瘤胃保护性氨基酸稳定性检验

ICS65.020.30B40DB15内蒙古自治区地方标准DB 15/ TXXXX规模化羊场绒山羊舍饲管理技术规程瘤胃保护性氨基酸稳定性检验Test method for the stability of rumen-protected amino acid点击此处添加与国际标准一致性程度的标识XXXX - XX - XX发布XXXX - XX - XX实施内蒙古自治区市场监督管理局发布DB15/ TXXXX前言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由内蒙古自治区农牧业科学院提出。本标准由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC19）归口。本标准起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院。本标准主要起草人：孙海洲、桑丹、金鹿、李胜利、张春华、张崇志、凌树礼、任晓萍、珊丹。2瘤胃保护性氨基酸稳定性检验1 范围本标准规定了瘤胃保护性氨基酸稳定性检验方法。本标准适用于瘤胃保护性氨基酸测定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 3358.1 统计学词汇及符号 第1部分：一般统计术语与用于概率的术语3 术语及定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1瘤胃保护性氨基酸（RPAA）rumen protected amino acids通过物理和化学方法处理，将氨基酸以某种方式修饰或保护起来，尽可能减少该氨基酸在瘤胃中被化学和微生物降解，在瘤胃后的消化道中被有效释放，且以生物学可利用形式被吸收和利用的保护性氨基酸。4 试剂和材料4.1 如无特别说明，所用试剂均为色谱纯试剂，水为GB/T 6682规定的一级水。4.2 人工唾液：将9.30 g NaHPO4、9.80 g NaHCO3、0.47 g NaCl、0.57 g KCl、0.04 g CaCl2、0.12 g MgSO4溶于少量蒸馏水中，定容至1000 mL容量瓶中。5 仪器和设备5.1 分析天平（分度值0.0001 g）。5.2 烘箱（室温300 ）。5.3 具塞试管（50 mL）。5.4 恒温水浴摇床。5.5 容量瓶（100 mL和1000 mL）。5.6 刻度吸管（20 mL）。5.7 三角瓶（250 mL）。6 测定步骤6.1 RPAA在人工唾液中稳定性检验准确称取0.5 g RPAA，放入50 mL具塞试管底部，加入20 mL人工唾液，盖紧试管塞，在39 的恒温水浴摇床内消化2，4，8，12，16和24 h，取出后冲洗、过滤，置于40 烘箱中烘干，用茚三酮比色法测定不同时间点残渣中的氨基酸含量，由此计算出氨基酸释放率。6.2RPAA在瘤胃液中稳定性检验选择孔径为3550 m的尼龙布，裁剪成15 cm11 cm的长方块，对折，用涤纶线进行双道缝合，制成长宽为7 cm 10 cm的尼龙袋，尼龙袋边缘用烙铁熨烫使其无散边，用油性笔标号，再用自来水冲洗，浸泡50 min，低温烘干至恒重，备用。准确称取5 g RPAA样品放入尼龙袋内，尼龙袋夹在一根长约1215 cm的塑料软管一端，用橡皮筋缠紧,于早晨饲喂后1 h投入瘘管羊瘤胃内，管的另一端用尼龙绳挂在瘘管塞上。分别在2，4，8，12，16和24 h后将尼龙袋从瘘管羊瘤胃中取出，进行冲洗、浸泡1 min，置于40 烘箱中烘干，用茚三酮比色法测定不同时间点内尼龙袋中残留的氨基酸含量，由此计算氨基酸释放率。6.3 RPAA在十二指肠中稳定性检验采集绵羊十二指肠液200 mL，经四层纱布过滤后装入250 mL三角瓶内，准确称取0.5 g 瘤胃保护性氨基酸，放入50 mL具塞试管底部，盖紧试管塞，在39 的恒温水浴摇床内消化2，4，8，12，16和24 h，取出后过滤、冲洗1 min，用茚三酮比色法测定残渣中的氨基酸含量，由此计算氨基酸释放率。7 测定结果的计算7.1RPAA的氨基酸释放率（%）=RPAA中的氨基酸含量-消化后残留物中氨基酸的含量RPAA中氨基酸的含量1007.2 结果表示 取两次测定的算数平均值作为结果，保留到小数点后一位。7.3 重复性每试样称取两个平行样进行测定，取平均值为分析结果。在重复条件下同一样品获得的测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %。_