DBS43 005-2013 水产品中氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星残留量测定 高效液相色谱法

湖 南 省 食 品 安 全 地 方 标 准 3/005 2013 水产品中 氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星 残留 量 测定 高效液相色谱法 2013布 2013施 湖南省 卫生厅 发布 3/ 005 2013 I 前言 本标准 首次发布。3/ 005 2013 1 水产品 中 氧氟沙星、诺氟沙星 、环丙沙星和 恩诺沙星 残留 量 测定 高效 液相色谱法 1 范围 本标准规定了 新鲜及冷冻 水产品 中 氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星和 恩诺沙星 残留 量 的 高效 液相色谱测定方法。 本标准适用于 新鲜及冷冻 水产品 可食部分 氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星 残留 量 的 测定 。 2 规范性引用文件 下列文件 对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的 引用文件，其最新版本 （包括所有的修改单） 适用于本 文件 。 3 方法提要 采用 酸性 水 溶液 提取 试样中 待测物 ， 经 固相萃取 柱净化 ， 用 带荧光检测器的高效液相色谱仪 测定 ，外 标法定量。 4 试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯， 实验用 水为 符合 6682规定的 一 级水 。 腈 :色谱 纯 。 醇 :色谱 纯 。 酸：优级纯 。 四丁基溴化铵。 7 四丁基溴化 铵 （ 称取 ，溶解 于 1 用 适量 磷酸调 。 5%甲醇水溶液： 取 水稀释到 100 流动相：乙腈 +四丁基溴化 铵 溶液（ 7 , = 6+94 (V+V)。 标准 物质： 氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星 ， 纯度 均 高 于 标准储备液 ： 分别 称取 确到 氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星 标准 物质 ， 用 乙腈 溶解， 定容 至 100 配制成浓度为 100 的标准储备溶液。 4 冰箱中 冷藏 避光保存 ，保存期 不超过 3个月 。 混合标准中间液：准确移取适量各标准储备液， 用乙腈稀释，配制成浓度为 1 的混 合标准中间液。 4 冰箱中 冷藏 避光 保存 ，保存期 不超过 一周 。 标准 工作 溶 液 ：准确移取适量 的 混合标准中间液 ， 用流动相 稀释 ,配制 成 2 µg/L、 5 µg/L、 25 µg/L、50 µg/L、 500 µg/准 工作 溶 液 。 临用前配制。 微孔滤膜： m ，有机相型。 ： 60 或者 性能 相当者 。 注： 出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不涉及商业目的。鼓励标准使用者尝试不同 厂家或型号的固相萃取小柱。 5 仪器和设备 005 2013 2 效液相色谱仪 ，带荧光检测器 。 析天平 ： 感量 g。 涡混匀器。 心机 : 5 000 r/ 水浴超声器 。 氮吹仪。 离心管： 50 玻璃试管： 5 固相萃取装置 。 6 分析 测定 品制备 冷冻样品在进行制备前，需拿出在常温下回温散冻。然后按照以下处理方法进行样品制备。 所有样品只取可食部分。 鱼：去鳞、去皮，沿脊背取肌肉；虾 、蟹类 ：去头、去壳、去肠线，取肌肉部分。样品切成不大于0.5 0.5 置于研磨机中研磨均匀 。 在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。制备好的样品置于 保存。 提取 准确称取 样品 (5±g,置于 50 中 , 加入 8.0 溶液 (7 , 涡旋混合 1 超声提取 20 再以 5 000 r/0 集全部 上清液 于另一只干净的离心管中。将残渣重复上述步骤提取一次 。合并上清液 ， 用四丁基溴化铵溶液 (7 , 以 5 000 r/0 上清液待用 。 化 固相萃取柱 依次用 3 3 溶液 （ 7 , 活化 后 ， 准确移取上述上清液 2.0 再 依次用 3 溶液 （ 7 , 2 醇水淋洗 ，抽干 。最后用 3集洗脱液于 小 玻璃试管中， 45 下氮气 吹干。用 1.0 涡旋混匀 后 ,经 微孔滤膜过滤后 作为试样溶液 ，供高效液相色谱分析。 高效液相色谱 测定 参考 色谱条件 色谱柱： 3柱 (150× 4.6 粒径 5m) ，或 其它等效柱 。 流动相： 乙腈 +四丁基溴化 铵 溶液（ 7 , = 6+94（ v+v）。 流速： 1 mL/ 进样量： 20 µL。 柱温： 40 。 检测波长： 氧氟沙星 83 490 其余 ： 80 450 定 取适量 样品 溶液和标准 工作溶液 或空白样品添加标准工作溶液 ， 按 标准工作溶液或空白样品添加标准工作溶液 作单点或者多点校准 ， 并用 色谱图峰面积积分值定量 ，外标法测定 。 样品溶液和标准工作溶液中各化合物的响应值应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱条件下， 标准工作溶液中各化合物的 液相色谱图 参 见附录 空白样品添加标准物的液相色谱 图 参见附录 3/ 005 2013 3 白试验 除不加 样品 外， 均按照测定步骤 进行 平行实验 。 7 结果计算 和表述 样品 中 氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星 或 恩诺沙星 的含量由色谱数据处理软件或按下式计算获得： 1 V 样品中 氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星或恩诺沙星 的含量 （ µg/ A 样品 中 相应药物 的峰面积； 标准工作 溶 液中 相应药物 的峰面积； 标准工作 溶 液中 相应药物 的浓度（ ng/ 提取样品所用提取液的总体积（ 固相萃取净化上样的体积（ 过柱后定容所用流动相 体积（ m 供试样品 的 质量 （ g） 。 测定结果用两次平 行测定的算术平均值 表示 ，保留三位有效数字。 8 方法线性范围、灵敏度、准确度和精密度 线性范围 各化合物混合 标准工作 溶 液 的 线性范围为 2 µg/L500 µg/L。 灵敏度 本方法各化合物 的定量 下 限 均为 4 µg/ 准确度 本方法在 4 µg/10 µg/100 µg/1000 µg/ 个 添加浓度的回收率 如下 ： 诺氟沙星 环丙沙星 恩诺沙星 重复性 本方法 的相对标准偏差 15%。 005 2013 4 附录 A (资料性附录 ) 高效液相 色谱图 0 02 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 1 4 0 分钟0 2 4 6 8 1 0 1 2 图 准溶液液相色谱图 0 02 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0 分钟0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2 图 白 样品中添加标准物质液相色谱图 注 : 以上图谱中， 氟沙星、 氟沙星、 丙沙星 、 诺沙星 。