时用力靠臂，才能平稳。切下的片，弃去较厚不适用的，对符合要求的立即侵入有水的培养血内。4选片和装片徒手切片往往厚薄不一，可放在载玻片上，在显微镜下检查，选出适宜的切片。切片选好后，进行染色，盖上盖

42、玻片，即可作为临时装片，在显微镜下观察。三、光合作用强度的测定方法1干重法的实验原理植物的木质部输送水分，韧皮部输送营养物质。如果用化学或物理的方法破坏植物叶片基柄的韧皮部而保存木质部，就可以阻断叶片中光合产物输出，而同时保持叶片中正常水分的供给。在这样条件下，用干重法比拟：留在植株上进行一定时间光合作用后的半张叶片，与处理前取下并在暗中保存的半张叶片的单位面积干重差，就可以测得植物叶片的光合作用强度。2操作技术1选择测定用的样品 在麦田或棉田选择有代表性植株的叶片叶片在植株上的部位、叶龄、受光条件应一致，用小纸牌编号挂好。一般每个处理选用1020张叶片。2叶片基部或叶柄的处理 为了破坏叶的输

43、导系统的韧皮部，可根据测定植物的不同而采取不同处理方法。如测棉花等双子叶植物的叶片，可用刀片将叶柄的外皮环割掉1cm左右，然后用橡皮膏包好套上塑料套管；如测小麦等单子叶植物的叶片，可采用石蜡烫伤叶片基部的方法，即用酒精灯，在灯上外加铁丝圈，可将装有石蜡的小烧杯放在灯上加热，一般在90左右，用毛笔蘸蜡在叶基部烫一下。烫后要不影响叶片的自然生长角度。3剪取样品 叶基部处理完毕即可剪取样品，一般用打孔器取样，也可用剪刀剪取。取样同时记录时间，开始进行光合作用测定。剪取样品时应按实验编号次序分别剪下对称叶片的一半主脉不剪下。取下的半张叶片按编号次序放入铝制样品盒中或夹在湿纱布中并贮于暗处。45h后再剪

44、取另外半张叶片，同样放在铝盒或湿纱布中。4称量比拟 将上述叶片按光暗两张半叶的对应局部重叠起并压上模板，用单面刀片割下等面积的叶片，如用打孔器取样时，应出取样面积大小，然后分别存放在称量皿或短的玻璃管内，也可放在铝盒中，在8090烘箱中烘至恒重约5h，然后在分析天平上称重并做好记录，计算出平均值和误差。5计算结果 将上面的实验数据代入下面公式即可算出作物光合作用强度。光合作用强度mg干物质dm2h光暗叶片干重差mg/ 单位叶面积dm2/ 照光时间h四、蒸腾作用的测定方法1氯化钴检验法原理植物通过蒸腾作用散失水分。氯化钴纸枯燥时呈蓝色，受潮吸水后逐渐变成粉红色。由此，可通过氯化钴纸检验叶的蒸腾作

45、用。2操作技术1裁取两张边都是3cm正方形的蓝色的5氯化钴纸。在盆栽天竺葵上选择一片叶，把一氯化钴纸覆在叶的表皮上，取另一张氯化钴纸覆在叶的下表皮上。然后两面覆褶一张大于氯化钴纸的玻璃纸，用回形针或夹子夹住玻璃纸和叶片见右图。2也可以用玻璃胶把氯化钴纸固定在叶的上、下外表，外包玻璃纸并夹住。3观察氯化钴纸颜色的变化，比拟上、下外表氯化钴纸变化的速度和变色的程度。4实验结果，下外表氯化钴变成粉红色的时间比上外表快，且外表程度大。因叶下表皮气孔分布多，蒸腾出的水蒸气也多，氯化钴易受【解题指导】例1 有2张无标签的切片标本，根据以下观察：切片1：横切面圆形，纸管束排成一轮，木质部和韧皮都相对排列，维

46、管束中有形成层，有髓，初生木质部为外始式，次生韧皮部有纤维、筛管和伴胞。切片2：横切面圆形，木质部、韧皮部相对排列。维管束星散排列，无形成层，无明显髓与表层。写出切片属哪类植物，何种器官。切片1 切片2 析 切片1为双子叶植物根的结构，切片2为单子叶植物茎的结构。例2 有人设计了一个实验来证明光合作用需要CO2，他在两支试管里装入蓝色的BTB溶液这种溶液在酸性条件下呈黄色，碱性条件下呈蓝色，向管内吹入CO2，溶液都变为黄色。在1号管内参加绿色水草，放在阳光下，2号管内也参加绿色水草，用黑纸包起来。如后，发现1号管内BTB液变蓝，2号管内液体仍然黄色。因此，他认为这个实验可以证明光合作用需要CO

47、2。有人认为这个实验不够严密，你认为如何在上述实验装置的根底上加以改良，就可以使实验更加严密地说明光合作用需要CO2？ 。析 应增加1支黄色BTB液的试管中不放水草，但是照光，排除BTB液遇光变色的可能。【稳固练习】13用所给的材料睡莲的叶柄作徒手切片观察，绘出结构简图，注明特殊结构并答复以下问题：1有哪些特殊结构？各有什么作用？2判断其所处生态环境。14在实验台上提供体视镜、显微镜、双面刀片、单面刀片、载玻片、盖玻片、番红水溶液等实验条件，测定龙舌兰、狗牙根、大麦、莎草4种植物的叶，试答复：1选择填空 属C3植物， 属C4植物， 属CAM植物。 耐旱性极强， 耐旱性较弱， 耐旱性较弱。 的最

48、高净光合率较高。 的最高净光合率中等， 的最高净光合率较低。1A：龙舌兰；lB：狗牙根；1C：大麦；lD：莎草2简答题：判断材料1A至1D各属C3或C4植物或CAM植物的依据是什么？1A： ； 1B： ；1一C： ；1一D： 。15以下图是未完成的实验装置，请利用a、b、c三支试管，新鲜叶片和必要的辅助材料，设计一个光合作用吸收CO2与呼吸作用释放CO2的实验，并预计实验结果。1当a管用于证明光合作用吸收CO2实验时，需 ，指示剂呈色 。2当b管用于证明呼吸作用释放CO2实验时，需要 ，指示剂呈 色。3C管在实验中起 作用，指示剂呈 色。4用几层纱布包上照光的d管，实验结果说明指示剂颜色没有变

49、化，其原因是 。16观察两株不同表现的白菜植株：一株生长正常；另一株有黄化现象。试答复以下问题：1使植物呈现这两个表现差异主要是由于植物体内两种物质含量不同所致，这两种物质是什么？2使植物呈现这两个表现差异的外界因子是什么？3该外界因子是怎样影响植物而造成这种差异的？17取A液高渗溶液中的一实验材料侵入B液蒸馏水中。在A液中取另一实验材料于显微镜下观察其细胞结构并绘图。待B液中的材料浸泡20min后，取出于显微镜下观察并绘图。解释你观察到的现象。18用徒手切片法横切黄豆芽的根，做一个典型的初生根切片装片，画出简图，标出凯氏点、原生木质部、后生木质部的位置，请答复选取以下哪一类染料作为染色剂？A

50、 间苯三酚、盐酸饱和溶液 B 龙胆紫 C 亚甲基兰 D I2-IK溶液第五节 动物解剖与生理测定技术【知识概要】一、小型无脊椎动物的解剖技术1蚯蚓的解剖1取材 最好取活蚯蚓经过麻醉或加温水的方法，然后解剖，可以见到心脏的活动。2解剖 解剖时要腹侧向下，背侧向上，前端向外，后端向着解剖者。先以大头针将前端固定解剖盘上，再以大头针固定后端，使蚯蚓平直，然后用解剖剪在背中线这是解剖蚯蚓的特点从后端向前端剪背壁。3展平体壁 先用镊子夹着一侧体壁，用解剖刀割断节间的膜，再割断另一侧隔膜，最后向左右展平体壁，为了便于观察内部器所在节的位置，每隔5节体节在左右各插上一个大头针针要斜插，插至30节以后，便可不

51、按节插，插的较能固定即可。4注清水 为了观察清楚，解剖盘内应放些清水，浸泡蚯蚓。5观察 先观察各器官的自然位置，识别各器官的形状、颜色位置等，然后再按各器官系统逐步观察。2蝗虫的解剖1取材 已浸制保存的蝗虫包括雌性和雄性。2外部观察 取蝗虫放在解剖盘上，先观察外形，观察顺序是先整体，再从头、胸、腹各部从前至后分别观察。3解剖 解剖蝗虫的方式不同于一般左右对称的动物。解剖蝗虫要先沿左侧气门上方，由腹部末端向前剪开，直至前端；再沿右侧同样剪开，背壁除掉即可观察内部构造。4固定蝗虫 用大头针固定蝗虫材料于解剖盘上，并注入清水浸泡虫体。5观察 先按各器官的自然位置从前至后识别其形态、特点、颜色和位置等

52、，再就各器官系统分别观察。二、双筒解剖镜的使用技术1解剖镜的构造双筒解剖镜的构造根本上与显微镜相似，也分为机械装置和光学系统两局部，不过它的构造比拟简单。机械装置有镜座、镜台、镜筒、支柱立柱和调节手轮等局部：光学系统有接目镜、接物镜和反光镜等局部见右图。双筒解剖镜具有两个镜筒、两个目镜和物镜，因此，使用时两眼可以同时观察。在镜筒的其中一个附有调整目镜筒目镜调节圈，用以校正观察者的两眼间距离。双筒解剖镜只设有一对粗调焦手轮，进行焦距调节。按目镜和接物镜也有各种不同的放大率，一般双筒解剖镜的放大倍数，从几十倍至一百倍左右。在双筒解剖镜上有的有反光镜，有的缺反光镜；有的在镜身上附有照明灯。镜台上有一

53、块厚玻璃板和一块一面白色一面黑色的瓷板，根据观察物的颜色和透明度可以调换使用。2解剖镜的使用方法把解剖镜放在面向光源的位置，调节两镜筒间的距离，使适合自己的两眼间的宽度。如观察透明的标本，镜台选用玻璃板，光源由反光镜底下照射。如观察不透明的标本，镜台选用瓷板，深色标本用白色一面，浅色标本用黑色一面，光源以强光或灯光从上面直接照在标本上，标本要观察的部位应转向光源。在解剖镜下，观察到的物象为一正立像，而且标本移动方向和物像的移动方向完全一致。三、小型动物整体装片的制备技术整体装片的制作，可以用于封固小形动、植物的整个身体，或个别组织和器官，制成永久装片后能长期保存。现以水螅整体装片为例说明制作技

54、术，其步骤如下：1配制固定液固定液用波因Bouin氏固定液，即用75mL苦味酸饱和水溶液中参加25mL甲醛，在临用时再参加5mL冰乙酸。2固定与去色固定水螅时，先在外表皿里放入少量水，用吸管把水螅从培养缸中吸出，放在外表皿内。等水螅身体和触手慢慢伸展后，用加热的波因氏液3040固定。固定液要多些，倾倒时要迅速，倒在水螅身上，使水螅不收缩。在固定液中固定48h。然后浸入70乙醇中，每天更换一次乙醇，直至洗去标本上因固定液而染上苦味酸的黄色为止。3染色与褪色将标本浸入硼砂洋红染液中，染24h。然后用1盐酸乙醇褪色，时间为0.51min，褪色到内部器官能看清楚为止。4脱水和透明依次将标本浸入70、8

55、0、95乙醇及无水乙醇脱水。用二甲苯透明。5封片用树胶封片。四、呼吸的测量技术1人体肺活量的测定方法测定肺活量有助于了解肺通气的情况，是肺功能的指标之一。肺容量是指肺容纳的气体量，它是肺活量同余气量之和。肺活量那么是潮气量、补呼气量和补吸气量的总和。测定肺活量需用肺活量计，测定方法如下：1校正肺活量计。测前筒内装水，调整指标到“0位，吹嘴用70乙醇消毒。2测定潮气量。受试者平静吸气后，捏住鼻子，向肺活量计内呼气，指针的读数，即为潮气量。3测定补呼气量。受试者平静呼气后，捏住鼻子，向肺活量计作最大呼气，指针的读数，即为补呼气量。4测定补吸气量，先让肺活量计内气体排出，提高浮筒，使筒内存3000m

56、L新鲜空气。受试者平静吸气后，对准吹嘴作最大量吸气。肺活量计减少的气量即为补吸气量。5测定肺活量。将肺活量计内的气体排空，指针到“0位，受试者尽量吸气，迅速捏鼻，向肺活量计吹嘴作最大限度呼气。指针的读数，即为肺活量。一般要求测三次，取其中最大值作为受测者的肺活量。2人体呼出气体中含较多CO2的测定方法根据石灰水遇CO2生成乳白色CaCO3沉淀的原理，可进行CO2含量的测定，其方法如下：1取甲、乙两个试管，向各管内注入10mL15mL澄清的石灰水。2在甲试管内插进一根玻璃管或麦管，露出一端用70乙醇消毒。然后作深呼吸后，立即用玻璃管向试管中尽量呼气，可以观察到呼出气体遇到石灰水后，变成浑浊状的现

57、象。3用橡皮球朝乙试管内的石灰水打气，可观察到石灰水依旧澄清，不发生变化。【解题指导】例1 螽斯的解剖观察1剖开体壁，显示血管：A按观察要求，正确地剖开体壁；B将有血管的体壁粘贴于指定的框内并以1枚指针的尖端指向血管。2制作装片，示气管系统与生殖腺的关系：A制作水封装片；B在低倍镜下以指针指出能显示气管系统与生殖腺关系的部位；C用高倍镜观察生殖腺处气管系统的分布特点，并画出气管系统与生殖腺关系显微结构图。3指出螽斯的排泄器官：在另1枚指针上写出其排泄器官的名称，并以其尖端指出该器官。4完整地取出螽斯的舌，粘贴在指定的纸上。5将螽斯的发声器官按发声位置完整地粘贴在指定的纸上。6写出你所解剖的螽斯

58、的性别为 性。析 螽斯是直翅目的一种昆虫。它是开管式循环，血管和心脏只在背侧的体壁上。其发声器官为前肢。雌性螽斯在尾部有很长的产卵器。例2 解剖无脊椎动物与脊椎动物不同，一般先从解剖 开始，因为 。解剖后进行观察时应有一定顺序。例如：蛔虫的观察顺序是 ；蚯蚓的观察顺序是 ；蝗虫的观察顺序是 。析 无脊椎动物的解剖一般从反面开始，因为无脊椎动物的神经索在腹面，消化道也靠近腹面，如果从腹面开始解剖很容易损坏内部的一些重要结构。解剖后，应根据不同的动物，按相应的顺序来观察。蛔虫的观察顺序是消化系统生殖系统排泄系统；蚯蚓的观察顺序是体腔消化系统循环系统生殖系统神经系统排泄系统；蝗虫的观察顺序是循环系统

59、呼吸系统生殖系统消化系统。例3 在实验台上放置有：分装于三只烧杯中的水蚤、冰块、酒精灯、镊子、滴管、载玻片、盖玻片、坐标纸、显微镜、温度计、秒表、0.5mm的头发数根。请在显微镜下观察水蚤在常温、低温和高温下心搏速率的变化情况，并答复以下实验问题：1制表记录水蚤心跳的次数。2在观察水蚤时能否看到它的血液流动？3用曲线表示水蚤心搏速率随温度的变化而发生的变化，并说明原因。析 1观察水蚤心博速率的方法：将三只装有水蚤的烧杯分别处理，低温处理用冰块降温至低于常温510，高温处理用酒精灯加温至高于常温510，用温度计分别测出每只烧杯的具体温度。然后用吸管吸取烧杯中的水蚤一只，连同少许水放在载玻片中央，用镊子夹取头发4根，分散置于水滴内，将水蚤圈在头发中，立即