细菌的芽孢染色

细菌的芽抱染色姓名：俞华军班级：09生科三班学号：200900140157日期：2010/10/29 组别：四 同组者：谢英健 余振洋 岳永胜 张刚刚一. 实验目的1. 学习并掌握细菌的芽抱染色法。2. 了解并观察细菌芽抱的结构和形态。二. 实验原理芽胞又称内生抱子，能否形成芽抱及芽抱的形状、芽抱在抱囊的位置、 芽抱囊是否膨大等特征是鉴定细菌的依据之一。芽胞壁厚，透性低，不易着色，一般染色法只能使菌体着色而芽胞不 着色（芽胞呈无色透明状），而一旦染上色后又难以脱色。芽胞染色法：根据芽胞特点设计，除了用着色力强的染料外，还需要 加热，以促进芽胞着色。当染芽胞时，菌体也会着色，然后水洗，芽胞染 上的颜色难以渗出，而菌体会脱色。然后用对比度强的染料对菌体复染， 使菌体和芽胞呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽胞，便于观察。三. 实验器材1. 菌种：枯草芽抱杆菌（芽抱位于菌体中央）、梭状芽抱杆菌（中部膨大）。2. 溶液和试剂：5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液、二甲苯、香柏油、蒸馏水、95%乙醇。3 .器材：显微镜、接种环、酒精灯、载玻片、盖玻片、擦镜纸、吸水纸。四. 实验步骤1 制片取一块载玻片，在中央滴一滴蒸馏水，用接种环无菌操作从枯草芽抱杆 菌（梭状芽抱杆菌）斜面上挑数环菌置于载玻片液滴上，小液滴呈混浊状 即可。并按常规方法干燥、固定（每隔几秒在酒精灯火焰上过一遍）。2 .加热染色向载玻片滴加数滴5%孔雀绿水溶液覆盖涂菌部位，用夹子夹住载玻片在 微火上加热至染液冒蒸汽（此时开始计时）并维持5min，加热时注意补 充染液，切勿让涂片干涸。3 .脱色带玻片冷却后，用缓流自来水冲洗全流出水无色为止。4 .复染用0.5%的番红水溶液复染1.5min。5 .水洗用缓流自来水冲洗全流出水无色为止。6 .镜检带载玻片自然干燥后（可在酒精灯火焰上每隔几秒过一遍）油镜镜检， 观察芽抱的形态并绘图。<>1001x3概眠用咪理解邵甲表一细菌形态记录表项目 菌种芽抱形状枯草芽抱杆菌椭圆或柱状梭状芽抱杆菌圆形或卵圆形芽抱着生位置芽抱囊形状位于菌体中央或 稍偏圆形不膨大位于菌体中央，极端 或次极端膨大六.思考题1.为什么芽抱染色法需要进行加热？能否用简单染色法观察到细菌芽抱？答:因为与正常细胞或菌体相比，芽抱壁厚，通透性低而不易着色，而加 热时芽抱的通透性高，此时染液可以进入从而使芽抱着色，而简单染 色法不能使芽抱染色，所以不能看到。2 .若在你的制片中仅看到游离芽抱，而很少看到芽抱囊和营养细胞，试分析原因。答：如果只看到芽池，可能是：（1）菌种培养的环境太恶劣了，营养体几乎都变成芽抱了。（2）可能是给芽抱染色用水洗时没洗干净，细胞还是孔雀绿的色彩。（3）复染出现问题了，可能是复染时间不够，没染上，或是水洗的 太厉害，把染液都冲走了。3 .用孔雀绿初染芽抱后，为什么必须等玻片冷却后再用水冲洗？答：如果直接放到水下可能会导致玻片迅速受冷破裂。