平板菌落计数法

实 验 八 平 板 菌 落 计 数 法 一 、 目 的 要 求 学 习 平 板 菌 落 计 数 的 基 本 原 理 和 方 法 。 二 、 基 本 原 理 平 板 菌 落 计 数 法 是 根 据 微 生 物 在 固 体 培 养 基上 所 形 成 的 一 个 菌 落 是 由 一 个 单 细 胞 繁 殖 而 成的 现 象 进 行 的 ， 也 就 是 说 一 个 菌 落 即 代 表 一 个单 细 胞 。 计 数 时 ， 先 将 待 测 样 品 作 一 系 列 稀 释 ，再 取 一 定 量 的 稀 释 菌 液 接 种 到 培 养 皿 中 ， 使 其均 匀 分 布 于 平 皿 中 的 培 养 基 内 ， 经 培 养 后 ， 由单 个 细 胞 生 长 繁 殖 形 成 菌 落 ， 统 计 菌 落 数 目 ，即 可 换 算 出 样 品 中 的 含 菌 数 。 三 、 器 材酵 母 菌 悬 液 ，牛 肉 膏 蛋 白 胨 培 养 基 ， 1mL无 菌 吸 管无 菌 平 皿盛 有 9 mL无 菌 水 的 试 管 四 、 操 作 步 骤1 编 号 ：取 无 菌 平 皿 8套 ， 在 皿 底 分 别 标 记 10-5、 10-6 、 10-7、 10 -8各 2套 。 （ 不 得 开 盖 ， ）取 1只 装 有 99mL无 菌 水 的 三 角 瓶 1只 ， 标 明 10-2。另 取 6支 盛 有 9mL无 菌 水 的 试 管 ， 排 列 于 试 管 架 上 ， 依 次标 记 10-3、 10-4、 10-5、 10-6、 10-7、 10-8。 2 稀 释 用 1ml无 菌 吸 管 精 确 地 吸 取 1mL原 菌 悬 液 放 入 10-2的 三角 瓶 中 ， 注 意 吸 管 尖 端 不 要 碰 到 液 面 ， 以 免 吹 出 时 ， 容器 内 液 体 外 溢 。 然 后 仍 用 此 吸 管 将 瓶 内 悬 液 来 回 吸 吹 三次 ， 吸 时 伸 入 管 底 ， 吹 时 离 开 水 面 ， 使 其 混 合 均 匀 。 另取 一 支 吸 管 自 10-2三 角 瓶 中 吸 1mL放 入 10-3试 管 中 ， 吸 吹三 次 ， 其 余 依 次 类 推 。 整 个 稀 释 过 程 如 图 。 3 取 样 用 4支 1mL无 菌 吸 管 分 别 精 确 地 吸 取 10-5、 10-6、 10-7、10-8的 稀 释 菌 液 1ml， 对 号 放 入 编 好 号 的 无 菌 培 养 皿 中 。 4 倒 平 板 于 上 述 盛 有 不 同 稀 释 度 菌 液 的 培 养 皿 中 ， 倒 入 溶化 后 冷 却 至 45 左 右 的 肉 膏 蛋 白 胨 琼 脂 培 养 基 约1015mL， 置 水 平 位 置 ， 迅 速 旋 动 混 匀 ， 待 凝 固 后 ，倒 置 于 37 温 室 中 培 养 。 5 计 数 培 养 24小 时 后 ， 取 出 培 养 皿 ， 算 出 同 一 稀 释 度两 个 平 皿 上 的 菌 落 平 均 数 ， 并 按 下 列 公 式 进 行 计算 ： 每 毫 升 中 总 活 菌 数 =同 一 稀 释 度 两 次 重 复 的 菌 落平 均 数 稀 释 倍 数 四 实 验 结 果n 填 表 一 般 选 择 每 个 平 板 上 长 有 30300个 菌 落 的 稀 释 度 计 算 每 毫升 的 菌 数 最 为 合 适 。 同 一 稀 释 度 的 两 个 重 复 的 菌 数 不 能 相 差 很 悬 殊 。 不 同 稀 释 度 计 算 出 的 每 毫 升 菌 液 中 总 活 菌 数 也 不 能 相 差 悬殊 ， 如 相 差 较 大 ， 表 示 试 验 不 精 确 。 n操作录像 实 验 安 排培 养 基 配 制 :3种 ,分 实 验 台 配 制 （ 每 组 400mL） 第 一 台 :牛 肉 膏 蛋 白 胨 固 体 培 养 基 : 平 板 菌 落 计数 法 用 . 第 二 台 : 放 线 菌 第 三 台 :土 豆 蔗 糖 培 养 基 : 分 离 霉 菌分 装 :三 角 瓶 (装 99mL水 (加 玻 璃 珠 )， 每 台 1只 ) 斜 面 试 管 (装 土 豆 蔗 糖 培 养 基 ,每 人 2只 ) 稀 释 用 试 管 (事 先 装 无 菌 水 4.5mL,每 组 3只 ) 相 关 材 料 . 灭 菌 :轮 流 值 守摆 放 斜 面 试 管 :土 壤 及 细 菌 原 液 稀 释 :土 壤 稀 释 分 离倒 平 板 :每 人 3个 ,分 离 用 2个 ,计 数 用 1个 .接 种 :平板菌落计数每 人 一 只 平 板 .土 壤 稀 释 分 离 : 每 人 划 2个 平 板 ,放 线 菌 和 霉 菌 各 一 个 .培 养 :细 菌 37 ;放 线 菌 ,霉 菌 28 (分 开 放 置 )观 察 ,分 离 和 计 数 :平板菌落计数48小时后;放 线 菌 和霉 菌 接 种 3天 后 开 始形 态 观 察 :一 周 后 .