希若宁西洛他唑片临床报告

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1、希假设宁西洛他唑片临床报告【选题目的和依据】西洛他唑为环磷酸腺苷磷酸二酯酶III cAMP PDE III抑制剂，其已在日本上市多年，并于1999年5月在美国获得FDA批准。本品是过去15年中第一个获得许可用于治疗间歇性跛行的药物。 间歇性跛行是一种临床病症，主要表现为：发病早期患肢发凉、麻木或足底紧感。但患者行走一定距离后小腿或足部肌肉发生胀痛或抽痛，从而被迫止步不前，休息片刻，疼痛缓解，可继续行走，行走后病症可重复出现，表现为“行走-疼痛-休息-缓解的重复规律。间歇性跛行多发生于闭塞性周围动脉硬化及闭塞性血栓性脉管炎等慢性周围动脉阻塞性疾病患者。临床观察说明，血脂增高、高血压、糖尿病、吸烟

2、等可直接导致周围动脉闭塞性疾病的发生和开展。对周围动脉闭塞性疾病引起的间歇性跛行的治疗包括：1一般治疗：尽量戒烟，保护肢体免受由机械、温度和化学等引起的外伤，并保持皮肤清洁，坚持步行锻炼。2手术治疗：有周围动脉闭塞病症的糖尿病患者，以及有休息时疼痛和/或缺血性溃疡的所有患者均应考虑血运重建术。可用自体大隐静脉作旁路移植手术，亦可用经皮球囊扩张血管成形术。3药物治疗：最有效也最为患者所接受的是药物治疗。临床上常用抗血小板聚集药如阿司匹林及塞氯匹定来治疗及预防此症。但多年临床应用研究发现阿司匹林抗血小板聚集作用并不确切，并且其可能带来较为严重的毒副作用如出血时间延长、消化性溃疡等；而塞氯匹定可能会

3、导致粒细胞减少并影响转氨酶，使其使用受到限制。现今临床上可供选择的药物较少，开发西洛他唑相信能填补此类药物的空白。 西洛他唑为cAMP PDE III抑制剂，能抑制PDE III活性并减缓cAMP的降解，使血小板和血管壁上的cAMP增加，从而抑制血小板的聚集并使血管扩张。西洛他唑能可逆的抑制由凝血酶、ADP、胶原蛋白、花生四烯酸、肾上腺素及血流状态改变等引起的血小板聚集。 临床研究显示，患者口服50、100mg b.i.d.西洛他唑进行为期1224周的随机双盲抚慰剂对照试验，结果说明本品能增加间歇性跛行患者的行走距离及行走速度。通过一些运动试验如踏车试验所测定得最大行走距离较基线的变化并与抚慰

4、剂组比拟来评价西洛他唑的有效性。西洛他唑100mg b.i.d.治疗组最大行走距离较基线增加28100%，而抚慰剂对照组增加1030%。同时此研究显示西洛他唑的不良反响较少，最常见的不良事件有头痛、恶心及心悸等。 动物实验说明西洛他唑的平安性高，小鼠和大鼠口服西洛他唑的LD505.0g/kg，犬2.0g/kg。 鉴于西洛他唑的上述优点，因此我们选择该品种进行开发。随着人们生活水平的提高，膳食结构的改变，高血脂、高血压、糖尿病患者日益增多，再加上吸烟及精神压力增加等因素使慢性周围动脉阻塞性疾病成为一组常见病，而其典型病症便是间歇性跛行。相信西洛他唑会为此类患者提供一疗效确切且副作用小的用药选择，

5、因而具有一定的临床价值。进口的西洛他唑片价格昂贵，不利于普通患者用药，现将其国产化，具有极大的价格优势，能为众多患者使用，因此也具有一定的社会价值和经济价值。西洛他唑片已于1996年批准进入中国市场。按照临床批件上批准的注册分类，申报生产时按照化学药品第6类进行申报。【 国外有关该品研究现状和生产，使用情况的综述】西洛他唑为cAMP PDE III抑制剂，能抑制PDE III活性并减缓cAMP的降解，使血小板和血管壁上的cAMP增加，从而抑制血小板的聚集并使血管扩张。适用于缓解因慢性动脉闭塞症引起的下肢疼痛、下肢缺血性溃疡、下肢发冷及间歇性跛行等缺血性病症。M。另外西洛他唑对血脂也有一定的影响

6、，研究说明，口服西洛他唑100mg b.i.d.持续14周，试验组较抚慰剂组降低甘油三酯29.3mg/dl(15%)，增加HDL-胆固醇4.0mg/dl(约10%)。 一般药理学研究：对多种实验动物如犬、猫、大鼠、豚鼠和小鼠等进行的一般药理学研究说明，西洛他唑除稍有松弛血管平滑肌，增快心率、心肌纤维的耗氧量及呼吸频率等作用外，对自主神经、外周神经及中枢神经系统没有影响。 急性毒性试验说明，小鼠和大鼠口服西洛他唑的LD505.0g/kg，犬2.0g/kg。 亚急性毒性研究说明，口服13周的最大平安剂量SD大鼠、Beagle犬均为30mg/kg/d。慢性毒性研究说明，口服52周的最大平安剂量SD大

7、鼠为6mg/kg/d，Beagle犬为12mg/kg/d。致癌、致畸及生殖毒性试验：大鼠和小鼠分别口服西洛他唑500mg/kg/d和1000mg/kg/d持续104周试验显示，本品无致癌性。细菌基因突变试验、细菌DNA损害试验、哺乳动物细胞基因突变试验及小鼠骨髓细胞试验均显示本品无致突变性。西洛他唑1000mg/kg/d不会影响大鼠的生育及交配能力。2. 药代动力学 大鼠、兔口服10mg/kg，犬口服3mg/kg西洛他唑后，其Tmax、Cmax和T1/2分别为雄性大鼠2h、710.5ng/ml和2.5h，雌性大鼠4h、11002.8ng/ml、和3.7h，兔8h、358.1ng/ml和6.9h

8、，犬3h、559.4ng/ml和1.6h。口服西洛他唑10mg/kg72h后其尿和粪便中的排泄率分别为雄性大鼠42.7%和61.7%，雌性大鼠31.1%和55.7%，兔57.3%和29.9%。犬口服3mg/kg48h后其尿和粪便中的排泄率为20.9%和74.1%。雄性大鼠口服西洛他唑3mg/kg/d持续21天，其尿和粪便中的排泄率较单次给药没有明显差异。3. 临床研究 I期临床试验：考察西洛他唑的耐受程度及临床药代动力学研究。健康志愿者口服西洛他唑25、50、75、100、150、200和300mg。75mg以上剂量组至少有1例产生头痛。其他临床检查，血压及心率均正常。研究说明口服西洛他唑34

9、小时后达峰，血浆相半衰期为2.63.2小时，相半衰期为19.525.5小时，以上剂量组达峰浓度分别为283.7、663.4、540.0、823.6、1110.4、1129.2和1623.9mg/ml。 临床试验：年龄40岁，在踏车试验中倾斜度12.5%，3.2km/h起始跛行距离(ICD)在30200m之间的被确诊为慢性动脉闭塞症的81例62男性、19女性患者，给予西洛他唑100mg b.i.d.与抚慰剂对照进行为期12周的随机双盲多中心临床试验。通过ICD、最大行走距离绝对跛行距离，ACD及踝关节压力来评价西洛他唑的临床疗效及平安性。结果为治疗组ICD增加了35%，ACD增加了41%。此试验

10、证明，西洛他唑是一平安有效的治疗间歇性跛行的药物。 大范围的临床研究显示西洛他唑的不良反响较少，最常见的不良事件有头痛、恶心及心悸等。【国内有关该品的研究现状与生产及临床使用情况】 西洛他唑片剂于1996年批准进入中国市场，在我国临床已使用多年，目前，已被列入?国家根本药物西药品种目录?。在我国使用的片剂规格分50mg及100mg两种，商品名为培达(Pletaal?)。临床适用于缓解因慢性动脉闭塞症引起的下肢疼痛、下肢缺血性溃疡、下肢发冷及间歇性跛行等缺血性病症。用餐前半小时和用餐后2小时之外服用。推荐剂量为一次100mg，一日两次。 目前国内已有研究单位对本品原料和片剂进行了研究的报道。【国

11、内外有关该品的近期文献】1H. Akiyama etal. The absorption, distribution excretion of a new antithrombotic and vasodilating agent; Cilostazol, in rat, dog and man. Arzneim-Forsch. 1985,35:11241132。2T. Niki et al. Phase I study of Cilostazol. Arzneim-Forsch. 1985,35:11731185。3David L. Etal. Cilostazol has benefici

12、al effects in treatment of intermittent claudication. Circulation. 1998;98:678686。西洛他唑预防犬下腔静脉狭窄内置支架术后再狭窄的研究周为民, 李晓强, 桑宏飞, 高峰, 余朝文, 聂中林, 段鹏飞, 孟庆友, 周伟, 高杰(蚌埠医学院附属医院, 蚌埠233000)【摘要】目的: 探讨西洛他唑预防犬下腔静脉狭窄内置支架术后再狭窄的影响。方法: 制作成下腔静脉狭窄模型的健康成年杂种犬18 条, 随机分为A(实验组)、B(对照组)两组, 每组8条, 采用Seldinger 技术经股静脉径路扩张狭窄的下腔静脉并置入国产2

13、035自膨式Z型金属支架。A、B 两组手术前10d 至手术后4 周分别服用西洛他唑及阿司匹林肠溶片。术后第4 周时造影后获取标本作组织学检查。血管造影观察静脉通畅性、下腔静脉压力差、最小血管直径情况及支架是否移位; HE 染色及组织化学检查了解内膜增生、胶原沉积及平滑肌-Actin 表达情况。扫描电镜评估内皮层变化; 透射电镜观察平滑肌细胞增生情况。结果: 全组支架均成功置入到狭窄的下腔静脉处, 并且保持通畅, 腔静脉直径有了一定的增宽。A组的下腔静脉压力差降低及最小血管直径较B组好( P 0.05)。光镜下见A 组内膜增生、胶原纤维染色、平滑肌-Actin染色均较B组轻; 电镜显示A组内皮层

14、尚完整, 平滑肌细胞呈长菱形, 核异染色质多, 形态欠规那么, 胞质有少量细胞器, 充满细丝, 有密体和密斑, 质膜外有基板。B组那么见平滑肌细胞粗面内质网扩张。结论: 西洛他唑作为一种c-AMP-磷酸二酯酶的抑制剂,可通过减轻血管内膜增生及平滑肌细胞增殖来减少再狭窄的发生率, 在下腔静脉狭窄内置支架术后应用是平安和可行的。 关键词下腔静脉, 支架, 内膜增生, 平滑肌细胞, 血管重塑中图分类号: R973+ . 2文献标识码:A 文章编号: 1006-5687 (2004) 01-0001-04下腔静脉( inferior vena cava, IVC) 狭窄在我国以及东方国家较常见, 常常

15、引起下肢静脉高压而导致下肢水肿、溃疡、静脉曲张以及色素沉着、血栓形成等, 严重影响人们生活质量。经皮球囊扩张内置支架术是治疗该病的较好方法, 对预防下腔静脉再狭窄特别是对急性期的弹性收缩有效, 但对于血管平滑肌细胞( smooth muscle cell, SMC) 增殖造成的再狭窄尚无很好的治疗。西洛他唑可选择性地抑制3, 5-cAM P 磷酸二酯酶 , 不仅具有抗血栓和血管扩张作用, 还能够抑制血管平滑肌细胞的增殖。本实验旨在观察西洛他唑达对防止犬下腔静脉狭窄内置支架术后再狭窄的影响, 现将结果报道如下。1材料与方法1.1材料与药物1.1.1动物选择健康成年杂种犬18 条, 体重1520

16、kg, 雌雄不限。1.1.2 药物西洛他唑( cilostazol,阿司匹林肠溶片。1.1.3 球囊与支架球囊12 mm 4 cm (Cordis,USA ) , 批号: S0902070; 支架: 20 mm 35 mm 自膨式Z 型金属支架(中国常州)。1.1.4下腔静脉狭窄模型制作全身麻醉下(静脉内注射戊巴比妥钠30 m g/kg) 经皮以20G针穿刺于肾静脉水平以下IVC 腹膜后间隙内, 并注入无水酒精2030 ml 制作成IVC 狭窄模型1。注射无水酒精时通过股静脉径路放置猪尾管先行IVC 测压、造影, 然后将猪尾管头端放于肾静脉水平以下IVC 内作为引导并在数字减影血管造影(DSA

17、 ) 定位下完成。注射无水酒精前尽量将针尖放置在腔静脉壁或血管周围而不放在血管腔内, 2周后造影确定IVC 狭窄模型是否形成。当IVC直径缩小50% 或狭窄两端的压力差为5cmH2O 以上时被认为有显著的狭窄定为制模成功。预实验时有1 例2 周时死于腹膜后感染, 1例未形成IVC 狭窄, 排除在本实验之外。1.1.5实验分组将实验犬制作成下腔静脉狭窄模型后, 随机分为A、B 两组, 每组8条, 两组手术步骤及术前、术后进食相同。A 组(实验组) 每日口服西洛他唑片,按50mg/kg 体重投给, 从术前10 d 至术后4 周; B 组(对照组) 每日口服阿司匹林肠溶片, 按100 m g/kg

18、体重投给, 从术前10 d 至术后4 周。1.2实验方法1.2.1A 组采用Seldinger 技术穿刺犬股静脉置入6F 导管鞘, 插入6F 猪尾管造影证实IVC 狭窄模型成功并测IVC 压力。交换导丝后置入7F 长鞘, 以直径12mm 球囊反复扩张狭窄的IVC, 扩张压力608 811kPa, 时间约1 3 min, 然后置入国产2035自膨式Z型金属支架于病变处, 见支架到位及扩张良好后退鞘,穿刺部位加压包扎。术后继续服用西洛他唑片, 至术后第4周时造影后获取标本作组织学检查。1.2.2B 组实验方法同A组, 术后继续服用阿司匹林, 至术后第4 周时造影后获取标本作组织学检查。1.2.3标

19、本获取及组织学检查术后第4 周造影后静脉内快速推注10%氯化钾20 ml 处死实验犬, 迅速获取标本。将标本中间横断一分为二, 一半置10%甲醛溶液中固定, 石蜡包埋、切片, 作普通病理及免疫组化检查。HE 染色观察内膜增生( intimal hyperplasia, IH ) ,Masson 染色观察胶原纤维沉积情况, 应用鼠抗-Actin单克隆抗体, 免疫组化SP 法染色,DAB 显色, 阳性表达为胞浆内棕黄色颗粒, 观察静脉壁平滑肌-Actin表达的情况。另一半置于2.5% 戊二醛溶液中, 经四氧化锇固定, 脱水, 定向包埋, 超薄切片等程序后, 作扫描电镜(H ITACHI, S520

20、, 日本) 及透射电镜(JEM- 1200EX, 日本) 检查。扫描电镜观察内皮细胞形态及内皮损伤情况, 透射电镜观察SMC 增生情况。1.3 统计学处理IVC 压力差和最小血管直径(minimal lumen diameter ,MLD ) 以均数标准差表示, 采用成组设计的样本均数比拟的t检验。当P 值0. 05 时为差异有显著性。2结果 所有支架均成功置入到狭窄的IVC 处, 并且保持通畅, 腔静脉直径有了一定的径宽(见表1)。虽然IVC没有扩张到原来的直径, 或支架没有完全扩张, 但支架置入后, IVC 直径至少扩张3 mm 以上, 没有1 例出现支架移位。4 周后,A 组MLD 较B

21、 组大( P 0. 05)。所有实验犬的IVC 压力差在支架置入后都得到有效改善(见表2)。4 周后,A 组的IVC 压力差降低较B 组为好 ( P 0 05) 结论：西洛他唑能降低CD54, Cd106的表达，同时减缓糖尿病大鼠肾和主动脉及坐骨神经病变的发生开展。【关键词】糖尿病； 西洛他唑； 黏附分子黏附分子(adhesion molecules，AM)是一类调节细胞与细胞间及细胞外基质相互识别，相互结合，起黏附作用的细胞膜外表糖蛋白，在维持正常组织结构、炎症反响、免疫应答等诸多方面起重要作用。研究发现，糖尿病者体内多种AM有显著变化，且用降低AM的药物和抗AM抗体能有效阻止和延缓糖尿病并

22、发症的发生、开展。西洛他唑是一种磷酸二酯酶-3抑制剂，国外报道该药有降低AM的作用。本研究主要对细胞间黏附分子一1(CD54)和血管细胞黏附分子一1(CD106)及p-选择素(CD62P)在糖尿病大鼠中的变化与两洛他唑治疗后的影响。材料与方法一材料 1动物及分组：雄性SD大鼠购于山东省卫生防疫站动物中心，体重200230 g。制模前随机选择8只为正常对照组，其余大鼠给予链脲佐菌素(STZ)70 mgkg腹腔注射，72 h后测血糖16.7mmolL者为造模成功，正常对照组在相同条件下给予等量柠檬酸钠缓冲液腹腔注射。成模大鼠随机分为糖尿病对照组12只，胰岛素组8只，西洛他唑组8只。胰岛素组每只大鼠

23、按14 Ud皮下注射，西洛他唑组每只大鼠按每天18 mgkg灌胃，其余组给予等量蒸馏水灌胃。实验期间，自由饮食，局部大鼠因感染死亡，饲养8周后糖尿病对照组剩余8只，胰岛素组及西洛他唑组各剩余7只。 2试剂：链脲佐菌素(STZ)；鱼精蛋白锌胰岛素(PZI)；西洛他唑；兔抗大鼠CD54 多克隆抗体；小鼠抗大CD106单克隆抗体。异硫氰酸荧光素(FIFC)标记的小鼠抗大鼠CD54、CD62P单克隆抗体及鼠抗人gG多克隆抗体。二、方法 1测定血糖和糖化血红蛋白(HbA1 c)：断尾取血，以微量血糖仪(美国LIFESCAN)测血糖，糖化血红蛋白仪(美国)测HbA1c：(2)测定坐骨神经传导速度：大鼠麻醉

24、后充分暴露坐骨神经，刺激电极置于坐骨神经近端，刺激宽度03ms延时1 ms，刺激间隔900 ms，强度23 V；输出电极置于远端，接收动作电位信号，传人四导生理记录仪(日本NIHON)，扫描速度为1 mscm；两电极间的距离，为神经冲动的传导距离(s)；记录仪上相邻刺激电位和动作电位间的距离为传导上述距离所需时间(t)坐骨神经传导速度为 =st- 。 2 测定大鼠单个核细胞外表抗原CD和血小板外表抗原CD62p ：大鼠麻醉后心脏取血10 ml，2EDTA， . ml抗凝，别离单个核细胞制备富血小板悬液，流式细胞仪(美国BECTONDICKINSON)测定细胞外表的荧光强度。 3免疫组织化学法检

25、测 CD54 、 CD106的表达：大鼠肾脏、腹主动脉做常规石蜡和冰冻切片。用链酶亲和素一生物素过氧化物酶复合物法(SABC)进行免疫组织化学染色。 4统计学处理：使用SAS 6.12统计软件分析数据以x s表示，用自身对照t检验分析治疗前后血糖的变化；用方差分析及q检验分析组间差异。结 果 1血糖和HbA1 c测定：治疗前后各组血糖仅胰岛素组差异有显著意义(P001)；治疗后各组间HbAlc仅胰岛素组与糖尿病组间比拟差异有显著意义(P005)。 2坐骨神经传导速度测定：治疗后西洛他唑(28. 9 ms-1 79 ms-1)与糖尿病组(203 ms-122 ms-1)相比传导速度明显加快(q值

26、分别为350、690；P0.05)。 3单个核细胞外表CD54 和血小板外表CD62P值测定(表1)：糖尿病组单个核细胞外表CD54 的表达明显增加，西洛他唑和胰岛素治疗后有明显的降低(q值分别为75O、882)；胰岛素组与糖尿病组相比，CD62p 的表达有显著(q=493)，西洛他唑差异也有差异，但无统计学意义(q=297)。4肾脏组织CD54 免疫组织化学染色结果：正常大鼠：肾小球内皮及系膜细胞、包曼氏囊壁无明显染色，肾小球系膜区、基底膜均无表达，肾小管组织结构正常，无着色；糖尿病组：肾小球内皮细胞、系膜细胞强阳性棕黄着色，连成片状，包曼囊壁有棕黄着色，肾小球与囊壁粘连，粘连处呈强阳性，并

27、有大量的肾小管变性坏死，并棕黄着色；胰岛素组：内皮细胞和系膜细胞弱阳性表达，近似于正常组；西洛他唑组：肾小球内皮细胞和系膜细胞有少许淡棕黄色，肾小管无明显变性坏死，有少量的着色。 5 肾脏组织CD106免疫组织化学染色结果：正常组：肾小球内皮及系膜细胞、肾小管上皮细胞无着色，肾小管组织结构正常；糖尿病组：肾小球内皮呈强阳性棕黄色，肾小管周小血管内皮也有强阳性着色，肾小管细胞无着色；胰岛素组：肾小球呈稀疏的浅黄色，肾小管周毛细血管那么几无着色；西洛他唑组：肾小球呈环形或线性连续的棕黄色，表达弱，肾小管周小血管轻度着色。 6主动脉CD106免疫组织化学染色结果：正常组：内皮细胞外表有少许断续的浅棕

28、黄色，内膜光滑、规整。糖尿病组：内皮细胞外表呈强阳性，局部内皮细胞有缺损，有平滑肌细胞增生，且排列紊乱，平滑肌层营养小血管及毛细血管呈环形着色，主动脉壁厚不均；胰岛素组：内皮细胞浅着色，内膜光滑规整；西洛他唑组：内皮细胞有弱着色，内膜尚规整，平滑肌有轻度的增生。 讨 论 西洛他唑是一种新型磷酸二酯酶-3抑制剂，抑制血小板和平滑肌内环磷酸腺苷磷酸二酯酶活性，通过抑制血栓素A2而抑制血小板聚集发挥扩血管和抑血小板作用。实验说明，西洛他唑有降低糖尿病大鼠体内黏附分子CD54 、 Cd106以及轻度降低CD62p的作用，并使主动脉病理改变，如平滑肌增生、内膜损伤等明显改善，说明降低黏附分子能减缓糖尿病

29、大血管病变。Nomura等1报道，西洛他唑可显著降低NIDDM血浆中的sCD54(可溶性CD54)、sCd106和sCD62p，从而延缓血管破坏，与本研究结果一致。Oishi等2研究说明，西洛他唑有提血浆高密度脂蛋白水平和降低甘油三酯、胆固醇的作用，对脂代谢紊乱有一定程度的改善；而脂代谢紊乱是糖尿病患者黏附分子升高的原因之一，所以认为，西洛他唑可能局部通过纠正脂代谢紊乱和降低黏附分子而改善糖尿病局部病变。另外，Hayashi等3 研究发现，西洛他唑还可通过提高cAMP水平而使具有诱导凋亡作用的P53、P21表达增加。从而抑制平滑肌增生；用西洛他唑孵育的血管平滑肌细胞可以出现与西洛他唑剂量相关的

30、凋亡，对逆转糖尿病大血管病变有益。Ahn等4 报道，2型糖尿病患者应用西洛他唑1年后，颈动脉内膜厚度明显变薄。本研究结果也说明西洛他唑在降低黏附分子的同时，对糖尿病大血管病变的改善有明显的作用。 本研究还说明，西洛他唑明显改善糖尿病肾脏病变。白细胞在肾小球和肾间质浸润是糖尿病肾病(DN)特征性表现之一。Hirata等5 研究发现，sCD106表达增高与内皮系统功能紊乱及DN的程度有关，可能由于肾小管及肾小球内皮产生CD106增加和或肾脏去除率下降所致。高糖环境下培养的人脐静脉内皮细胞并不能诱导CD54的表达增加，而肾小球超滤过模型-56肾切除的小鼠，CD54的表达及单个核细胞的浸润均显著增加，

31、因此，肾小球高滤过可能是DN时CD54增高的机制之一。本研究发现，西洛他唑可以显著降低肾小 球CD54、CD106的表达水平，可抑制AM水平增加所致的分子炎症机制对肾脏的损伤。 Hayakawa等6 研究发现，糖尿病肾病患者血栓素明显升高，与血肌酐的水平显著相关，西洛他唑有降低血栓素，保护肾功能的作用。故西洛他唑对糖尿病肾病的预防和治疗具有重要意义。Jude等7研究发现，糖尿病伴神经病变患者血浆中的 sCD62P， 和sCD54水平明显高于无神经病变者，这与腓神经传导速度的降低显著相关，sCD62p和sCD62E 明显升高的患者于5年后腓神经传导速度均减慢3 ms以上，认为sCD62p和sCD

32、62E与糖尿病神经病变的患病危险显著相关，sCD62p、sCD62E 和sCD54的水平随腓神经传导速度的减慢而增高即使血糖得到了良好的控制，也不能纠正，因而AM在糖尿病外周神经病变的发生、开展中起重要作用。本实验结果发现，西洛他唑对糖尿病神经病变有较好的治疗作用，作用机理可能有以下2点：(1)西洛他唑通过降低AM从而保护营养神经的外周小血管内皮细胞，同时cAMP引起的血管扩张使神经供血供氧得到一定程度的改善；(2)缺乏cAMP和NO产物目前被认为是糖尿病神经病变的原因之一，西洛他唑通过增加cAMP水平，激活PKA，使NO台成增加有利于控制神经病变8。 因此，西洛他唑在治疗和预防糖尿病神经病变

33、的发生开展有较好的疗效。 本研究中，西洛他唑组血糖有降低趋势，但无统计学意义，西洛他唑治疗和预防糖尿病并发症的机 制可能与其降低Am、抑制血小板聚集，扩张血管增加血流速度的作用有关，而与血糖降低无直接关系。本研究发现，西洛他唑可明显降低黏附分子水平，缓解糖尿病肾脏和大血管及神经病变，可以作为治疗和预防糖尿病并发症的药物而进一步研究。 参考文献 1. Nomura S,Shouzu A，Omoto S,Effect of cilssnzol on soluble adhesion molecules and platelet derived micropartides in patients w

34、ith diabetes . Thromb Haemost,1998,80:388-392 2. Oishi M,Mochizuki Y,Shikata Eet ai Effect of cilostazol on cerebral blood flows in chronic stage of cerebral circulation .Keio J Med,2000,49 suppl 1:A145-147 3. Hayashi S，Morishita R, Matsushita H Cyclic AMP inhibiete proliferation of human aortic vas

35、cul-ar Smooth muscle cells,accompanied by induction of p53 and p21, Hypertension,2001,35:237-243. 4. Ahn CW HC，Park SW. Decrease in carotid intima media thickness after I year of cilostazol treatment in patients with type 2 diabetes mellitus .Diabetes Res Clin pract , 2001,52:45-53. 5. Hirata K, Shi

36、kata K,Madasuda M,etal. Increased expression of betaprost and cilostazol and renal function on serum thrombomodulin levels in diabetic pations .Araneimittelforschung ,200,50:535-583. 6. Hayakawa T, Shouzu A ,Nishikawa M ,etal. Effects of beraprost and cilostazol and renal function on serum thrombomo

37、dulin lecels in diabetic patients .Arzneimittelforschung , 200,50:535-583. 7.Jude EB，Abbott CA,Young MJ,etal,The potential role of cell adhesion molecules in the pathogenesis of diabetic neuropathy .Diabetologia,1998,41:330-336. 8. Inada H，Shindo H Tawata M etal . Cliostazol, a cyclic AMP phosphodie

38、sterase inhibitor ,stimu-lates nitric oxide production and sodium potassium adenssine triphosphatase activity in SH-SY5Y human neuroblastoma cell.life sci,1999,65:1413-1422西洛他唑预防糖尿病大鼠视网膜血管病变效果研究蔡晓频 李光伟 潘 琳 赵静波 李石良 陈仕明糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病常见的微血管并发症。西洛他唑是一个3型磷酸二酯酶的选择性抑制剂 ，在糖尿病性周围血管病变的临床治疗和糖尿病神经病变的实验研究中显示明显

39、的治疗效果。本研究旨在观察西洛他唑对早期DR的影响。 一、材料与方法 8周龄SD雄性大鼠，按体重随机分组：正常对照组(NC)、糖尿病对照组(DC)和糖尿病西洛他唑治疗组(DP)，每组8只。大鼠糖尿病经尾静脉注射链脲霉紊(Sigma公司)45mgkg来诱导。DP组在糖尿病发生后即开始灌胃给药，剂量为西洛他唑50mgkg-1 d-1。药物干预24周后取大鼠眼球，用4% 多聚甲醛固定。 参照胰蛋白酶视网膜血管消化铺片技术 ，制备视网膜血管铺片。行过碘酸雪夫试剂苏术精染色(PAS H)在光学显微镜下，观察视网膜血管及其细胞形态，计数毛细血管细胞中内皮细胞与周细胞数目并计算其比值。取大鼠血测HbAlC和

40、甘油三酯。 统计使用SPSS单因素方差分折，以P005为统计学显著性差异。 二、结果 1体重与生化指标：与NC相比，DC与DP大鼠体重明显减低，血糖明显升高，两组糖尿病大鼠体重与血糖未见明显差异。DC 比NC甘油三酯平均升高864% (P005)，DP甘油三酯与NC无差异，数值略。 2视网膜血管形态改变：正常大鼠视网膜血管消化铺片PAS-H染色可见，视网膜毛细血管粗细均匀，毛细血管壁两种细胞-内皮细胞和周细胞规那么分布。Dc大鼠视网膜毛细血管粗细不等，局部毛细血管扭曲成袢，局部小的动静脉血管也可见扭曲 。其中2只大鼠有典型的早期DR病变。 全部8只DP大鼠视网膜毛细血管粗细均匀，未见明显扭曲。

41、未见典型的早期DR 病变。 3视网膜毛细血管细胞计数：各组大鼠视网膜毛细血管壁周细胞与内皮细胞计数及其比值见附表。 与NC相比，DC视网膜毛细血管细胞呈现周细胞减少，达337 %(P005)，内皮细胞与周细胞比值显著增高，为前者的177% (244007，与NC 138003比，P0.001)。与NC相比,DP周细胞仅减少8. 4%，内皮细胞增加6.8%，两者均无统计学意义。仅内皮细胞与周细胞的比值轻度增高 (1 .60008，P005)。 与DC相比，西洛他唑治疗可显著抑制周细胞的减少，抑制率达75. 1% (P=0. 001)，同时抑制内皮细胞的增多为58. 3% ，使内皮细胞与周细胞的比

42、值显著降低，仅为DC的656% (P0. 001)，仅比NC组升高15.9%。三、讨论 本实验结果显示，西洛他唑治疗显著抑制糖尿病鼠周细胞的减少。 最早期DR特征性病理改变是视网膜毛细血管壁选择性周细胞减少。 西洛他唑预防糖尿病视网膜病变的机制可能是多方面的： 首先，西洛他唑可以扩张小动脉，也可能扩张视网膜小动脉 。其次，西洛他唑 抑制血小板的聚集。 已往在糖尿病大鼠的研究证明，抑制血小板活性的药物可明显改善视网膜的缺血病变 。再次，西洛他唑 可减低糖尿病大鼠血甘油三酯的水平，而脂质代谢异常与DR 的发生有密切关系。 总之，本研究结果说明，西洛他唑对实验性糖尿病大鼠视网膜病变具有预防作用。有可

43、能为糖尿病患者视网膜病变防治提供一种较为有效的手段。三种抗血小板药物在体外对血小板活化的抑制作用研究王建中曹凌袁家颖王淑娟【摘要】 目的探讨阿司匹林、噻氯匹啶和西洛他唑三种药物在体外对血小板活化的抑制作用。方法流式细胞术三色分析三种抗血小板药物在体外对活化血小板膜外表纤维蛋白原受体( FIB-R)和P选择素(CD62P) 表达的抑制作用。结果三种药物对ADP 活化血小板膜外表FIB-R 和CD62P 表达的抑制作用明显不同,西洛他唑能显著抑制FIB-R 和CD62P 的表达;噻氯匹啶抑制FIB-R 表达的作用显著,但对CD62P 表达的抑制较小;阿司匹林对FIB-R 和CD62P 表达的抑制作

44、用较差。结论与阿司匹林、噻氯匹啶相比,西洛他唑是一种较强的抗血小板活化药物,既可抑制FIB-R 的表达而降低血小板的聚集性,又可抑制血小板的释放反响而降低其促凝血活性,在血栓性疾病的防治中有重要作用。 血栓栓塞性疾病是当前危害人类健康,导致病死率最高的原因之一。预防血栓形成(防栓) ,治疗血栓形成(治栓) , 将已形成的血栓溶解(溶栓) ,已成为当前临床上重要的防治方法1 。血小板活化水平增高是导致血栓形成的重要因素。血小板的活化功能虽然对于止血是必不可少的,但其活化水平增高也是许多疾病,包括心肌梗死、卒中和不稳定型心绞痛的重要发病机制2 ,3 。有效的抗血小板药物对于防栓、治栓是极为重要的。

45、然而,目前常用的抗血小板药物对血小板活化的抑制作用仍不十分清楚。血小板活化的特征是形态改变、纤维蛋白原受体(FIB-R) 表达和颗粒内含物的释放,从而导致血小板聚集和血小板血栓形成2 。本研究通过体外试验,观察阿司匹林、噻氯匹啶和西洛他唑三种最常用的抗血小板药物对活化血小板膜外表FIB-R 和P-选择素(CD62P) 分子表达的抑制作用,进一步探讨其抗血小板活化的机制,为临床更有效的选择抗血小板活化药物提供依据。 材料和方法 一、主要试剂与仪器 1. 抗血小板药物: 西洛他唑( cilostazol ) , 噻氯匹啶(ticlopidine) ,阿司匹林(aspirin)。 2. 试剂:单克隆

46、抗体(McAb) ,异硫氰酸荧光素(FITC) 标记的抗血小板纤维蛋白原受体( FIB-R) 的McAb(PAC-1 FITC) 。藻红蛋白( PE) 标记的抗血小板P-选择素(CD62P PE) , 又称颗粒膜蛋白-140(GMP-140) 的McAb。Peridinin 叶绿素蛋白(peridinin chlorophyll protein ,PerCP) 标记的抗血小板膜糖蛋白a 的McAb(CD61 PerCP) 。藻红蛋白标记的鼠免疫球蛋白G(MIgG1 PE) 。以上均为美国BD 公司产品。二磷酸腺苷(ADP) ,美国Sigma 公司产品。RGDS 肽(FIB2R 阻断剂) ,人工

47、合成的精氨酰-甘氨酰-天冬氨酰-丝氨酰多肽(RGDS 肽) , 配成5 mg/ ml H2O ,美国Sigma 公司产品。 3. 流式细胞仪:FACSort 型,美国BD公司产品。 二、方法 1. 采血: 取5 名正常人空腹静脉血, 用106mmol/ L 枸橼酸钠真空抗凝管(美国BD公司产品) 抗凝,血液与抗凝剂比例为91。 2. 药物与血小板作用:西洛他唑用N.N-二甲基酰胺(DMF) 溶解,噻氯匹啶用生理盐水溶解,阿司匹林用无水乙醇溶解, 分别配制成20 000、10 000、2 000、1 000、200mol/ L ,各取5l ,分别参加445l立即采集的抗凝血中轻轻混匀,置室温10

48、 min。另取各三种溶剂5l 作为对照,同上述操作。 3.ADP 活化血小板:在上述参加西洛他唑、噻氯匹啶和阿司匹林的血液中各参加50 l ADP ( 30mol/ L) 并轻轻混匀,置37 激活5 min。 4.荧光素标记的抗血小板单克隆抗体免疫荧光染色:在阴性对照管中加PAC-1 FITC、RGDS 10l(5 mg/ ml) 、MIgG1 PE 和CD61 PerCP 各10l ,在测定管中加PAC-1 FITC、CD62P PE 和CD61 PerCP 各10l ,再分别参加各种浓度药物作用后并经ADP 活化的血液5l 混匀,置室温、避光反响20 min ,立即参加1.0 ml 1 %

49、多聚甲醛(26 ) 混匀,4 冰箱保存,24 h 内在流式细胞仪上分析。 5. 流式细胞术(FCM) 三色分析血小板:将上述用荧光素标记的抗血小板单克隆抗体免疫荧光染色的标本在流式细胞仪上分析,以CD61 PerCP/ SSC 双参数设定血小板门,分析FIB-R(PAC-1) 和CD62P 阳性血小板百分率及其相对表达量(平均荧光强度,MFI) 。 三、抑制率计算 各种不同浓度药物和溶剂对照的血液标本,经FCM分析获得PAC-1 和CD62P 阳性血小板百分率及其相对表达量(平均荧光强度) ,按下式计算ADP活化血小板外表FIB-R 和CD62P 表达受药物的抑制率。抑制率( %) = 结果1

50、. mol/L) 参加正常人抗凝血液中轻轻混匀,37 mol / LADP即可使活化血小板膜外表FIB-R 和CD62P 表达至峰值,FIB-R 和CD62P 阳性血小板百分率分别为( 89 6 ) % 和(84 l RGDS 后再测定血小板膜外表FIB-R 和CD62P 阳性血小板百分率和MFI ,发现RGDS 能竞争性抑制McAb PAC-1 与活化血小板膜FIB-R 的结合。2. 2. 西洛他唑、噻氯匹啶和阿司匹林对活化血小板膜外表纤维蛋白原受体表达的抑制作用比拟:5名正常人血液标本与不同浓度西洛他唑、噻氯匹啶或阿司匹林作用后,经ADP 活化血小板膜外表纤维蛋白原受体和CD62P 表达的

51、平均抑制率变化见图4和图5。讨论 血小板可被多种因素激活,其活化的机制也不尽相同,但最终都是使血小板膜外表暴露纤维蛋白原受体(FIB-R) 并与纤维蛋白原结合使血小板聚集,从而导致血小板血栓形成。活化血小板胞浆中颗粒如mol/ L ADP 浓度作为激活血小板的终浓度;ADP 活化血小板与FIB-R 阻断剂(RGDS) 作用后那么不能与FIB-R 的单克隆抗体(PAC-1) 结合3 。以上结果说明, FCM 检测血小板外表FIB-R 和CD62P 表达评价药物抗血小板活化作用具有较高的灵敏度与特异性。 本研究结果说明,三种药物对ADP 活化血小板膜外表FIB-R 和CD62P 表达的抑制作用明显不同,西洛他唑能显著抑制FIB-R 和CD62P 的表达;噻氯匹啶对FIB-R 表达的抑制作用显著,但对CD62P 表达的抑制作用较小;阿司匹林对FIB-R 和CD62P 表达的抑制作用较差。由此可见,西洛他唑是一种较强的抗血小板