测叶绿素含量

一、实验目的1. 了解植物组织中叶绿素的分布及性质。2. 掌握测定叶绿素含量的原理和方法。二、实验原理叶绿素广泛存在于果蔬等绿色植物组织中，并在植物细胞中与蛋白质结合成叶 绿体。当植物细胞死亡后，叶绿素即游离出来，游离叶绿素很不稳定，对光、热 较敏感；在酸性条件下叶绿素生成绿褐色的脱镁叶绿素，在稀碱液中可水解成 鲜绿色的叶绿酸盐以及叶绿醇和甲醇。高等植物中叶绿素有两种：叶绿素A和B， 两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。叶绿素的含量测定方法有多种，其中主要有：1. 原子吸收光谱法：通过测定镁元素的含量，进而间接计算叶绿素的含量。2. 分光光度法：利用分光光度计测定叶绿素提取液在最大吸收波长下的吸光值， 即可用朗伯一比尔定律计算出提取液中各色素的含量。叶绿素A和叶绿素B在645nm和663nm处有最大吸收，且两吸收曲线相交于 652nm处。因此测定提取液在645nm、663nm、652nm波长下的吸光值，并根据 经验公式可分别计算出叶绿素A、叶绿素B和总叶绿素的含量。三、仪器、原料和试剂仪器：分光光度计、电子顶载天平(感量0. 01g)、研钵、棕色容量瓶、小漏斗、 定量滤纸、吸水纸、擦境纸、滴管。原料：新鲜(或烘干)的植物叶片。试剂：1. 96%乙醇(或80%丙酮)、2.石英砂、3.碳酸钙粉四、操作步骤 、取新鲜植物叶片(或其它绿色组织)或十材料，擦净组织表面污物，去除中脉 剪碎。 、称取剪碎的新鲜样品2g，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及3M195% 乙醇，研成均浆，再加乙醇10M1，继续研磨至组织变白。静置35min。 、取滤纸1张置于漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗，滤液流至 100mL棕色容量瓶中；用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一 起倒入漏斗中。 、用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残 渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至100Ml，摇匀。 、取叶绿体色素提取液在波长665nm、645nm和652nm下测定吸光度，以95% 乙醇为空白对照。五、计算按照实验原理中提供的经验公式，分别计算植物材料中叶绿素A、B和总叶绿素 A的含量。叶绿素 A= (12.7-2.69)XV/ (1000XW)】 叶绿素 B= (12.7A6；2.69A645)X【V/ (1000XW)】 总叶绿素 A= (20.oA645+8.02A665)XV/ (1000XW)】 或645665总叶绿素 A= (/34.5) /【V/ (1000XW)】