FITC蛋白标记方法
FITC蛋白标记方法1. 溶液准备: 0.15mol/L NaCl溶液,配法,称取8.775g NaCl溶解于1L水中,0.15mol/L NaHCO3-Na2CO3,PH9.0缓冲液,配法,取(1.59%)Na2CO3 10ml,(1.26%)NaHCO3 90ml,调PH到9.02.蛋白溶解液:按V0.15mol/L NaCl:V0.15mol/L NaHCO3-Na2CO3 =9:1,溶解蛋白,使蛋白的终浓度为10mg/ml。3.加入荧光素,加入的荧光素的质量按m蛋白:m荧光素=5080mg:1mg,称取完成后加入事先配好的蛋白溶解液中,于4生化培养箱中,摇床混匀过夜。注意加入荧光素后需要避光。4.将混匀后的溶液转移到Millpore超滤管中,超滤管中滤膜可以拦截分子量大于3KD的分子,配平后以5000g的转速于日立高速离心机(型号?)离心至无荧光素滤出为止。大约需离3次,每次离心需2-3h。5.离心结束后,将超滤管中的标记液倒入用锡箔纸包裹的塑料管中,不加叠氮钠于4保存。参考文献:MMP-3 Contribute to Nigrostriatal Dopaminergic Neuronal Loss,BBB Damage, and Neuroinflammation in an MPTP Mouse Model of Parkinsons Disease.