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1、TUNEL染色（TMRRed）一、实验原理：细胞凋亡中染色体DNA的断裂是个渐进的分阶段的过程，染色体DNA首先在内源性的核酸水解酶的作用下降解为50-300kb的大片段。然后大约30%的染色体DNA在Ca2和Mg2依赖的核酸内切酶作用下，在核小体单位之间被随机切断，形成180200bp核小体DNA多聚体。DNA双链断裂或只要一条链上出现缺口而产生的一系列DNA的3-OH末端可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸化酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3-末端，从而可进行凋亡细胞的检测，这类方法一般称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端
2、标记法(TUNEL)。二、相关试剂：1、酶缓冲液:vial1:EnzymeSolution2、标记液:vial2:LabelSolution3、固定液：4%多聚甲醛4、清理液：PBS(pH7.4)5、透性处理液(Permeabilisationsolution):含0.1%TritonX100的0.1%柠檬酸钠的缓冲液，新鲜配制三、其他设备：1、湿盒2、荧光倒置显微镜或激光共聚焦显微镜(confocal)四、染色步骤：1标本预处理：(1)用4%多聚甲醛固定组织20分钟(15-20C);(2)PBS清洗30min;(3)置于透性处理液(0.1%TritonX-100的0.1%柠檬酸钠)中冰上孵育
3、2min(2-8C)2、TUNEL反应液：(1) 从标记液(vial2:LabelSolution)中吸出100ul用于2个阴性对照(50ul/个)；(2) 将50ul酶缓冲液(vial1:EnzymeSolution)加入到剩余450ul的标记液中充分混合均匀，得到500ulTUNEL反应液(50ul/样本，检测10个样本)。3、标记：(1)PBS清洗3min,3次；(2)吸干样品周围的液体；(3) 往组织切片上滴加TUNEL反应液(覆盖整个切片)，阴性对照加标记液；(4)湿盒中避光孵育60min，注意避光；(5) PBS清洗3min,3次；抗荧光淬灭圭寸片液圭寸片，用荧光倒置显微镜或激光共聚焦显微镜(confocal)检测(激发波长520-560nm，最大540nm,绿光；检测波长570-620nm，最大580nm，红光
TUNEL染色-冰冻切片-
