肺炎病原学诊断PPT课件

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1、社区获得性肺炎病原学社区获得性肺炎病原学 病毒病原 合胞病毒、腺病毒 流感病毒A和B 副流感病毒1、2、3 偏肺病毒、鼻病毒 细菌病原 肺炎链球菌、流感嗜血杆菌 金黄色葡萄球菌 军团菌属、结核杆菌等第1页/共35页社区获得性肺炎病原学社区获得性肺炎病原学 非典型性病原 肺炎支原体 肺炎衣原体 沙眼衣原体 病毒感染为25 % 35%，细菌感染为2154 % ,非典型病原如支原体、衣原体感染为7 % ,两种以上病原混合11%。第2页/共35页不同年龄组儿童的常见微生物病原不同年龄组儿童的常见微生物病原年龄组病原体主要临床表现出生至20 日B 族链球菌 早发型败血症的肺部表现。G- 肠道细菌 常为院

2、内感染,经常在生后1 周才发现。巨细胞病毒 全身巨细胞病毒感染的肺部表现,伴先天性感染的其他体征存在。3 周至3 月 沙眼衣原体 由母体生殖道感染,出现发热及进展性、亚急性间质性肺炎。RSV 发病的高峰在27 月龄,常以喘息为特点,在各季或早春多见。副流感病毒3 同RSV 感染非常相似,在婴儿晚期影响很小,在冬季不流行。肺炎链球菌 最常见的细菌性肺炎病原。婴幼儿年龄组 百日咳杆菌 主要引起支气管炎,但在严重病例也引起肺炎。金黄色葡萄球菌 可引起重症肺炎常合并渗出。第3页/共35页不同年龄组儿童的常见微生物病不同年龄组儿童的常见微生物病原原年龄组病原体主要临床表现4 月至4岁RSV、腺病毒、副流

3、感流感病毒、鼻病毒是引起年幼儿肺炎的最常见病因。 肺炎链球菌 最常引起大叶性肺炎,但也可引起其他形式的肺炎。流感嗜血杆菌其他血清型和不定型株在发展中国家可引起肺炎肺炎支原体 在这一年龄组中的年长儿中主要引起肺炎结核分枝杆菌 在此病原感染高度流行地区是肺炎的重要病因。第4页/共35页不同年龄组儿童的常见微生物病原不同年龄组儿童的常见微生物病原年龄组病原体主要临床表现5 至15 岁 肺炎支原体 这一年龄组儿童肺炎的主要病因肺炎衣原体 可能是这一年龄组年长儿童肺炎的一个重要病因肺炎链球菌 大叶性肺炎的最主要病原,但可能也引起其他形式肺炎。结核分枝杆菌 在此病原感染的高发地区是肺炎的常见病因,并可能在

4、青春期和妊娠期病情恶化 第5页/共35页儿童儿童CAP 病原学诊断方法病原学诊断方法 病原菌分离培养 免疫学方法检测病原的特异性抗原抗体 分子生物学诊断方法第6页/共35页病原培养分离病原培养分离 标本种类 血液 胸水 支气管肺泡灌洗 痰液，咽、鼻分泌物第7页/共35页血液培养血液培养 肺炎伴发菌血症机会510，重症和免疫抑制患者则较高。 血标本采集方便、安全，且污染机会少、特异性高，它们在病原学诊断上具有特殊意义。 重症特别是免疫抑制宿主肺炎，应尽早、多次采血作细菌和真菌培养。 第8页/共35页血液培养血液培养 血培养标本要求 采集必须在使用抗菌药物之前 采用全自动血培养仪配备的儿童专用血培

5、养瓶 每次2瓶，在不同部位采血 采血量，儿童3-5ml，婴幼儿1-2ml。 采集后的血培养瓶应立即送往实验室第9页/共35页采血份数与阳性率之间的关系采血份数与阳性率之间的关系Blood Culture Positivity Rates91.699.399.6868890929496981001st2nd3rdCulture SetsBlood Cultures Positive (% )Weinstein et al., 1983第10页/共35页采血量与阳性率的关系采血量与阳性率的关系第11页/共35页胸水胸水 对大多数伴有胸腔积液的肺炎，无论确诊与否，应该行胸腔穿刺术采集标本。胸腔积液或

6、脓胸均应做厌氧培养。 胸水是无污染标本，不论被检测出的微生物数量多少，都被认为是病原体。 细胞计数和pH测定，腺苷脱氨酶（ADA）测定对鉴别结核胸膜炎具有较好价值。 胸水的抗原检测用于疾病诊断，如流感嗜血杆菌b型、肺炎链球菌、军团菌或新型隐球菌。 第12页/共35页痰标本痰标本 痰培养结果应结合临床表现、直接镜检、细胞学筛选、定量或半定量培养以及所发现的微生物的致病力等加以解释。 可用于普通细菌、分枝杆菌、真菌的检测，但不适于检测厌氧菌。 在无菌条件下，用负压吸引法吸取患儿会咽部以下的下呼吸道的分泌物，置灭菌三通管内。第13页/共35页痰标本痰标本 痰涂片镜检每低倍镜视野25个中性粒细胞。 痰

7、标本也可以用直接免疫荧光法快速检测出下呼吸道的病毒感染。第14页/共35页支气管肺泡灌洗液支气管肺泡灌洗液 对于不能咳出或诱导出足够的痰液患者，支气管肺泡灌洗液可作为获取标本进行病原菌培养的一种方法。 支气管肺泡灌洗液在检测需氧菌、真菌、军团菌和分枝杆菌等感染时可提高阳性检出率。有研究表明特异性高达89100%。 支气管肺泡灌洗液经低速在玻片上制成细胞标本涂片，可以用直接免疫荧光法快速检测出下呼吸道的病毒感染的8种病毒。 鳞状上皮细胞1中性粒细胞80为合格标本。第15页/共35页标本采集和送检标本采集和送检 痰和支气管肺泡灌洗液必须在使用抗菌药物之前或停药1天后留取标本。标本采集后1h内必须立

8、即进行实验室处理。室温下延搁2h会降低肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等苛养菌的分离率，铜绿假单胞菌等革兰阴性杆菌则过度生长。第16页/共35页我院呼吸道分离的主要细菌我院呼吸道分离的主要细菌（2008-2009） 肺炎链球菌869株（14 % ） 金黄色葡萄球菌692株（11%） 流感嗜血杆菌662株（10%） 肺炎支原体878株（16.3%）第17页/共35页细菌培养菌落形态细菌培养菌落形态 肺炎链球菌 、金黄色葡萄球菌 第18页/共35页细菌培养菌落形态细菌培养菌落形态第19页/共35页MP培养培养第20页/共35页MP培养培养第21页/共35页MFA检测呼吸道病毒检测呼吸道病毒第22页/共35

9、页MFA法检测呼吸道病毒法检测呼吸道病毒第23页/共35页病原微生物的抗体检测病原微生物的抗体检测 血清学检查通常用于检测非典型病原体如肺炎支原体（MP）、肺炎衣原体（CP）、军团菌。 常用方法有间接免疫荧光试验（IFA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫法（RIA）、颗粒凝集试验（PA）等。 第24页/共35页MP血清学检查血清学检查 ELISA法 检测MP-IgM、 MP-IgG 定性或定量 PA法 检测MP-IgM 确诊MP急性感染则应强调双份血清(间隔2周)恢复期抗体滴度上升4倍或下降至原来的1/4或抗体滴度持续1:160。 第25页/共35页CP血清学检查血清学检查 微量免疫

10、荧光法(MIF)、酶联免疫吸附实验(ELISA) 抗体检测3种：IgM,IgG和IgA 初次感染(原发感染)时，IgM于发病后3周出现，IgG于发病后6一8周出现，而IgA反应较弱或不出现。 再次感染(重复感染)时，IgG常在1一2周内出现，且效价可以很高，但往往没有IgM出现或其效价很低。第26页/共35页军团菌血清抗体检测军团菌血清抗体检测 尿军团菌抗原检测：酶联免疫吸附试验检测病人痰或尿液的嗜尿军团菌抗原检测：酶联免疫吸附试验检测病人痰或尿液的嗜肺军团菌抗原。肺军团菌抗原。 血清学检查血清学检查: 间接免疫荧光法或酶联免疫吸附试验检测特异性间接免疫荧光法或酶联免疫吸附试验检测特异性IgM

11、抗体，如效价抗体，如效价1：128或双份血清效价呈或双份血清效价呈4倍以上升高可倍以上升高可做出确定诊断。做出确定诊断。第27页/共35页军团菌检测军团菌检测分类分类检材检材方法方法注意事项注意事项细菌学基因学 (PCR)血清学尿抗原检测尿抗原检测痰培养分泌物支气管肺泡灌洗液阳性率低下阳性率低下同上Leg基因mip 基因军团菌特异性嗜肺军团菌特异性血清微量凝集IFA, DFA双份血清效价呈4倍增长单份血清效价 256尿液ImmunochlomatographyELISARIA嗜肺军团菌嗜肺军团菌1型特异性型特异性发病60天内，但免疫缺陷病人可延长第28页/共35页IFA检测呼吸道病原抗体检测呼

12、吸道病原抗体第29页/共35页分子生物学技术分子生物学技术 优点直接从临床标本中快速、准确地检测出包括苛养菌在内的细菌.检测耐药基因对耐药菌进行流行病学研究PCR方法 方法随机扩增DNA多态性分析限制性片段长度多态性分析PCR多重PCR PFGE第30页/共35页MP分子生物学检测分子生物学检测 PCR检测MPP1粘附蛋白：根据肺炎支原体P1粘附蛋白设计PCR引物： P1: 5-GCCACCCTCGGGGGCAGTCAG-3 P2: 5-GAGTCGGGATTCCCCGCGGAGG-3 扩增产物209bp第31页/共35页双重双重PCR简便、快速检测军团菌简便、快速检测军团菌 根据军团菌16SrRNA基因和mip基因序列设计合成引物，可以扩增 38 6bp 16SrRNA基因和 206bp mip基因片段。 用该方法对军团菌标准参考菌株和47份临床标本进行了检测。 结果：通过一次PCR反应，不仅能够检测嗜肺军团菌，而且能够检测非嗜肺的军团菌，从而克服了单一引物应用时的不足。第32页/共35页红霉素耐药肺炎链球菌红霉素耐药肺炎链球菌PFGE图图第33页/共35页 谢谢！第34页/共35页感谢您的观看！第35页/共35页