大肠杆菌的分离鉴定

目的要求目的要求 熟悉鉴别培养基的原理熟悉鉴别培养基的原理 了解大肠杆菌的主要生理生化特性了解大肠杆菌的主要生理生化特性一、鉴别培养一、鉴别培养大肠杆菌大肠杆菌沙门氏杆菌沙门氏杆菌麦康凯麦康凯培养基培养基红色红色菌落菌落无色或浅黄色菌落无色或浅黄色菌落SS琼脂琼脂培养基培养基红色红色菌落菌落浅黄色菌落浅黄色菌落伊红美兰伊红美兰琼脂培养基琼脂培养基紫红色或紫黑色紫红色或紫黑色并带有并带有金金属光泽属光泽菌落菌落粉红色菌落粉红色菌落三塘铁三塘铁培养基培养基斜面和深层均为红色斜面和深层均为红色斜面为红色；深层为黄色；斜面为红色；深层为黄色；若产生若产生H2S，为黑色，为黑色培养基类别培养基类别菌种菌种分离鉴定分离鉴定-麦康凯培养基麦康凯培养基 原理：在培养基中含有胆盐，可抑制大部原理：在培养基中含有胆盐，可抑制大部分革兰氏阳性菌的生长，培养基含乳糖，分革兰氏阳性菌的生长，培养基含乳糖，大肠杆菌能分离乳糖，使大肠杆菌能分离乳糖，使pH下降（中性指下降（中性指示剂示剂5.5-7.5，红，红-黄）形成红色菌落，而黄）形成红色菌落，而沙门氏菌和志贺氏菌，不能分解乳糖，菌沙门氏菌和志贺氏菌，不能分解乳糖，菌落小且为无色落小且为无色术式 两试管斜面移植时，左手斜持菌种管两试管斜面移植时，左手斜持菌种管和被接种管，管口相齐，管底放在拇指和食和被接种管，管口相齐，管底放在拇指和食指间，松动两管棉塞，将管口进行火焰灭菌指间，松动两管棉塞，将管口进行火焰灭菌，使其靠近火焰，将接种环深入管内，先在，使其靠近火焰，将接种环深入管内，先在无菌生长的培养基上接触使之冷却，再挑取无菌生长的培养基上接触使之冷却，再挑取少量的细菌后，拉出接种环，立即伸入另一少量的细菌后，拉出接种环，立即伸入另一管斜面培养基上，勿碰到斜面和管壁，直达管斜面培养基上，勿碰到斜面和管壁，直达斜面底部，从底部开始划曲线，向上到斜面斜面底部，从底部开始划曲线，向上到斜面顶端，管口火焰灭菌，塞好棉塞，接种完毕顶端，管口火焰灭菌，塞好棉塞，接种完毕。接种环火焰灭菌后，放下接种棒最后在斜。接种环火焰灭菌后，放下接种棒最后在斜面管壁上注明日期、接种者。置面管壁上注明日期、接种者。置37370 0C C，温箱，温箱培养培养结果判定 鲜桃红色或微红色，菌鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色落中心呈深桃红色 圆形，扁平，边缘整齐圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润，表面光滑，湿润二、药敏试验方法：取一菌种，用灭方法：取一菌种，用灭菌的接种环致密划线菌的接种环致密划线于琼脂表面（可重复于琼脂表面（可重复来回划线），用无菌来回划线），用无菌镊子，将各种抗菌药镊子，将各种抗菌药物圆纸片，分别贴于物圆纸片，分别贴于培养基表面。各片距培养基表面。各片距离相等，离相等，370C，24h后，观察结果。后，观察结果。药敏结果判定抑菌直径（抑菌直径（mm）敏敏 感感 性性20极敏感极敏感15-20高敏感高敏感10-14中敏感中敏感10低敏感低敏感0不敏感不敏感三、生化实验三、生化实验 1糖发酵试验糖发酵试验 原理：各种细菌具有不同的酶，有的细菌能分解某些糖类而产酸产气，有的细菌虽能分解某种糖类，但只产酸不产气，有的细菌则不能分解。从而鉴别细菌。方法：将需要鉴别的细菌纯培养物，分别接种在各种含指示剂的糖发酵管内，将发酵管倒置与370C温箱内培养24h 结果：培养液不变色-无变化（）培养液变为黄色-产 酸（+）培养液变黄并有气泡-产酸产气（+）2 硫化氢试验硫化氢试验 原理：某些细菌能分离蛋白质中的含硫氨基酸，生成硫化氢，遇培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色的沉淀物。方法：将需要鉴别的细菌纯培养物，分别接种在硫化氢培养基中，370C温箱内培养24h 结果：培养基变黑为阳性，不产生黑色为阴性。大肠杆菌为阴性，沙门氏菌为阳性3 硝酸盐还原实验硝酸盐还原实验 原理：有些细菌能将培养基中的硝酸盐还原为亚硝酸盐，在酸性条件下，亚硝酸盐与对位氨基苯磺酸起作用后，在与-萘胺反应，生成红色偶氮化合物。方法：将被检细菌接种于硝酸钠蛋白胨培养基内，370C温箱内培养24h。结果：再加试剂甲、乙各2滴，在30s内出现红色即为阳性；若无颜色出现，加少量的锌渣，随后出现红色，则是真正的红色