还原糖测定方法的比较

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1、还原糖测定方法的比较* 李雪梅1，2 杨俊慧2 张利群2 孟庆军2史建国2（1山东大学化学与化工学院 济南 250100）(2山东省科学院生物研究所 济南 250014)摘要：采用手工费林滴定和还原糖测定仪两种方法测定了不同样品中还原糖含量。对测定结果的对比分析表明: 手工费林试剂法易受很多因素的干扰，不同测定人员之间的误差较大；还原糖测定仪的误差范围小、重现性好、准确度较高。 关键词：还原糖，费林试剂，还原糖测定仪 Abstract ：Reducing sugar in saccharfication processes was determined with both analyzer a

2、nd the convenient method of Fehling reagent. The results indicate that the analyzer can determine reducing sugar more accurately.Key words：reducing sugar; Fehling reagent; reducing sugar analyzer. 还原糖测定方法研究和应用已有百年的历史。很多经典的还原糖测定方法如Lane-Eynong、高锰酸钾滴定等方法至今仍在生产、科研实验室广泛使用1。在食品及发酵工业中，费林试剂滴定法常用来测定糖的含量。其特点是

3、简单、方便、设备投入少，如严格按操作要求，可以进行准确的测定。但由于反应温度、摇动力度和次数、滴定速度等因素对测定都有影响，导致不同测定者之间的测定结果出现偏差2。本研究对费林试剂滴定和还原糖仪器测定结果进行了比较，对产生测定误差的原因进行了探讨，为进一步提高费林试剂滴定方法的准确度提供了新的依据。1材料与方法1.1测试材料 1.1.1试剂 费林甲液：硫酸铜35.0 g，1%次甲基兰5 mL，定容至1 000 mL。费林乙液：氢氧化钠126.4 g，酒石酸甲钠117.0 g，亚铁氰化钾9.4 g，定容到1 000 mL。 0.203%、0.416%、0.590%、0.822%标准葡萄糖样品：分

4、别称取烘干葡萄糖2.03 g、4.16 g、5.90 g、8.22 g，定容到1 000 mL。1.1.2还原糖测定仪山东省科学院中日友好生物技术研究中心提供（名称：全自动还原糖测定仪SGD-型）1.2 方法：1.2.1 费林滴定 1.2.1.1 空白试验：取费林林甲乙液各5 mL于250 mL三角瓶中加水10 mL，并预先加入20 mL 0.1%标葡萄糖溶液，混合后于电炉上加热，使溶液在2 min 内沸腾，以每分钟20滴的速度滴定至兰色刚好消失，记录体积 。 1.2.1.2 样品滴定：取费林试液各5 mL，加入样品及适量0.1%标准葡萄糖溶液，使其接近终点，以下操作如空白。滴定时应用0.1%

5、标准葡萄糖溶液以不超过1 mL为宜，否则应另取样重做。根据滴定液的体积计算还原糖含量。1.2.2 还原糖测定仪 操作步骤 ： 接通电源（220V）， 进入待机状态 。（1） 开机：按“开/关”键，自动启动程序。仪器自动进行空白对照测定，完成对照测定后自动进入定标程序，试剂泵启动后，用微量注射器将标准品注入反应池，完成后仪器自动定标；（2） 测定：定标后仪器自动进入测定程序。试剂泵启动后，用微量注射器将待测样品注入反应池，自动完成还原糖测定并打印。 2 结果与分析 分别在6个不同的测定地点（包括生产厂化验室和专业分析部门）用费林试剂滴定法测定不同浓度的标准葡萄糖样品，结果见表1。表1 不同地点对

6、标准葡萄糖样品的测定结果标准葡萄糖/0.2030.4160.5900.822测定1 /0.440.610.931.11测定2 /0.220.440.620.87测定3 /0.400.540.651.00测定4 /0.160.360.560.76测定5 /0.190.460.640.84测定6 /0.180.440.580.90平均值/x0.270.480.660.91标准差/S0.120.090.140.12RSD/%44.418.821.213.2采用还原糖测定仪分别于2月2日（测定1）、2月6日（测定2）、2月8日（测定3）、3月13日（测定4）、3月21日（测定5）和3月20日（测定6）

7、6次对不同浓度的标准葡萄糖样品进行测定，测定结果见表2。表2 不同时间对标准葡萄糖样品的测定结果标准葡萄糖/0.2030.4160.5900.822测定1/0.2410.4660.6130.844测定1/0.2160.4170.5880.813测定3/0.1970.4220.5960.841测定4/0.2030.4110.5970.817测定5/0.2030.4020.5710.796测定6/0.1930.4060.5850.796平均值/x0.2090.4210.5920.818标准差/S0.0180.0230.0140.021RSD/%8.615.462.362.57从测试结果能看出：同一

8、测定地点对不同含量的还原糖测定结果具有可比性；不同地点对同一还原糖样品测定结果差别较大。总体上还原糖测定仪测定的精密度和准确度明显高于费林试剂滴定法。3 讨论Fehling氏试剂由Fehling于1848年设计，即硫酸铜碱性酒石酸甲钠溶液，是最早用于还原糖测定的试剂。其原理是根据还原糖将Cu2+还原成Cu2O 的量来确定还原糖含量。糖和还原的铜量比列关系不是常数，而是依反应时铜过量的多少而不同，一般在1:5 1:7之间，属于非化学计量反应3。因此，费林试剂测定还原糖需要首先进行标定，根据标定数据表查得相应的还原糖含量。费林试剂滴定时要求保持微沸状态，目的是为了去除溶解氧对指示剂颜色变化产生的干

9、扰。在滴定时通入氮气隔绝空气，就可以避免次甲基蓝被空气中的氧氧化为蓝色，保证了滴定结果的稳定性和重现性（叶海辉等，2001）4。臧瑾康等（1997）5采用自身指示剂既斐林试剂中酒石酸钾钠络合物的深蓝色的消失至K2FeCu(CN)6为终点，取代国标中直接滴定法次甲基兰指示剂，减少了终点误差，简化了操作，节约了试剂。滴定速度快慢和样品溶液消耗量多少都会影响测定结果。在严格控制每两秒一滴的滴定速度下，用0.1%葡萄糖标准溶液滴定10.00 mL碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各5.00 mL)约消耗10.00 mL。当用样品溶液滴定时也应该消耗10.00 mL左右，才能使二者保持条件相同，测定结果才准确6

10、。还原糖测定仪是根据费林试剂法测定还原糖的原理建立的一种还原糖自动测定系统，能自动控制反应温度、搅拌力度、滴定速度等测定条件，并自动将生化反应信号转化为电信号，快速完成还原糖的测定，消除了人为操作的各种误差。同手工费林试剂滴定法相比，可以更准确地测定各种样品中还原糖含量。 参考文献1 Peres KG, Oliveira CT, Peres MA, Raymundo Mdos S, Fett R.Sugar content in liquid oral medicines for childrenJ. Rev Saude Publica, 2005, 39(3):4864892史建国,杨俊慧,

11、马耀宏,张利群. 费林氏法测定还原糖误差分析J.发酵科技通讯,2002,4:12 3 张惟杰，糖复合物生化研究技术M,杭州：浙江大学出版社，1994:784 叶海辉，何秀芬,王秀兰. 费林试剂滴定法测定还原糖方法的改进J. 热带农业科学, 2001,3:565 臧瑾康,李伯才,张朝霞. 食品中还原糖测定的国家标准法的改进J.成都大学学报（自然科学版）, 1997, 16(3):25286李存富,刘爱月,胡玉叶. 样品溶液消耗量对还原糖测定结果的影响J. 食品工业科技, 1997, 6:80本项目为山东省科技厅资助项目，编号200387第一作者： 李雪梅，1977，女，博士，助理研究员，研究方向为生物传感及生化分析。本文通讯作者：史建国