实验三、犬瘟热犬的病理组织学观察(高树修改)

实验五 犬瘟热犬的病理组织学观察犬瘟热（canine distemper）是由犬瘟热病毒引起的犬科、鼬科和浣熊科等动物的一种急性、高度接触性传染性疾病。临床上以双相体温升高、急性鼻卡他和随后的支气管炎、卡他性肺炎、严重胃肠炎和神经症状为特征的传染病1。本实验通过收集犬瘟热病病例，对这些病例经过诊断后进行对症治疗，并且对其中治疗无效淘汰或者死亡的以及以安乐死术处死的自然感染病犬进行尸体剖检，对其具有明显病变的组织脏器采集病料，进行病理组织学观察，旨在对犬瘟热病理学的认识，为该病的诊断、治疗、判定预后提供相关的依据。1材料与方法 1.1材料来源来源于临床实践，病例资料来自本人在农八师兽医站和动物科技学院动物医院等地实习期间参与诊治的病例，主要是萨摩耶、杂种犬、松狮犬、谷牧犬等。1.2实验仪器与药品试剂1.2.1实验仪器摊片烤片机一台、烘箱一台、德国Leica切片机一台、日本Olympus光学显微镜一台、Haier冰箱一台。1.2.2药品试剂10%甲醛、自来水、丙酮、乙醇（100%，95%，85%，75%）、二甲苯、熔融石蜡若干、苏木素染液、盐酸酒精染液、1%伊红酒精染液、蛋白甘油、树胶、组织剪、广口瓶、手术刀各一把、镊子（平角和尖角各一把）、玻璃缸若干、蜡缸若干烧杯若干、手表一个、纸张若干、水盆一个、酒精灯一个、火柴一盒、铁铲一个、木块若干、载玻片若干、盖玻片若干。1.3病理切片的制作取肠、肝、肺、脾、心等病变组织，将其切成1.5cm×1.5cm(长×宽)小块，并做好记号，放入10%的甲醛中固定24h。用自来水冲洗5-6h。脱水：在两缸丙酮溶液中浸泡各1h，两缸乙醇浸泡各1h，第三缸乙醇浸泡过夜。透明：在两缸二甲苯浸泡均不超过10min。浸蜡：温箱65，在三个蜡缸中浸蜡各1h，包埋，修蜡，切片。脱蜡：在三缸二甲苯中浸泡各5min，在不同浓度乙醇中浸泡，乙醇浓度由高到低按100%，95%，85%，75%各十秒。染色：在苏木素中浸染1015min后用水缓慢冲洗至水清；然后在盐酸酒精中浸染3-5s秒使组织微红后用水缓慢冲洗使组织由红至篮；最后在1%伊红酒精中浸染5min，至水清。脱色：按照乙醇浓度由低到高按75%，85%，95%，100%浸泡各10s，在有二甲苯的三个小缸中各5min，然后滴加树胶封片。取典型病料制作石蜡切片，HE染色，光镜观察，拍照.2病死犬的解剖尸检病变集中在神经系统、消化系统和呼吸系统。呼吸系统：气管、支气管中常有多量黏液或黏液脓性分泌物。肺脏出现散在分布大小、形状不一的实变病灶，多为暗红色、灰红色或黄白色。消化系统：胃、小肠、大肠腔内均有黏液，黏膜呈暗红色，有时可见小出血点。肝肿大、浅黄色。神经系统：大脑脑室扩张，脑室液增多，脑实质变薄2。2.1 4个半月萨摩耶犬瘟热解剖主要表现是呼吸道症状，发烧，在兽医院传染，最终安乐处死。 图1 图22.2黑白花犬瘟热死亡解剖 图3 图4图52.3松狮犬犬瘟热肺部病变 图6 图72.4谷牧犬犬瘟热强阳性解剖图片2.4.1谷牧犬肺脏病变纹路病变颜色变淡图片 图8 图9图10 图112.4.2 谷牧犬腹腔解剖图片 图132.4.3 谷牧犬肾脏图片 图14 图153 主要病理组织学变化3.1 肝脏和胆管肝细胞颗粒变性、脂肪变性，呈大量空泡状；肝窦变窄，部分区域淤血，在肿大变性的肝细胞中可见少量细胞浆包涵体。胆管上皮细胞高度肿胀，变性坏死脱落，与大量黏液和炎性细胞充满整个管腔，胆管周围的毛细血管严重充血。 图1 肝淤血（HE,10×10） 图2 肝淤血，肝细胞坏死(HE,40×10) 图3 间质性肺炎, 肺间质增宽，内 图4 间质性肺炎, 肺间质增宽，内有淋巴细胞和巨噬细胞浸润(HE,10×10) 有淋巴细胞和巨噬细胞浸润(HE,40×10)图5 间质性肺炎, 肺间质增宽，内有 图6间质性肺炎,肺间质增宽，内有淋巴细胞和巨噬细胞浸润(HE,10×10) 淋巴细胞和巨噬细胞浸润(HE,40×10)3.2 肺脏肺脏广泛淤血，肺泡壁结构几乎消失，肺泡腔内有大量变性坏死脱落的肺泡上皮细胞和巨噬细胞，有些坏死的上皮细胞已经破碎，同时伴有纤维素和黏液渗出，部分区域肺泡上皮增生，且内有核内包涵体。细支气管上皮细胞变性、坏死、脱落，管腔中有许多中性粒细胞和脱落的上皮细胞，少数变性的细支气管上皮细胞内有核内包涵体。 图7 图83.3 脾脏脾淤血、出血，其白髓几乎消失，淋巴细胞明显减少，网状细胞增生；红髓中充满巨噬细胞，还有较多含铁细胞，窦内皮细胞增生。 图9 脾出血 (HE,10×10) 图10 脾出血 (HE,10×10) 图11 脾小结部位有大量红细胞 图12 脾小结部位有大量红细胞(HE,10×10) (HE,40×10)3.4 心脏淤血，肌纤维萎缩，部分区域心肌细胞断裂坏死。另外在心室腔内发现的鸡脂样凝血块，主要由纤维素组成，而红细胞则堆积在血凝块边缘。 图13 心肌间质出血(HE,10×10) 图14 心肌间质出血(HE,40×10)3.5 肾脏 肾脏皮质部小叶间轻度充血，间质内出现浆细胞、单核细胞集聚灶及少数淋巴细胞，部分肾小球囊腔扩张、上皮细胞脱离基底膜，肾小球毛细血管袢细胞空泡变性，肾小管上皮细胞颗粒变性、水泡变性、脱离基底膜、管腔狭窄，内有透明管型和细胞管型3。 图15 肾间质出血(HE,40×10) 4讨论4.1犬瘟热病犬病理组织学的变化据卢建远报道4患犬瘟热的病犬其组织学病变主要以卡他性、化脓性支气管炎、化脓性支气管肺炎及间质性肺炎,卡他性或出血性胃肠炎,淋巴结和脾脏淋巴细胞脱失为特征。这与本研究中脾脏的病理变化基本一致。据孙鹏等5报道患犬温热的病犬其脾脏和心肌的主要病理变化表现在：心肌细胞扭曲变形、断裂，胞浆疏松；脾发生退行性变化，脾红髓单核细胞、嗜中性白细胞等出现炎症细胞浸润，脾窦内可见大量含铁血黄素等；胸腺出血，皮质变薄、淋巴细胞大量丢失。据扎西英派等6对患犬瘟热的藏獒和松狮犬的病变组织进行观察后发现：肺泡壁结构消失，肺泡上皮增生，肺泡腔内有大量变性坏死脱落的肺泡上皮细胞和巨噬细胞，细支气管上皮细胞变性、坏死、脱落，管腔中有许多中性粒细胞和脱落的上皮细胞，同时在少数增生的肺泡上皮和变性的细支气管上皮细胞内发现核内包涵体。这与本研究中报道的肺脏的病理变化一致。这说明患呼吸道型的犬瘟热病犬其肺脏组织受到的侵害最严重，因此这种病变作为犬瘟热的特征性病理变化。4.2病犬死亡的病理学原因从我们对几条患病犬死亡后的病理组织观察发现病犬的免疫系统严重受损，主要体现在脾淤血、出血，其白髓几乎消失，淋巴细胞明显减少，并有部分坏死。脾脏的淋巴细胞大量消失是明显的免疫抑制征象，多数学者认为这是由于淋巴系统各组织器官是犬瘟热病毒首先侵犯的靶器官，感染病毒的免疫活性细胞常发生坏死、崩解或凋亡。另外犬瘟热病毒还会在巨噬细胞、上皮细胞和神经细胞内增殖，引起骨髓、胸腺、脾脏等淋巴组织损伤，B细胞抗体生成机能与T细胞对丝裂原反应均显著降低，这可能是犬瘟热病毒引起免疫抑制的重要环节。对于患神经症状的病犬病理组织观察中枢神经系统脱髓鞘及上皮细胞、神经细胞和胶质细胞内有病毒性包涵体形成。这些病理学变化导致脑脊液循环障碍而引起犬脑部积水，导致颅内压升高，患神经症状的犬在临床上常表现出呻吟或吠叫不止和惊恐不安等症状1。 4.3病犬死亡的其他原因据郑曙光等7对3055例犬瘟热根据临床症状进行了分型，其中呼吸道型、消化道型、神经型、皮肤型和混合型的构成比分别为39.80%、32.05%、11.68%、2.59%和13.88%。治疗的效果与犬的病程长短，发病早晚有关5，在本院治疗的犬只要在治疗期间体温一直维持正常，不出现神经症状，且病程较短者，预后良好，一般能恢复健康，无后遗症，发热时间和病程在两星期以内的多数病犬也能恢复健康、存活。发热时间和病程超过两星期以上，但不出现神经症状者，预后也较好，大部分病犬中能恢复健康、存活。发热时间和病程超过两星期以上，出现共济失调、抽搐等神经症状者，则预后较差，而对于混合型感染和神经型的多治愈不佳。而有些畜主在病犬早期症状不明显时，将其当做感冒自行处理，以为犬感冒拉稀，而自行治疗，喂点感冒药等待观察，到严重时才来就诊，结果延误了治疗的最佳时期，而影响了治疗的效果。另外治疗的效果还与犬的年龄，及纯种与否有关。据陈元其报道8在患犬温热的病犬中，发病率最高的是2月龄，为26.23%，其次是3月龄，为16.39%。发病率最低的是10月龄和11月龄，为1.64%。因为有母源抗体的保护，1月龄以下犬发病率较低， 2-3月龄的幼犬最高，因为幼犬机体稚嫩加之母源抗体水平逐渐降低，免疫器官发育不健全，特异性和非特异性免疫功能不完善，又遇断奶、饲养环境改变等诸多应激因素，所发幼犬一旦发病其治疗效果明显比其他年龄段的要差。另外病犬治疗效果不佳的原因还和畜主的经济能力有关，在治疗期间有的畜主无力承担昂贵的治疗费用对即将治愈的病犬提前带回家，造成病犬症状复发等再次带到医院时已经延误了治疗的最佳时间，最终导致治疗失败9。4.4犬瘟热的综合防治根据病犬的的病型和病症表现采取支持和对症治疗措施，是增强病犬机体抗病力的关键。对较早出现消化道症状的如呕吐，腹泻，脱水的病犬要注意补液，同时补充ATP、辅酶A、黄细胞色素C等。对发热的病犬，可给予双黄连、清开灵、柴胡等。对出现呼吸道症状的病犬要减少输液量以防止医源性肺水肿，应给予平喘、镇静的药物，如氨茶碱、氯丙嗪、安定等。对出现神经症状的病犬可口服扑癫酮或苯妥英钠。感染CDV早期应用特异性犬瘟热病毒单克隆抗体或大剂量高免血清，具有较好的治疗效果，对于出现继发感染的病犬可根据病情应用抗菌素，如青霉素、头孢菌素、喹诺酮类，普康素等进行治疗以减少死亡缓解病情10。患犬温热康复的犬能产生持久的免疫力，因此预防本病的合理措施是免疫接种。常用的接种疫苗有六联弱毒疫苗和五联弱毒疫苗，有关犬瘟热的免疫程序，年龄大于3个月的幼犬给予一个剂量的免疫，小于3个月的幼犬应给予两个以上剂量的免疫，每隔剂量间隔2周进行肌肉注射1。参考文献1候加法.小动物疾病学M北京：中国农业出版社，2002:77-82. 2 卢建远，黄志宏，李阳友等 犬瘟热的临床与病理学研究 中国兽医杂志 2007， 43（9）57-583 赵建俊，王海明.1例恢复期犬瘟热的病理学诊断J. 畜牧与兽医2009,41（11）:109-1104卢建远,黄志宏,邱翔,等.犬瘟热的系统病理损害与治疗J. 西南民族大学学报,2008,38,2:282-283.5孙鹏,卢广新.犬瘟热病毒检测与病理学分析J. 山东畜牧兽医,2008,29:12-136扎西英派，孙艳芳，陈怀涛，等.藏獒和松狮犬犬瘟热的病理学观察J.动物医学进展，2007，28(9):51-547郑曙光，邵卫国，陈荣卿，等.3055例犬瘟热病例分析及高免全血的疗效观察J.山东畜牧兽医，2011,32:8-11.8陈元其.犬瘟热的诊断与防治.福建畜牧兽医， 2005，27(4)33-359刘江帆，李智新，胡琼.抗犬病高免血清配合对症疗法治疗犬瘟热病的疗效观察J.河南畜牧兽医，2006,1:20-2110何英，叶俊华.宠物医生手册M.辽宁科学技术出版社，2003,139