《辣椒种子甲基磺酸乙酯化学诱变技术规程》标准文本（征求意见稿）

ICSXX.XXX.XX中国标准文献分类号:XXXDB52贵州省地方标准DB 52/ T XXXXX2019辣椒种子甲基磺酸乙酯化学诱变技术规程Technical regulation for chemical mutagenesis by Ethyl Methane Sulfonate on pepper seed XXXX - XX - XX发布XXXX - XX - XX实施贵州省市场监督管理局发布DBXX/ XXXXXXXXX目 次目 次1前言11 范围32 规范性引用文件33 术语与定义34仪器设备45 EMS处理液的配制46 EMS诱变处理辣椒种子47 EMS诱变处理后辣椒种子半致死剂量的确定48 EMS诱变后代的种植、筛选与鉴定59 EMS诱变后代的田间管理5前言本标准按照GB/T 1.1-2009标准化工作导则 第1部分:标准的结构和编写给出的规则起草。本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由贵州省辣椒研究所提出。 本标准由贵州省农业农村厅归口。本标准起草单位：贵州省辣椒研究所。本标准主要起草人：黄冬福、何建文、付文婷、詹永发、范高领、梁郸娜、严希、吴迪。辣椒种子甲基磺酸乙酯化学诱变技术规程1 范围本规程规定了甲基磺酸乙酯（EMS）化学诱变的仪器设备、EMS处理液的配制、EMS诱变处理辣椒种子、EMS诱变处理后辣椒种子半致死剂量的确定、EMS诱变后代的种植、筛选与鉴定。本规程适用于采用EMS对辣椒种子进行化学诱变创新辣椒材料。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/Z 26583-2011辣椒生产技术规范DB52/T 957-2014贵州辣椒栽培技术规程DB52/T 958-2014贵州辣椒施肥技术规程DB52/T 962-2014辣椒漂浮育苗技术规程DB52/T 971-2014辣椒主要病害综合防治技术规程DB52/T 972-2014辣椒主要虫害综合防治技术规程DB52/T 973-2014辣椒疫病监测与无害化治理技术规程DB52/T 974-2014辣椒烟青虫监测与无害化治理技术规程3 术语与定义下列术语和定义适用于本文件。3.1 EMS化学诱变用化学诱变剂EMS处理植物材料，以诱发遗传物质的突变，从而引起植株形态特征的变异。3.2半致死剂量植物材料经过诱变处理后，相对发芽率接近50%的处理剂量。3.3野生型野生型和突变是相对的，非人工诱变的个体作为野生型。3.4 M1代诱变后第一代。3.5 M2代诱变后第二代。3.6 M3代诱变后第三代。3.7 M4代诱变后第四代。3.8突变体库由于基因突变而表现出突变性状的个体，突变体库则由各类突变体组成。4仪器设备分析天平、纯水仪、磁力搅拌器、冰箱、移液枪、通风橱、恒温摇床、人工气候箱、单反相机。5 EMS处理液的配制5.1磷酸缓冲液的配制称取Na2HPO4.2H2O （分析纯）35.61g，用蒸馏水溶解至1000mL，配成浓度为0.2mol/L的Na2HPO4母液。称取NaH2PO4.H2O （分析纯）27.6g，用蒸馏水溶解至1000mL，配成浓度为0.2mol/L的NaH2PO4母液。将0.2mol/L的Na2HPO4母液61ml与0.2mol/L的NaH2PO4母液39ml混合稀释至200mL，即成pH7.0,浓度为0.1mol/L的磷酸缓冲液。5.2 EMS处理液的配制将0，6，7，8，9，10，11，12mL的EMS加至规程6.1所诉的磷酸缓冲液中，用蒸馏水定容至1L，配成体积比浓度分别为0，0.6%，0.7%，0.8%，0.9%，1.0%，1.1%，1.2%的EMS处理液。6 EMS诱变处理辣椒种子6.1 辣椒种子的温汤浸种选取饱满的辣椒干种子，每100粒为1份，分别装入15*10cm的尼龙网袋，放入55温水中不断搅拌，浸种15min。6.2 EMS诱变处理辣椒种子用滤纸吸干温汤浸种后每份种子的表面水分，将其放入250mL的锥形瓶中，向锥形瓶中注入规程6.2所诉的EMS处理液，保持1粒种子1mL的EMS处理液，分别放置在26，110rpm的摇床内恒温振荡处理8h，10h，12h，14h，16h，每个处理100粒种子，3次重复，然后取出种子，用纯水漂洗5遍。7 EMS诱变处理后辣椒种子半致死剂量的确定将处理后的辣椒种子置于铺有润湿的2层滤纸的培养皿中，置于人工气候箱内26暗培养，定期向培养皿中补加水，保持滤纸湿润，以胚根的长度不短于种子长度的一半为发芽标准，每天记载发芽种子数，并计算14天时的发芽率和相对发芽率，将相对发芽率接近50%的处理剂量确定为最适宜的诱变剂量，即半致死剂量。发芽率()(全部正常发芽数/供试种子数)100；相对发芽率()=（处理的发芽率/对照的发芽率）100；8 EMS诱变后代的种植、筛选与鉴定8.1 M1代的种植用确定的半致死剂量，对辣椒种子进行EMS诱变处理；诱变处理后的种子播于1016孔含育苗基质的漂浮盘中进行漂浮育苗；待辣椒苗长到适龄大小按每亩2000-2500株进行移栽；辣椒开花前覆盖40目防虫网；植株生长期间以野生型为对照对M1代出现的突变植株表型进行观察、记录、拍照，待M1代植株果实红熟后按单株统一编号，进行种子采收和干燥保存。8.2 M2代的筛选将收获的M1代种子按株系播种定植，每个株系定植12株，剩余的种子入库保存备用；M2代进行播种育苗移栽；在植株生长的各个时期以野生型为对照，筛选出性状发生变异的单株，挂牌标记，单株自交留种，按单株收种并编号。8.3 M3代的筛选与鉴定将收获的M2代种子按株系播种定植，每个株系定植12株，剩余的种子入库保存备用；M3代进行播种育苗移栽；在植株生长的各个时期根据M2代变异株的特点鉴定稳定遗传的M3代植株，对能稳定遗传的M3代植株挂牌标记，单株自交留种，按单株收种并编号。8.4 M4代的鉴定将收获的M3代种子按株系播种定植，每个株系定植12株，剩余的种子入库保存备用；M4代进行播种育苗移栽；在植株生长的各个时期根据M2、M3代变异株的特点鉴定稳定遗传的M4代株系，对能稳定遗传的M4代株系挂牌标记，株系内混合收种并编号。所有能稳定遗传的M4代株系构成突变体库。9 EMS诱变后代的田间管理9.1 田间管理 应符合GB/Z 26583、DB52/T 957的相关规定。9.2 育苗 应符合DB52/T 962的相关规定。9.3 施肥应符合DB52/T 958的相关规定。9.4病害应符合DB52/T 971、DB52/T 973的相关规定。9.5虫害应该符合DB52/T 972、DB52/T 974的相关规定。 6