LeicaTCSSP5激光共聚焦显微镜系统软件操作手册

Leica TCS SP5 激光共聚焦显微镜系统软件操作手册打开软件后，默认在Acquire面板的acquisition中，acquisition mode为xyz,Format 扫描像素为 512x512，average line and frame average 为 1。选择扫描模式，xyz层面扫描 xyt 时间扫描 xy入光谱扫描扫描像素一般选1024 X 1024设置平均 一般选择 line average 4-8 次保存图像方法 注意：从获取第一张图片后就要开始保存，以后每获取一张图片都要保存一次，以免 数据丢失。1、保存 Leica .lif 文件进入Acquire面板的Experiment中，右键点击Experiment,从弹出菜单中选中“SaveExperiment"Experiment” as.”，保存lif文件到自己的文件夹中并取名。2、导出lif文件右键点击Experiment,从弹出菜单中选中"Export Experiment as tiff',选择目标文件夹，选中rawdata导出单通道图片。如需导出overlay图片，则再次右键点击Experiment,从弹出菜单中选中“Export Experiment as tiff”，选择目标文件夹，选中overlay导出多通道合成图片。获取单一荧光图像1、在beam path setting中的load/save single setting中选择所标记荧光的光路设置方法。2、点击live开始连续扫描，优化图像质量。调节z position选择需扫描层面，调节gain和offset使图像亮度和背景到达到合适的状态, Zoom 调节电子放大倍率。点击stop,停止扫描。3、点击 capture image 获取图像。4、保存图像。、获取多荧光图像1、点击 seq，出现 sequential scan 面板。2、在sequential scan面板中点击scan 1,在beam path setting中选择所标记的一种荧光的 光路设置方法。点击live开始连续扫描，优化图像质量。调节 z position 选择需扫描层面，调节 gain 和 offset 使图像亮度和背景到达到合适的状态， Zoom 调节电子放大倍率。点击stop,停止扫描。在 sequential scan 面板中点击“+ ”，点击 scan 2，在 beam path setting 中选择所标记的另 种荧光的光路设置方法，点击live开始连续扫描，优化图像质量。 标记了几种荧光就添加几种方法。选择“between frames ” 模式。3、点击Start获取图像。4、保存图像。三、获取多层荧光图像1、在 beam path setting 中选择所标记荧光的光路设置方法。2、打开 Z-stack 面板。3、点击live开始连续扫描，优化图像质量。调节z position选择需扫描层面，设置begin和end，调节gain和offset使图像亮度和背景 到达到合适的状态， Zoom 调节电子放大倍率。点击stop,停止扫描。在Z-stack面板中确定Nr. Of steps （在选择层面中确定需扫描张数）4、点击start获取图像。5、如需将扫描图像叠加，选择Process面板，选择visualization 3D projection，点击apply， 即可生成叠加图像。6、保存图像。四、获取时间序列图像1、Acquisition mode 改为 xyt。2、根据需要拍摄图像的时间间隔和图像质量调整fomat和line average值。3、在beam path setting中的load/save single setting中选择所标记荧光的光路设置方法。如是多种荧光则选择点击seq，设置序列扫描。4、点击live开始连续扫描，优化图像质量。调节 z position 选择需扫描层面，调节 gain 和 offset 使图像亮度和背景到达到合适的状态 Zoom 调节电子放大倍率。点击stop,停止扫描。5、点击start获取图像。6、保存图像。