细胞生物学3细胞生物学研究方法学习教案

会计学1第一页，共64页。2第1页/共64页第二页，共64页。3第2页/共64页第三页，共64页。4第3页/共64页第四页，共64页。5第4页/共64页第五页，共64页。6第5页/共64页第六页，共64页。7第6页/共64页第七页，共64页。8Caenorhabditis elegansDrosophila melanogasterArabidopsis thalianaC. elegansZebrafish第7页/共64页第八页，共64页。9第8页/共64页第九页，共64页。10第9页/共64页第十页，共64页。11肽聚合物等结合，因而在基础肽聚合物等结合，因而在基础研究和临床试验中成为非常有研究和临床试验中成为非常有用的工具。用的工具。第10页/共64页第十一页，共64页。12第11页/共64页第十二页，共64页。13细胞培细胞培养养第12页/共64页第十三页，共64页。14人的细胞培养人的细胞培养 第13页/共64页第十四页，共64页。15细胞系细胞系: : 原代培养物经首次传代成功后即为细胞系，有无原代培养物经首次传代成功后即为细胞系，有无限的传代能力。限的传代能力。细胞株细胞株: : 通过原代培养或经过细胞克隆与选择而建立的、通过原代培养或经过细胞克隆与选择而建立的、具有特异具有特异(ty)(ty)的性质或标记的细胞系，但是它们具有的性质或标记的细胞系，但是它们具有有限的传代能力。有限的传代能力。原代培养：是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即原代培养：是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。因此，较为严格地说是指成功传代之前的培养进行培养。因此，较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本，此时的细胞保持原有细胞的基本(jbn)(jbn)性质性质 第14页/共64页第十五页，共64页。16植物植物(zhw)(zhw)组织培养组织培养 第15页/共64页第十六页，共64页。17植物植物(zhw)(zhw)原生质体培养原生质体培养 第16页/共64页第十七页，共64页。18植物植物(zhw)(zhw)组织培养组织培养 外植体外植体愈伤组织愈伤组织(zzh)(zzh)新植株新植株(zhzh)(zhzh)第17页/共64页第十八页，共64页。19第18页/共64页第十九页，共64页。20第19页/共64页第二十页，共64页。21第20页/共64页第二十一页，共64页。22Fluorescence Activated Cell Sorting488 nm laser+-Charged PlatesSingle cells sortedinto test tubesFALS SensorFluorescence detector第21页/共64页第二十二页，共64页。23第22页/共64页第二十三页，共64页。24第23页/共64页第二十四页，共64页。25第24页/共64页第二十五页，共64页。26第25页/共64页第二十六页，共64页。27第26页/共64页第二十七页，共64页。28科研型第27页/共64页第二十八页，共64页。29细胞(xbo)结构特异性抗原（细胞表面/胞浆/核）细胞内细胞因子细胞活性酶活性激素结合位点细胞受体细胞功能第28页/共64页第二十九页，共64页。30光学系统光学系统 激光光源激光光源 光收集系统光收集系统液流系统液流系统 流动室流动室 液流驱动系统液流驱动系统电子系统电子系统 光电转换光电转换 数据处理系统数据处理系统细胞分选系统细胞分选系统第29页/共64页第三十页，共64页。31器、染色体转移、细胞器移植、器、染色体转移、细胞器移植、基因转移、细胞及组织培养。基因转移、细胞及组织培养。细胞工程细胞工程第30页/共64页第三十一页，共64页。32在自发或人工诱导下，两在自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种生质体融合形成一个杂种细胞。基本过程包括细胞细胞。基本过程包括细胞融合形成异核体融合形成异核体(heterokaryon)、异核体通、异核体通过细胞有丝分裂进行过细胞有丝分裂进行(jnxng)核融合、最终形核融合、最终形成单核的杂种细胞。成单核的杂种细胞。 细胞融合细胞融合 第31页/共64页第三十二页，共64页。33聚乙二醇（聚乙二醇（PEG）法细胞融合过程）法细胞融合过程(guchng)第32页/共64页第三十三页，共64页。34显微镜下细胞融合过程显微镜下细胞融合过程(guchng)第33页/共64页第三十四页，共64页。35第34页/共64页第三十五页，共64页。36第35页/共64页第三十六页，共64页。37第36页/共64页第三十七页，共64页。38外周血血细胞扫描电镜标本外周血血细胞扫描电镜标本(biobn)的制备的制备取血取血-PBS洗三次洗三次-滴片滴片(有有Formvar膜膜)-冷的冷的1%戊二醛戊二醛4度固定度固定2小时小时-PBS-1%四氧化锇，四氧化锇，30分分-PBS-50、70、90%丙酮各一次，丙酮各一次，100%两次两次-50、70、90%醋酸醋酸(c sun)异戊酯丙酮溶液各一次，异戊酯丙酮溶液各一次，100%醋酸醋酸(c sun)异戊酯两次异戊酯两次-临界点干燥临界点干燥-喷碳、喷碳、金金观察观察第37页/共64页第三十八页，共64页。39人类人类(rnli)血细胞血细胞SEM照片照片 第38页/共64页第三十九页，共64页。40第39页/共64页第四十页，共64页。41第40页/共64页第四十一页，共64页。42第41页/共64页第四十二页，共64页。43随着病毒在宿主体内不断扩散，你就可以通过跟踪发出的绿光来观随着病毒在宿主体内不断扩散，你就可以通过跟踪发出的绿光来观察察(gunch)(gunch)病毒的扩散途径，或者你把它接合到一种蛋白质上并病毒的扩散途径，或者你把它接合到一种蛋白质上并通过显微镜观察通过显微镜观察(gunch)(gunch)它在细胞内部的移动它在细胞内部的移动第42页/共64页第四十三页，共64页。44科学使用绿色荧光蛋白跟踪科学使用绿色荧光蛋白跟踪(gnzng)(gnzng)大脑大脑神经细胞的发育过程。神经细胞的发育过程。第43页/共64页第四十四页，共64页。45第44页/共64页第四十五页，共64页。46第45页/共64页第四十六页，共64页。47第46页/共64页第四十七页，共64页。48第47页/共64页第四十八页，共64页。49真正成为了一真正成为了一个琳琅满目的个琳琅满目的工具箱，供生工具箱，供生物学家们选用。物学家们选用。第48页/共64页第四十九页，共64页。50水晶水晶(shujng)水母水母 第49页/共64页第五十页，共64页。51会发光会发光(f un)的老鼠的老鼠 第50页/共64页第五十一页，共64页。52脑内连接脑内连接(linji) 第51页/共64页第五十二页，共64页。53这两只荧光猪诞生于中国黑龙江省哈尔滨东北农业大学的实验室。它这两只荧光猪诞生于中国黑龙江省哈尔滨东北农业大学的实验室。它们们(t men)的发光本领并不是转基因技术的直接产物，而是从其经过的发光本领并不是转基因技术的直接产物，而是从其经过基因改造的母亲那里遗传而来。基因改造的母亲那里遗传而来。两只荧光(ynggung)猪 第52页/共64页第五十三页，共64页。54左侧的猫由韩国研究人员左侧的猫由韩国研究人员2007年晚些时候打造，能够在紫外线下年晚些时候打造，能够在紫外线下发出红光。某些情况下，这些荧光蛋白基因可用作一种分子开关发出红光。某些情况下，这些荧光蛋白基因可用作一种分子开关，触发其它细胞，触发其它细胞(xbo)活动活动 第53页/共64页第五十四页，共64页。55第54页/共64页第五十五页，共64页。56第55页/共64页第五十六页，共64页。57第56页/共64页第五十七页，共64页。58第57页/共64页第五十八页，共64页。59细胞结构、蛋白质（如受体、抗原、抗体、酶、细胞细胞结构、蛋白质（如受体、抗原、抗体、酶、细胞骨架蛋白等基因表达产物）、骨架蛋白等基因表达产物）、DNA、RNA等等细胞膜流动性（荧光光漂白恢复细胞膜流动性（荧光光漂白恢复(huf)技术）技术）细胞内氧自由基活性细胞内氧自由基活性细胞内钙离子浓度变化细胞内钙离子浓度变化膜电位膜电位共聚焦扫描共聚焦扫描(somio)显微镜在生命科学研究中的应用显微镜在生命科学研究中的应用第58页/共64页第五十九页，共64页。60ConventionalConfocal第59页/共64页第六十页，共64页。61第60页/共64页第六十一页，共64页。62GFP tagging: Arabidopsis leavesSEMConfocal:talin-GFP第61页/共64页第六十二页，共64页。63第62页/共64页第六十三页，共64页。64第63页/共64页第六十四页，共64页。