蛋白质的透析实验.ppt

蛋白质的透析,透析实验,实验原理,透析是膜技术的一种，利用透析膜可以选择性的透过一定大小分子，从而将待分离纯化的物质和杂质离子分离开。 透析膜是半透膜，蛋白质是大分子物质，它不能透过透析膜，而小分子物质可以自由通过透析膜与周围的缓冲溶液进行溶质交换，进入到透析液中。 常见的透析有：蛋白质的透析和糖类的透析。,透析装置（原理图）,透析装置和透析过程示意图,实验仪器,磁力搅拌器,器材与试剂,器材：透析袋 ，烧杯，玻璃棒，磁力搅拌器，试管及试管架。 试剂：饱和氯化钠溶液，10%硝酸溶液，1%硝酸银溶液，10%氢氧化钠溶液，1%硫酸铜溶液。,操作步骤,透析袋的处理：一般是将透析袋剪成1020cm的小段，在2（W/V）NaHCO3和1mmol/L的EDTA（pH8.0）中煮沸10min，用蒸馏水彻底洗尽透析袋，然后放在1mmol/L的EDTA（pH8.0）中煮沸10min，用蒸馏水彻底洗尽透析袋，冷却后，存放于4，从此时起取用透析袋，必须戴手套 检查透析效果的方法：用1 BaCl2检查(NH4)2SO4，用1AgNO3检查NaCl、KCl等,操作步骤,装样 取一段透析袋1015cm，将其一端用棉绳扎死，由开口端加入约5ml待透析的样品溶液（蛋白质氯化钠溶液），开口端用棉绳扎死，放入盛有蒸馏水的烧杯中，系于一横放在烧杯的玻璃棒上。,操作步骤,透析 用磁力搅拌器搅拌促进溶液交换。透析过程中需要更换洗脱溶液数次（约15min一次），至达到透析平衡为止（洗出液中无Cl-），约需1h.,检查透析效果,检查氯离子：自烧杯中取水12ml，加10%硝酸溶液数滴使之成酸性，再加入1%硝酸银12滴，检查氯离子的存在。 检查蛋白质：从烧杯中取12ml，做双缩脲反应，检查是否有蛋白质存在。 双缩脲反应：加10%氢氧化钠1ml，振荡摇匀，再加1%硫酸铜溶液1滴，振荡，观察是否出现粉红色。,注意事项,把需要透析的样品盛于透析袋内，袋内留有挤去空气的空余部分，以防由于溶剂渗入造成样品体积增加而引起透析袋胀破 为了获得较快的透析速度，常常采取一些措施保持膜两侧浓度差具有最大差，如经常更换透析外液，连续搅动外液。,