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1、v1.0可编辑可修改第一章简介凝胶电泳是每个做分子生物学的研究者天天都要打交道的基本技术。电泳之后的信息处理与电泳本身同样重要。目前有大量软件可以用于分析电泳结果，要向大家介绍的是 Bio-Rad公司的1D凝胶分析软件Quantity One ( Bio-Rad还有一个做2D凝胶分析的软件 PDQuest)。Quantity One 软件是常用1D凝胶分析软件中功能最强大，自动化程度最高的软件。这个软件的最新版本可以在Bio-Rad的网()免费下载，以供试用或用户升级之用。Quantity One软件的主要功能包括定量分析(Volumes Quick Guide)，电泳条带分析(Band An
2、alysis)差显分析(Differential Display Analysis)，克隆计数(Colony Counting Analysis)等，此外，还可以直接控制Bio-Rad公司的各类图像仪和 ExQuest自动切胶仪，使您的凝胶分析工作变得极为轻松。Quantity One 软件拥有与windows操作系统下绝大多数应用软件相同的友好界面。20Open.ZoonBcnTrarufon胃 ToolR 7. SM loa 邑 8 P.n Imt 9胡3对 Rmnwtfi：Orttk i 阳 t ftn bow$h*deb *4tf i icGw 扣*VJMeehvid lodVakme
3、Cotou TodIVilws Qvick Rid*st畀昌口侵野紅Qij fflQ(z 匚ritenor. 4K)v 1 C I*3telfjli liiK Vi 欣朗1u4 Iln (intensity x mm).条带分析中时条带定莖魁下面介绍用此功能对泳道内的所有条带进行分子量确定，相对浓度分析5 O1al回塹釧如1到團劉BI1E17I旦123.Zoom B 口*Tiansform4Frame LanesSSheJch Frarrw6,Add/Adiutl孔aDetect Bands.9St-andaid% .IDAjrnbut*11hlafeh12Pumt Image.131 打开已
4、保存的文件（如不是Bio-Rad成像系统所摄取的图象，将图象保存为 Tiff 1文件格式, 软件也可进行分析处理）2. Zoom Box，缩放，对图象进行放大观察3. Transform转化，调节图象的对比度黑白4. 确定泳道（lane）,并对泳道进行各种调整（实际实验中泳道往往不是垂直的而出现各种变形）。按下图所示在软件的工具栏中有一Lane Tool图标，包含有更多泳道编辑工具。lu esAuto FumaLut IlsLane Tool*1祿道垢程工具包 口 创S旦!;V.创團剳1FivnL4rfF lameAMVH Anatni* AnchattAuil Lore tJMLisr Lw
5、 Rtfftfrv* Lv* LartS-V/dth.7 一 7 一 ? 一 Af - ? - ? 一 ? 一 f - 7. - 7? - 7 一 ? 一、3鈕 RandAdjtfit EndFefflffvt Bdnd RdBardBand TooIp 条带编辑工具包心E: ands n Ldne- BandAtriibUei5. 选择Frame Lanes，输入图像实际泳道(lane)数并确认。此时图像上泳道的位置上会出现一条条 红线，每条红线就代表一根泳道。6. 选择Add/Adjust Anchors，此时泳道红线上会出现一些小圆圈。这些小圆圈称为锚定点(anchor)， 锚定点规定了
6、泳道走向。当泳道不直时，点击岀现弯曲的泳道部位，就可以增加锚定点。鼠标按住锚定点，可以拖动锚定点，让每根红线始终位于泳道的中间线上。7. Lane Background去除泳道背景。点击该按钮，选择一条适当的泳道点击之，然后在弹岀的对话框中选“ All Lane On ，在“ Rolling Disk Size”中填入适当的数值1。8. Detect Band，检测泳道内的条带，打开出现如下窗口。通过调节sensitivity灵敏度可调节检测岀的条带数，调节Lane Width使代表表带的红色横线与条带宽度差不多宽。中间一行人工编辑按钮可以用来增加/减少条带、调节条带的上、下边界等。打开工具栏
7、中Band Tool条带编辑工具包可看到更多编辑工具(如上图)Bu.li - Prt-wins| S*w | fainte Rrt |Ijrm停曰pOwMvd贰AJ(?PMaruifFiorra金丫軽Chahod吟：心 AR广 KpicJGwd;朴AlPirn*人H编辑按钮NwFiefhaMnSmaSwsfrfrfyUrWlh*J创到*1创 ilJdJd*.创创Bgix CfcrtIh9. Standard输入分子量标准，软件自带有许多Bio-Rad的分子量标准，如你用的是自己的标准，进入New Standard建立新的分子量标准，软件可以选择标准单位是MW（蛋白质）还是 BP （核酸）等（左
8、下图）。在Protein-Standard对话框中输入分子量数值，完成后单击赋值图标（右下图），回到图象文件上单击标准样品的泳道，软件自动将所输的分子量数值和泳道内的条带一一对应。IMfeAvmdngccMgcir；1 |f卢區I g畑冈 tjpAMjKOjiOmMi Oteii |IfiAi10. Band Attribute 条带属性，在完成第 9步以后，软件已自动计算出了其他未知条带的分子量 扌丁开band attribute选择要报告的参数，这里我们选择 Molecular Weight，图象上可以看到所有条带的分子量（红颜色标记），标准分子量为蓝色标记。r工m壬屮j#T 亠 r +*
9、1!., ;4lb -為二器気二二rnlp T .二 =毛卄 4 0 4 R yFIw4-lla*-t- C41490 杓耐卫阳rt柑*#14 二j巴*上T fija.报吉结果输出常见问题及处理：1问：为什么我新买的 Quantity One软件几天前还能用，现在只能使用最基本的功能了？ 答：可能是密码未正确安装，而试用期已过。2问：为什么我重新安装 Quantity One 软件后就不能使用了？答：可能是安装了超过版本限制的高版本Quantity One。3问：我的密码狗还在，可密码找不到了，我该如何填写密码?答：可以暂时将电脑连到 Internet 上，打开Quantity One软件，选
10、择HelpRegister Check License , 或直接打电话 800-820-5567，向Bio-Rad工程师询问。4问：Quantity One软件能否分析通过其它公司成像仪或扫描仪得到的照片？答：可以，但前提是照片必须是未经压缩的TIFF (tif)文件，且数据采集位数是 8位或12位。5问：我拍岀的图片，条带很明显，为什么软件总找不到？答：打开Quantity One软件，鼠标放在图像上，同时按下Ctrl.+T ，看看条带数据是否大于背景，如果不是，则选择ImageInvert Data ，然后同时按下 Ctrl.+B ，选择Invert Display 。6问：为什么我拍出
11、来的照片，总有一根根很粗的背景？答：可能是应该使用滤光片而没有使用，把照明灯管摄入照片。7问：为什么我用 ChemiDoc XRS拍出来的照片，总有一条条向电泳条带的影子？答：可能是在以前使用动态平场功能时，未将样品取岀，导致参考背景始终有以前样品的影子。8问：为什么我的白光转换屏不亮了？答：白光转换屏下方有电源插口和开关，检查电源线是否插紧，开关是否打开。9问：我想割胶，如何打开紫外透射平台的紫外灯？答：将暗箱门关好，将抽屉式紫外透射平台完全拉出，安上有机玻璃保护屏，然后按下“Trans UV ”按钮和“ Prep UV ”按钮。10问：为什么我拍岀来的照片越来越模糊？答：可能是焦距没调好，如果排除这个原因，并且是若干年前买的老机器，请检查滤光片有没有被 腐蚀。
凝胶成像及quantityone中文操作说明
