实验三叶绿体色素的提取、分离和性质分析

二、实验原理二、实验原理2.类胡萝卜素类胡萝卜素（一）叶绿体色素：（一）叶绿体色素：1.叶绿素叶绿素（三）叶绿素的光学性质（三）叶绿素的光学性质n 叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，表现出一定叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，表现出一定的吸收光谱，可用分光光度计精确测定。的吸收光谱，可用分光光度计精确测定。三、实验材料与试剂三、实验材料与试剂n新鲜的菠菜叶片。新鲜的菠菜叶片。n95%乙醇乙醇 、CaCO3、醋酸铜结晶、浓、醋酸铜结晶、浓盐酸、汽油。盐酸、汽油。n量筒，滤纸，大培养皿一只，小培养皿量筒，滤纸，大培养皿一只，小培养皿一只，长滴管，剪刀。一只，长滴管，剪刀。 四、实验步骤四、实验步骤1、 叶绿体色素提取：叶绿体色素提取： 将菠菜叶片将菠菜叶片擦净擦净，去中脉后取，去中脉后取 10g剪碎，加少许碳酸钙和石英砂，剪碎，加少许碳酸钙和石英砂，再再分次分次加入加入10mL酒精酒精研磨，过滤，定容至研磨，过滤，定容至50ml，分装于，分装于5个试管内，个试管内，容量分别为容量分别为10ml。234513、叶绿体色素吸收光谱曲线、叶绿体色素吸收光谱曲线n取取1ml提取液于比色杯中（提取液于比色杯中（试管试管2），加），加3ml95%乙醇。乙醇。n用用95%乙醇作为对照，在乙醇作为对照，在400700nm之间每隔之间每隔20nm测一次测一次光。光。n记录波长和吸光度记录波长和吸光度A于下表中，并在标准绘图纸上绘出叶绿体色于下表中，并在标准绘图纸上绘出叶绿体色素的吸收光谱曲线。素的吸收光谱曲线。 （nm）400420440460480500. 600620640660680700A4、叶绿体色素含量的计算、叶绿体色素含量的计算n在标准曲线上查出波长在标准曲线上查出波长600nm时的叶绿时的叶绿体色素浓度。体色素浓度。n叶绿体色素含量（叶绿体色素含量（mgg-1）=样品鲜重（样品鲜重（g）叶绿体色素浓度（叶绿体色素浓度（mgL-1）提取液体积（提取液体积（mL）10-3 5、叶绿素提取液荧光现象观察、叶绿素提取液荧光现象观察取试管取试管3：从与入射光垂直的方向观从与入射光垂直的方向观察；察；再在透射光方向观察叶绿再在透射光方向观察叶绿体色素溶液的颜色；体色素溶液的颜色；记录叶绿素体色素溶液颜记录叶绿素体色素溶液颜色有何不同色有何不同 ，分析原因。，分析原因。6、光对叶绿素的破坏作用、光对叶绿素的破坏作用n将试管将试管4置于暗处，试管置于暗处，试管3置于强光置于强光下，照射下，照射23小时后，观察试管颜小时后，观察试管颜色的变化，解释这种现象。色的变化，解释这种现象。7、铜代叶绿素反应、铜代叶绿素反应n向试管向试管5中中逐滴逐滴加入浓盐酸，并不断摇匀，至颜色变化，加入浓盐酸，并不断摇匀，至颜色变化，观察并记录现象；观察并记录现象；n向变色后的叶绿素溶液中加入向变色后的叶绿素溶液中加入少量少量醋酸铜，并在酒精醋酸铜，并在酒精灯上缓缓加热，观察并记录颜色的变化。灯上缓缓加热，观察并记录颜色的变化。n分析原因。分析原因。