机能学实验报告

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1、实验一、小肠平滑肌生理特性的观察与分析一、实验目的1. 观察温度、乙酰胆碱、肾上腺素等药物对离体家兔小肠平滑肌的作用；2. 观察消化道平滑肌的一般生理特性及分析理化环境改变对其舒缩活动的影响。二、实验原理消化道平滑肌和骨骼肌、心肌一样，也具有兴奋性、传导性和收缩性，有些也具有自律性。相比之下消化道平滑肌的兴奋性低，收缩慢，伸展性大，具有紧性收缩，对化学物质、温度变化及牵刺激较敏感等特性。 小肠离体后， 置于适宜的溶液中， 观察其收缩活动及环境变化的影响，观察分析上述生理特性。三、实验材料1、实验动物：家兔2、器械、药品：电热恒温水浴锅、浴槽、力换能器(量程为25g 以下)、 BL-410 生物

2、记录系统、 L 型通气管、道氏袋、注射器、培养皿、温度计、烧杯、螺丝夹、三维调节器、台氏液、0.01%去甲肾上腺素、0.01%乙酰胆碱、1mol/L NaOH 溶液、lmol/L HCl溶液、2%CaCl2溶液。四、实验方法和步骤1、标本制备流程：击昏家兔：用木槌猛击兔头枕部，使其昏迷。剖开腹腔快速取出肠管：立即剖开腹腔，找出胃幽门与十二指肠交界处，快速取长2030cm 的肠管，先将与该肠管相连的肠系膜沿肠缘剪去，置于供氧台氏液中轻轻漂洗，把肠容物根本洗净。制作离体肠标本：将肠管分成数段，每段长2-3cm,两端各系一条线，保存于供氧的38c左右的台氏液中2、仪器安装与调试实验安装如图：恒温水浴

3、锅控制加热，恒温工作点定在38。将充满氧气的道氏袋与通气钩相连接，将肠段一端系在通气管钩上， 另一端与力换能器相连。 控制通气量， 使氧气从通气管前端呈单个而不是成串逸出。仪器调试： BL-410 系统的使用，选择“实验工程中的“消化实验选中“消化道平滑肌生理特性。相关参数设置的参考值：时间常数t-DC,高频滤波F-30Hz,显速-4.00s/div,增益-100g。用鼠标左键单击工具条上的“开场按钮，调节参数至波形幅度、密度适当，待收缩曲线稳定后，单击记录按钮。观察工程现象及解释1 待标本稳定后，记录小肠平滑肌收缩的对照曲线。2乙酰胆碱的作用用滴管吸入0.01%乙酰胆碱向灌流浴槽滴12 滴。

4、观察到明显效应后，立即从排水管放出浴槽含乙酰胆碱的台氏液， 参加新鲜温台氏液， 由此反复 3 次， 以洗涤或稀释残留的乙酰胆碱，使之到达无效浓度，待小肠运动恢复后进展下一项。3肾上腺素的作用按上述方法将0.01%肾上腺素参加浴槽 12 滴，观察小肠运动的反响。当效果明显后，立即更换台氏液。4 .氯化钙的作用加2%CaC12溶液23滴入灌流浴槽，观察其反响，效果明显后迅速冲洗。5 盐酸的作用加12 滴 1mol/L HCl 溶液入浴槽，观察其反响。6 氢氧化钠的作用在(5)根底上加等容量的1mol/L NaOH 溶液入浴槽， 观察其反响。 按上述方法更换台氏液，反复冲洗。7温度的影响将浴槽台氏液

5、放出，注入25台氏液，观察平滑肌收缩有何改变，当效应明显后再换入38台氏液，持续一段时间后，再换入42台氏液，观察收缩活动的变化亦可根据室温的具体情况选做其中的一项 。五、本卷须知1. 实验过程中必须保证标本的供氧(通气 ) 及浴槽台氏液的恒温(38 )，以维持标本活性。2. 灌流浴槽的液面高度应保持恒定。3. 放大器零点调好后不要再移动旋钮，以免影响基线。4. 上述各药液参加的量系参考数据，效果不明显者可以添加。5. 每次实验效果明显后立即放掉含药液的台氏液，并冲洗屡次，以免平滑肌出现不可逆反 响。6各项处理必须有处理标记。六、相关知识家兔小肠平滑肌以胃幽门与十二指肠交界处的肠管活动最好，

6、对生物化学因素也较敏感， 所 以选取用此处肠管作标本。七、实验讨论：1、正常情况下，我们观察到离体小肠平滑肌在台氏液中可以自动地、缓慢地收缩，但其节律性很不规那么。 小肠平滑肌自律性产生的离子根底尚未完全清楚， 目前认为， 它的产生可能与细胞膜上生电性钠泵的活动具有波动性有关， 当钠泵的活动暂时受抑制时， 膜便发生去 极化；当钠泵活动恢复时，膜的极化加强，膜电位便又回到原来的水平。2、在浴槽中参加 0.01%乙酰胆碱Ach2滴约0.2ml后，可见离体肠管活动增强，描记曲线出现收缩频率变快， 幅度增加。 出现上述现象的机理， 目前认为与消化道平滑肌细胞产生动作电位的离子根底是Ca2+ 的流有关。

7、乙酰胆碱可与肌膜上的 M 受体结合，使得两类通道开放：一类为电位敏感性Ca2+专用通道，另一类为特异性受体活化Ca2+专用通道。前一类通道对Ach 敏感，小剂量Ach 即引起开放；后一类通道对Ach 相对不敏感，只有大剂量Ach才会引起开放。这两类通道开放都使得肌浆中Ca2+增高，进而激活肌纤蛋白一肌凝蛋白 ATP 系统，使平滑肌收缩，肌力增加。3、在浴槽中参加0.01%肾上腺素2滴约0.2ml后，可见离体肠管活动减弱，描记曲线出现收缩频率变慢， 幅度减小以及基线下移。 出现上述现象的机理， 目前认为与肠肌细胞膜上存在“和3两中受体，a受体又分为a抑制型受体和a兴奋型受体有关。肾上腺素作用于a

8、抑制型受体，引起肠肌膜上一种特异性受体活化，使K+ 外流增多，细胞膜发生超极化，肠肌兴奋性降低，肌力下降。同时，肾上腺素还作用于3受体，它的激活引起肠肌细胞膜中的CAMP合成增多，CAMP激活肠肌膜及肌浆网上Ca2+泵活动，使肌浆中 Ca2+浓度降低，亦使肌力降低；3受体激活后还促使 K+及Ca2+外流增加，加速膜的超极化，促进了肠肌肌力的减 低。4、在浴槽中参加2%氯化钙溶液2 滴后，离体肠管活动增强，描记曲线出现收缩幅度增加。这是因为参加氯化钙后，细胞外液Ca2+浓度升高，那么 Ca2+流增力口，使得细胞液中Ca2+浓度升高，Ca2+与钙调蛋白结合增加，促进了横桥的激活。因而收缩力增加。5

9、、 在浴槽中参加1mol/L 盐酸溶液 2 滴后， 离体肠管活动减弱， 描记曲线出现收缩幅度降低，频率变慢。出现这一现象，目前认为其原因在于：细胞外H+升高时，Ca2+通道的活性受到抑制，使得 Ca2+流减少。 H+升高能干扰肌肉的代和肌丝滑行的生化过程：H+能与Ca2+竞争钙调蛋白的结合位点而使肌球蛋白ATP酶活性降低近期有理论认为是直接抑制作用而非竞争作用；使肌原纤维对 Ca2+的敏感性和 Ca2+从肌质网的释放量减少。6、在加盐酸使平滑肌收缩减弱的根底上，再加2 滴 NaOH 于浴槽中，那么肠管活动出现相反的情况， 即肠管活动增强。 原因在于 NaOH 可以中和 H+ ， 改变了细胞外液

10、的 PH 值， PH 过高、过低，收缩幅度及力都会降低，最适PH 时收缩效果最好。7、浸浴小肠肠管的台氏液温度以38 40 为宜，低于或高于这个温度，都会影响结果。因为肠管平滑肌对温度改变极为敏感，当温度降到30 以下时，由于代水平的降低，兴奋性减弱，可出现收缩曲线基线下移， 频率变慢，收缩幅度变小。有时可能会见到基线先上移后下降的现象。 这是因为降温本身对肠管是一种刺激， 也可短暂地加强代活动， 所以肌力升高。当温度高于40时，由于酶活性提高，各离子通道活性增加，使得基线上移，收缩频率增高，幅度增加。当然，如果台氏液温度过高50以上，可因蛋白变性，使肠管收缩功能消失。八、结论：1、消化道平滑

11、肌具有自律性，但其收缩缓慢，节律性不规那么。2、消化道平滑肌具有一定的紧性。3、消化道平滑肌的活动易受温度、 PH 值及其它化学因素、药物因素的影响。【根本原理】哺乳动物的胃肠平滑肌具有自动节律性收缩、 伸展性、 紧性和对理化刺激较敏感等生理特性。 这些特性对维持消化管一定压力， 保持胃肠等一定的形态和位置， 适合于消化管容物的理化变化具有生理意义。 在整体受中枢神经系统和体液因素的调节。 本实验观察及记录哺乳动物等离体肠段的一般特性及在一些药物作用下引起的各种效应。实验二、化学因素对心脏活动的影响一、实验目的1. 理解K+ , Ca2+及肾上腺素、乙酰胆碱、阿托品对心脏活动的影响。2. 掌握

12、离体心脏标本的制备方法。3. 记录信号同时打标记的方法。4. 观察环境理化因素的相对恒定对维持心脏正常节律活动的重要作用。二、实验原理1. 心脏的正常节律性活动的维持需要一个适宜的理化环境，如钾、钠、钙浓度比例，适宜的酸碱度和温度。 在体心脏还受植物神经双重支配， 交感神经兴奋时， 其末梢释放去甲肾上腺素， 使心肌收缩力加强， 传导加速， 心率加快； 而迷走神经兴奋时， 其末梢释放乙酰胆碱，使心房肌收缩力减弱，心率和传导减慢。2. 蟾蜍心脏离体后，用理化特性近似于血浆的任氏液灌流，在一定时间，可保持节律性收缩和舒。改变任氏液的组成成分，心脏的活动就会受到影响。三、实验讨论由实验所记录的曲线结果

13、可以看出， 改变蟾蜍离体心脏的灌流液成份， 可影响其心脏的舒缩节律和幅度。1.用任氏液灌流心脏，可以保持较长时间的节律性舒缩活动。这是因为任氏液的主要离子成份、渗透压、 PH 值和蟾蜍 Cell 外液相近，为蛙心提供了一个适宜的理化环境。2、用065%NaCL 溶液灌流心脏，其心跳减弱。心肌的收缩活动是由 Ca+ 触发的，由于心肌细胞的肌浆网不兴旺， 故心肌收缩的强弱与细胞外Ca+ 浓度呈正比。 用 065%NaCL溶液灌蛙心，灌注液中缺乏Ca+ ，以致心肌动作电位2 期流 Ca+ 减少，心肌收缩活动也随之减弱。3. 用高钾任氏液灌注心脏时，心跳明显减弱，甚至出现心脏停到舒状态。因为细胞外K+

14、 浓度增高时，导致 1 、 K+ 与 Ca+ 有竞争性拮抗作用， K+ 可抑制细胞膜对 Ca+ ，的转运，使进入细胞Ca+ ，减少，心肌的兴奋 -收缩耦联过程减弱，心肌收缩力降低； 2动作电位 3 期 K+ 外流增加，平台期缩短，使平台期 Ca+ 流减少，收缩力减弱。当细胞外K+ 浓度显著增高时， 膜外的钾离子浓度梯度减小， 静息电位的绝对值过度减小（膜达55mv 左右时，Na+通道失活），心肌的兴奋性完全丧失，心肌不能兴奋和收缩，停顿于舒状态。长时间用，心脏最终会停顿收缩。4. 用高Ca+任氏液灌流蛙心时，心收缩力增强，舒不完全，以致收缩基线上移。在 Ca+, 浓度高的情况下， 会停顿在收缩

15、状态， 这种现象称之为钙僵。 心肌的舒缩与心肌肌浆网中 Ca+ 浓度上下有关。当钙离子浓度升高到一定水平(10-5M) 时，作为钙受体的肌钙蛋白结合了足够的 Ca+ ，就引起了肌钙蛋白分子构型的改变，从而触发了肌丝滑行，肌纤维收缩。当钙离子浓度降低至10-5M 时，钙离子与肌钙蛋白解离，心肌随之舒，如果钙离子浓度持续升高， 钙离子与肌钙蛋白结数量不断增加， 甚至到达只结合不解离的程度， 致使心肌持续收缩(钙僵)。5. 向蛙心插管中加去甲肾上腺素后，可见蛙心收缩增强，心脏舒完全，描记的心搏曲线幅度明显增大、心跳加快、曲线密度明显变大。其原因是去甲肾上腺素与心肌细胞膜上的3受体相结合，从而激活肌浆

16、网释放的 Ca+ 也增多。同时静脉窦4 期去极化速度加快，故心肌舒缩增强，心跳加快。 6. 在任氏液滴加乳酸，心跳减弱，其原因是H+ 进入心肌膜后，可降低 Ca+ 与肌钙蛋白的亲和力， 促使 Ca+ 的解离。 7. 在上述灌流液中参加与乳酸同当量的 NaOH ，心肌的舒缩逐渐恢复。其原因是NaOH 中和了乳酸，解除了 Ca+ 与肌钙蛋白亲和力的抑制8. 任氏液滴加Ach ， 蛙心收缩减弱， 收缩曲线基线下移， 心率减慢， 最后心跳停顿于舒状态。原因是 Ach 与心肌细胞膜M 受体相结合，一方面提高心肌细胞膜K+ 的通透性，促使K+ 外流，导致 (1) 静脉窦复极时K+ 外流增多，最大复极电位绝

17、对值增大;Ik 衰减过程减弱，自动除极速度减慢。导致静脉窦自得律性降低，心律减慢。 (2) 复极过程中 K+ 外流增加，动作电位 2， 3 期缩短， Ca+ 进入心肌细胞减少，使心肌收缩减弱 ; 另一方面 Ach 可直接抑制Ca+ 通道，减少Ca+ 流，进而使心肌收缩减弱。四、实验结论由此可以看出：蟾蜍离体心脏对细胞外液离子浓度的改变，酸碱， NE ， Ach 敏感。实验三、红细胞渗透脆性测定、影响血液凝固的因素及血型鉴定一 、红细胞渗透脆性的测定一、实验目的1、本实验学习测定红细胞渗透脆性的方法。2、加深对细胞外液渗透力在维持红细胞正常形态与功能重要性方面的理解。3、观察不同因素对红细胞渗透

18、脆性的影响。二、实验原理将红细胞悬浮于等渗NaCI 液中，其形态不变。假设置于低渗NaCI 溶液中那么发生膨胀破裂， 此现象称为红细胞渗透脆性。 但红细胞对低渗盐溶液具有一定抵抗力， 其大小可用 NaCI溶液浓度的上下来表示。将血液滴入不同浓度的低渗NaCI 溶液中，开场出现溶血现象的NaCI 溶液浓度为该血液红细胞的最小抵抗力 正常为 0.42-0.46%NaCI 溶液 。 出现完全溶血现象时的 NaCI 溶液浓度为该红细胞的最大抵抗力正常为 0.28-0.32%NaCI 溶液 。前者代表红细胞的最大脆性 最小抵抗力 ，后者代表红细胞最小脆性 最大抵抗力 。生理学上将能使悬浮于其中的药细胞保

19、持正常形态的溶液称为等溶液， 不能跨过细胞膜的微粒所形成的力，但等渗溶液并不一定是等溶液如1.9%的尿素溶液。三、材料与方法1. 实验对象：家兔2. 器械药品： 试管架、 小试管 45 支、 载玻片、 盖玻片注射器、 8 号注射针头、 棉签， 1%NaCI溶液、0.85%氯化钠溶液、蒸馏水，1.9%尿素溶液、地塞米松、皂甙。3. 方法与步骤：配制不同浓度的低渗NaCI 溶液取口径一样的干洁小试管36 支，分别编号排列在三个试管架上，按下表分别向各试管参加1%NaCI 溶液和蒸馏水混匀，配制从0.68-0.24%12种不同浓度的 NaCI 低渗溶液，每管总量均为 2.5ml。试剂试管编号1 2

20、3 4 5 6 7 8 9 10 11 121%NaCl(ml) 1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6蒸溜水 ml 0.8 0.9 1.0 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 1.8 1.9NaCl 浓度 % 0.68 0.64 0.60 0.56 0.52 0.48 0.44 0.40 0.36 0.32 0.28 0.24四、实验结果皂甙 ml 另取 9 支小试管，在三个试管架中分别编号13-15，分别参加0.85%NaCI 溶液、 1.9%尿素和蒸溜水 2.5ml。采集标本家兔麻醉后， 仰卧固定于兔手术台上，

21、别离一侧颈总动脉或股动脉插管备放血用 具体方法参见第章 。依次向 15支试管各加1 滴，轻轻颠倒混均，切忌用力振荡。先观察13、14、 15 管的变化，其他12 管在室温下放置 1 小时。五、观察指标血液溶血情况，其现象可分为以下几种：1、试管液体完全变成透明红色，说明红细胞完全破裂，称为完全溶血。2、试管液体下层为混浊红色，上层无色透明，表示局部红细胞没有破坏，称为不完全深血。3、试管液体下层为混浊红色，上层无色透明，说明红细胞完全没有破坏。六、观察工程1、观察不同浓度低渗NaCI 混合液的颜色和透明度。2、比较第一个试管架第13、 14、 15管的溶血情况及第二、第三个试管架中与第一个试管

22、架中对应试管的溶血情况并分析其原因。七、本卷须知1、每支试管血液滴入量应准确无误只加一滴 。2、确保每支试管NaCI 溶液的浓度、容量一致。3、小试管必须清洁、枯燥。4、观察结果时应以白色为背景。八、实验讨论1. 本实验结果显示升高温度血液凝固过程加快，而当试管浸入冰水中时，血液凝固过程减慢， 这说明血液凝固的过程受温度的影响。 血液凝固过程是一种发生在血浆中由许多因素参与的复杂的生物化学连锁反响过程， 而温度可以影响生化反响过程， 在一定围， 随着温度的增加，生化反响的速度加快，血液凝固需要的时间就缩短。反之，亦然。2. 实验中发现，试管中参加棉花后血液凝固所需的时间缩短，而用石蜡油润滑试管

23、外表后血液凝固所需的时间延长。 接触面的粗糙程度影响血小板的粘附、 聚集。 激活的血小板为凝血因子提供磷脂外表，参与外源性凝血途径因子X 和凝血酶原的激活；血小板外表结合有许多凝血因子，可加速凝血过程，血小板激活释放的容物，可增加纤维蛋白的形成。 3. 实验中发现，试管中参加肝素后血液不凝固。肝素1增强抗凝血酶III 的活性， 2可刺激血管皮细胞大量释放TFPI 和其它抗凝血物质； 3肝素还可增强纤溶。二 、影响血液凝固的因素一、实验目的本实验以发生血液凝固的时间为指标， 向血液中参加或去掉某些因素或改变某些条件 如温度等 ，以观察对血液凝固的影响。二、实验原理血液流出血管后很快就会凝固。 血

24、液凝固分为源性凝血系统与外源性凝血系统是指在组织因子的参与下血液凝固的过程。 本实验直接从动物动脉放血， 由于血液几乎没有和组织因子接触， 其凝血过程主要由源性凝血系统所发动。 血液凝固受许多因素的影响， 凝血因子可直接影响血液凝固过程。温度、接触面的光滑程度等也可影响血液凝固过程。三、材料与方法1 .实验对象：家兔2 .器材药品：小烧杯、带橡皮刷的玻棒或竹签或小号试管刷、清洁试管10 支、秒表、水浴装置一套、冰块、棉花、石蜡油、肝素或草酸钾、生理盐水。3 .方法与步骤：动物准备家兔麻醉后，仰卧固定于兔手术台上，行一侧颈总动脉或股动脉插管，备取血用。试管的准备取8支干净的小试管，按表7-2 准

25、备各种不同的实验条件。三 、影响血液凝固的因素一、实验工程不加其它物质放棉花少许用石蜡油润滑试管外表保温于37?C水浴糟中冰水中加肝素 8 单位加草酸钾1-2mg肺组织浸液1ml二、观察指标：凝血时间三、观察工程1、取兔动脉血10ml ，注入两个小烧杯，一杯静置，另一杯用带有橡皮刷的玻棒或竹签也可用小号试管刷轻轻搅拌，数分钟后，玻棒或竹签上结成红色血团。用水冲洗，观察纤维蛋白形状。然后比较两杯的凝血情况。2、准备好的每支试管中滴入兔血1ml ，观察血液是否发生凝固及发生凝固的时间。四、本卷须知1、加强分工合作，记时须及时、准确。最好由一位同学负责将血液参加试管，其它同学各掌握 1-2 支试管，

26、每隔半分钟观察一次。2、试管、注射器及小烧杯必须清洁、枯燥。3、每支试管参加的血液量要力求一致。五、实验讨论1. 本实验结果显示红细胞悬浮在0.85%0.44%的 Nacl 溶液中无溶血现象； 在0.42%的溶液中刚发生溶血；在0.35%的溶液中完全溶血。这说明： 1 、红细胞在等渗氯化钠即生理盐水中不溶血； 2 、处于一定围的低渗氯化钠溶液中也不溶血； 3 、处于过度低渗的氯化钠溶液中才开场溶血， 而且溶液浓度越低， 破裂溶血的红细胞逐渐增多， 直至悬浮其中的红细胞全部破裂溶血。 理论上， 悬浮于等渗氯化钠溶液中红细胞必将保持其正常形态， 悬浮于低渗氯化钠溶液中红细胞必将发生膨胀，当渗透浓度

27、低于一定临界值时红细胞将发生破裂溶血。引起红细胞破裂溶血的氯化钠溶液浓度不尽一样，这取决于不同红细胞对低渗溶液的抵抗力， 生理学上将红细胞的这种抵抗力称为渗透脆性。 此种抵抗力的大小与红细胞的厚度有关。厚度越大， 红细胞膜面积与体积的比值越小， 引起溶血的氯化钠溶液的浓度越高， 即抵抗力越小，那么渗透脆性越大；反之，引起溶血的氯化钠溶液的浓度越低，即抵抗力越大，那么渗透脆性越小。 引起红细胞破裂的最大浓度为其最小抵抗力或最大渗透脆性； 刚能引起红细胞完全破裂溶血的氯化钠溶液浓度为其最大抵抗力或最小渗透脆性。2. 另外，1.9%的尿素溶液和0.85%的 Nacl 溶液虽均为等渗溶液，但尿素溶液中的红细胞却完全溶血。 原因在于尿素能自由通过细胞膜， 而氯化钠那么不能。 生理学上将能悬浮于其中的红细胞保持正常形态的等渗溶液称为等溶液。 如 0.85%的 Nacl 溶液， 溶质颗粒不能自由通过细胞膜， 且渗透压也与红细胞相等，为等渗等溶液， 故红细胞可保持其正常形态而不发生溶血。1.9%的尿素是等渗而不是等溶液，尿素进入红细胞引起红细胞膨胀破裂而溶血。六、实验结论1. 可用引起红细胞破裂溶血的低渗NaCl 溶液的浓度代表红细胞渗透脆性的大小；2. 红细胞悬浮于等渗和等溶液中才能保持其正常形态。