基因探针是DNA还是RNA,是单链还是双链？

基因探针是还是是单链还是双链？丶 2喜欢的歌，静静的听，喜欢的人，远远的看我笑了当初你不挺傲的吗现在您这是又玩哪出呢？基因探针是还是，是单链还是双链？基因探针（）就是一段与目的基因或互补的特异核苷酸序列，它可以包括整个基因,也可以仅仅是基因的一部分；可以是本身，也可以是由之转录而来的。探针是最常用的核酸探针，指长度在几百碱基对以上的双链或单链探针。现已获得探针数量很多，有细菌、病毒、原虫、真菌、动物和人类细胞探针。双链的探针在应用前必须变为单链，一般采用加热的方法使双链探针变性，原为单链的寡聚核苷酸和无需变性处理即可使用。探针是一类很有前途的核酸探针，由于是单链分子，所以它与靶序列的杂交反应效率极高。早期采用的探针是细胞探针和病毒探针，这些是在细胞基因转录或病毒复制过程中得到标记的，标记效率往往不高，且受到多种因素的制约。这类探针主要用于研究目的，而不是用于检测。例如，在筛选逆转录病毒人类免疫缺陷病毒（）的基因组克隆时，因无探针可利用，就利用的全套标记作为探针，成功地筛选到多株基因组克隆。又如进行中的转录分析（一）时，在体外将细胞核分离出来，然后在 a 的存在下进行转录，所合成一均掺入同位素而得到标记，此混合与固定于硝酸纤维素滤膜上的某一特定的基因的进行杂交，便可反映出该基因的转录状态，这是一种反向探针实验技术。具有放射性或非放射性标记的寡核苷酸，用于从大量核酸样品中找出互补的目标序列，然后用放射自显影或其他显色法如连接的酶作用于可显色底物显示目标序列所在位置。是经放射性或非放射性等物质标记的已知或特定的或片段，目前主要以同位素、地高辛或辣根过氧化酶等标记核酸探针。i 探针的来源：探针可由转录得来，探针根据其来源有种：一种来自基因组中有关的基因本身，称为基因组探针（）；另一种是从相应的基因转录获得了,再通过逆转录得到的探针，称为探针（）。与基因组探针不同的是，探针不含有内含子序列。此外，还可在体外人工合成碱基数不多的与基因序列互补的片段，称为寡核苷酸探针。2 探针的制备进行分子突变需要大量的探针拷贝，后者一般是通过分子克隆（）获得的。克隆是指用无性繁殖方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。当制备基因组探针进，应先制备基因组文库，即把基因组打断，或用限制性酶作不完全水解，得到许多大小不等的随机片段，将这些片段体外重组到运载体（噬菌体、质粒等；中去，再将后者转染适当的宿主细胞如大肠肝菌，这时在固体培养基上可以得到许多携带有不同片段的克隆噬菌斑，通过原位杂交，从中可筛出含有目的基因片段的克隆，然后通过细胞扩增，制备出大量的探针。为了制备探针，首先需分离纯化相应较容易做到，如从造血细胞中制备 a 或 B 珠蛋白作用下，就可以合成与之互补的即，顺序，但内含子已在加工过程中切除。寡核苷酸探针是人工合成的，与已知基因互补的，长度可从十几到几十个核苷酸的片段。如仅知蛋白质的氨基酸顺序量，也可以按氨基酸的密码推导出核苷酸序列，并用化学方法合成。探针的标记为了确定探针是否与相应的基因组杂交，有必要对探针加以标记，以便在结合部位获得可识别的信号通常采用放射性同位素标记探针的某种核苷酸 a 磷酸基。但近年来已发展了一些用非同位素如生物素、地高辛配体等作为标记物的方法。但都不及同位素敏感。非同位素标记的优点是保存时间较长,而且避免了同位素的污染。最常用的探针标记法是缺口平移法。首先用适当浓度的酶 1(I)在探针双链上造成缺口，然后再借助于聚合酶 1(1)的的外切酶活性，切去带有磷酸的核苷酸；同时又利用该酶的3 聚酶活性，使标记的互补核苷酸补入缺口，聚合酶 I 的这两种活性的交替作用，使缺口不断向的方向移动,同时链上的核苷酸不断为标记的核苷酸所取代。探针的标记也可以采用随机引物法，即向变性的探针溶液加入个核苷酸的随机小片段，作为引物，当后者与单链互补结合后，按碱基互补原则不断在其端添加同位素标记的单核苷酸，这样也可以获得比放射性很高的探针。