微生物标本接种学习教案

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1、会计学1微生物标本微生物标本(biobn)接种接种第一页，共86页。第1页/共85页第二页，共86页。第2页/共85页第三页，共86页。第3页/共85页第四页，共86页。第4页/共85页第五页，共86页。体积体积% 阳性血培养结果阳性血培养结果(ji gu) vs. 采集的套采集的套数数%99%89%80%真阳性真阳性(yngxng)20 ml/套套Mayo Clinic Study第5页/共85页第六页，共86页。用于培养的血液用于培养的血液(xuy)体积体积 体重 磅 千克体积 (ml)/穿刺总量/2次穿刺1% 全血体积% 总血液体积199042204040 ml 1-2%第6页/共85页

2、第七页，共86页。采集采集(cij)血培养时间的重要性血培养时间的重要性9% +14% +9% +11% +发热高峰发热高峰(gofng)前小时前小时发热高峰发热高峰(gofng)前小时前小时发热高峰期间发热高峰期间发热高峰后发热高峰后1-12小时小时166 病人病人105 病人病人199 病人病人258 病人病人Thomson et al. 1991. ASCP. Mayo Clinic Study第7页/共85页第八页，共86页。立即立即(lj)获得足够血液并且开始抗获得足够血液并且开始抗生素治疗生素治疗从不同部位获得从不同部位获得2-3套血培养套血培养(40-60ml血液血液) 最好最好

3、(zu ho)在在5分钟内采集分钟内采集#1#2第8页/共85页第九页，共86页。确定检测确定检测(jin c)阳性的培养时间阳性的培养时间阳性报警阳性报警(bo jng)时间时间第9页/共85页第十页，共86页。随着随着(su zhe)时间推移败血症病原菌的变迁时间推移败血症病原菌的变迁% 住住院患院患者者(hunzh)血培血培养阳养阳性结性结果果#1 pathogen From UW, Madison and G.Washington Univ., St. Louis第10页/共85页第十一页，共86页。血培养血培养(piyng)存在的主要问题存在的主要问题如果如果(rgu)皮肤定植的细菌

4、没有被杀皮肤定植的细菌没有被杀死，这些细菌将通过针头被吸入血培养死，这些细菌将通过针头被吸入血培养瓶并在瓶中生长瓶并在瓶中生长这些细菌这些细菌(主要为凝固酶阴性葡萄球菌主要为凝固酶阴性葡萄球菌) 引起导管相关性败血症引起导管相关性败血症 (住院患者血培养住院患者血培养第一位第一位)医生不能将真的凝固酶葡萄球菌感染和医生不能将真的凝固酶葡萄球菌感染和皮肤定植菌皮肤定植菌“污染污染”相区分，因此他们相区分，因此他们用万古霉素治疗患者用万古霉素治疗患者第11页/共85页第十二页，共86页。皮肤皮肤(p f)凝固酶阴性葡萄球菌定植于输液管凝固酶阴性葡萄球菌定植于输液管第12页/共85页第十三页，共86

5、页。皮肤不是皮肤不是(b shi)无菌的无菌的; 定植细菌定植细菌“污染污染”血培养血培养第13页/共85页第十四页，共86页。葡萄球菌在塑料葡萄球菌在塑料CVC表面生长表面生长(shngzhng)形成生物膜形成生物膜第14页/共85页第十五页，共86页。污染污染(wrn)细菌细菌血培养血培养(piyng)污染定义为在几次血培养污染定义为在几次血培养(piyng)中单个血培养中单个血培养(piyng)下列细菌阳性下列细菌阳性:凝固酶阴性葡萄球菌凝固酶阴性葡萄球菌棒状杆菌棒状杆菌 微球菌微球菌丙酸杆菌丙酸杆菌 芽孢杆菌芽孢杆菌第15页/共85页第十六页，共86页。% 污污染染(wrn)Studi

6、es from Baylor, Nashville, & France第16页/共85页第十七页，共86页。第17页/共85页第十八页，共86页。第18页/共85页第十九页，共86页。第19页/共85页第二十页，共86页。导管相关导管相关(xinggun)感染的诊断感染的诊断敏感性和特异性敏感性和特异性检测管腔内的检测管腔内的 & 外周细菌外周细菌不需要移走导管不需要移走导管可靠性和可重复性可靠性和可重复性易操作易操作快速回报快速回报感染感染(gnrn)的微生物可以分离的微生物可以分离对患者安全对患者安全关键点关键点: 患者患者(hunzh)必须有菌血症必须有菌血症第20页/共85页第二十一页

7、，共86页。检测检测(jin c)导管相关感染导管相关感染移走导管移走导管 Maki Roll (半定量半定量(dngling)超声波降解和稀释超声波降解和稀释 (定量定量(dngling)通过管腔抽吸通过管腔抽吸 (定量定量(dngling)保留导管保留导管管腔刷管腔刷定量定量(dngling)培养培养 (CVC & 外周血外周血)达到阳性的时间达到阳性的时间 (CVC & 外周血外周血)第21页/共85页第二十二页，共86页。哪部分哪部分(b fen)用于培养用于培养第22页/共85页第二十三页，共86页。Maki 滚动滚动(gndng)法法第23页/共85页第二十四页，共86页。导管导管

8、(dogun)尖阳性培养结果尖阳性培养结果第24页/共85页第二十五页，共86页。苛养菌苛养菌不要不要(byo)放置常规血培养放置常规血培养5天天由如下微生物引起的可疑的败血症或心内膜炎:霉菌(组织胞浆菌 , 镰刀菌, 等等(dn dn)秕糠马拉癣菌 军团菌属巴尔通体新型隐球菌Q-热惠普尔病支原体属其他病原菌 3 分离分离(fnl)管管咨询咨询ID医生医生血清血清Ag凝集凝集 + 分离培养分离培养第25页/共85页第二十六页，共86页。干预措施可以减少导管干预措施可以减少导管(dogun)相关性感染相关性感染 手消毒手消毒 用洗必泰进行皮肤消毒用洗必泰进行皮肤消毒 在穿刺在穿刺(chunc)过

9、程中完全无菌操作过程中完全无菌操作 锁骨下静脉穿刺锁骨下静脉穿刺(chunc) 移去不必要的中央静脉插管移去不必要的中央静脉插管血管内导管相关性感染预防血管内导管相关性感染预防(yfng)指南指南. MMWR Recom Rep 2002:51(RR10)1-29第26页/共85页第二十七页，共86页。每年每年850万例尿路感染万例尿路感染, 90%为女性为女性个妇女在一生中会得个妇女在一生中会得UTI下行性感染：血流下行性感染：血流肾脏肾脏膀胱（金黄色膀胱（金黄色葡萄球菌葡萄球菌(p to qi jn)，酵母菌，结核，酵母菌，结核分枝杆菌）分枝杆菌）上行性感染：尿道上行性感染：尿道膀胱膀胱肾

10、盂肾盂 血流血流第27页/共85页第二十八页，共86页。Anatomy of Urinary Tract尿路的解剖图尿路的解剖图侧面图膀胱(png gung)耻骨(chg)子宫颈尿道(niodo)输卵管卵巢子宫阴道直肠肛门第28页/共85页第二十九页，共86页。尿道炎或急性尿路综合征尿道炎或急性尿路综合征膀胱膀胱(png gung)炎炎-膀胱膀胱(png gung)的炎症的炎症肾盂肾炎肾盂肾炎-肾脏的炎症肾脏的炎症 Age年龄年龄(ninlng) 5 10 20 30 / 60有症状的有症状的无症状的无症状的第29页/共85页第三十页，共86页。第30页/共85页第三十一页，共86页。大肠大肠

11、(dchng)埃希菌与膀胱上皮细埃希菌与膀胱上皮细胞相互作用胞相互作用伞状粘附伞状粘附(zhn f)膀胱膀胱(png gung)上皮细胞上皮细胞第31页/共85页第三十二页，共86页。尿液运输尿液运输(ynsh)方法方法无需无需(wx)冷冷藏藏 第32页/共85页第三十三页，共86页。第33页/共85页第三十四页，共86页。第34页/共85页第三十五页，共86页。传统传统(chuntng)的尿培养的尿培养使用校准过的接种环使用校准过的接种环(0.001 or 0.01 ml)垂直插入装有尿液的无菌容器垂直插入装有尿液的无菌容器(rngq)中中 在琼脂平板上分区划线：血平皿，麦康凯平皿或在琼脂平

12、板上分区划线：血平皿，麦康凯平皿或CLED平皿平皿大多数尿路病原菌能在血平皿上生长大多数尿路病原菌能在血平皿上生长麦康凯平皿有鉴别功能，为革兰阴性杆菌的选择性培养基麦康凯平皿有鉴别功能，为革兰阴性杆菌的选择性培养基第35页/共85页第三十六页，共86页。尿培养尿培养(piyng)的划线方式的划线方式第一区第一区 = 50,000 cfu/ml第二第二(d r)区区= 75,000 cfu/ml第三区第三区= 100,000 cfu/ml沿中心线向下沿中心线向下(xin xi)= 50,000 cfu/ml长向边缘长向边缘= 100,000 cfu/ml第36页/共85页第三十七页，共86页。尿

13、培养尿培养(piyng)的培养的培养(piyng)基基5%血平皿（美国用羊血，欧洲用马血）血平皿（美国用羊血，欧洲用马血）伊红美兰平皿（伊红美兰平皿（EMB）大肠埃希菌为金属绿）大肠埃希菌为金属绿麦康凯平皿麦康凯平皿 LF vs NLF 胱氨酸胱氨酸-乳糖乳糖-低电解质平皿（低电解质平皿（CLED）显色显色(xin s)平皿平皿(BBL公司的公司的CHROMagar ，Hardy BluEcoli Biplate) CUTI（Oxoid公司）公司）; CPSID2（生物梅里埃公司）（生物梅里埃公司）; UriSelect （Biorad公司公司）; Rambach; others第37页/共8

14、5页第三十八页，共86页。蛋白蛋白(dnbi)胨，酵母提取物，色原物胨，酵母提取物，色原物科玛嘉显色科玛嘉显色(xin s)培养基（培养基（BBL）大肠大肠(dchng)埃希菌埃希菌肠球菌肠球菌无乳链球菌无乳链球菌腐生葡萄球菌腐生葡萄球菌第38页/共85页第三十九页，共86页。同样同样(tngyng)的接种物在科的接种物在科玛嘉显色培养基（玛嘉显色培养基（BBL）上生）上生长长大肠埃希菌，肠球菌大肠埃希菌，肠球菌(qijn)和变形杆菌在血平皿上生长和变形杆菌在血平皿上生长CHROMagar Orientation (BBL)第39页/共85页第四十页，共86页。第40页/共85页第四十一页，共

15、86页。第41页/共85页第四十二页，共86页。第42页/共85页第四十三页，共86页。评价尿培养评价尿培养(piyng)的标准的标准病人标本特征有意义的菌落形成单位/ml（非皮肤污染）无症状者清洁留取100,000有症状者，不固定的清洁留取10,000 1-2种机会致病菌。若多于2种则认为尿液被污染有症状者，性活跃女性清洁留取100个纯菌落肠杆菌科菌男性清洁留取1000个机会致病菌任何人内置导尿管100,000任意数量机会致病菌任何人通过直接导管获得100任意数量机会致病菌任何人通过外科手术从肾脏获得任意数量（肉汤增菌，厌氧菌）任何人Percutaneous bladder tap经皮膀胱吸

16、取任意数量（肉汤增菌，厌氧菌）任何人Any任何标本任何数量金黄色葡萄球菌不同人有争议任何数量的酵母菌第43页/共85页第四十四页，共86页。第44页/共85页第四十五页，共86页。第45页/共85页第四十六页，共86页。nWBC 25 鳞状上皮细胞鳞状上皮细胞25 可接受可接受?第46页/共85页第四十七页，共86页。用革兰氏染色来评估呼吸道标本是用革兰氏染色来评估呼吸道标本是否否(sh fu)合格合格10鳞状上皮细胞鳞状上皮细胞/LPF拒收拒收(j shu)！弹性纤维弹性纤维(xinwi)，中性粒细胞，中性粒细胞多，鳞状上皮细胞少，有代表性多，鳞状上皮细胞少，有代表性的好标本的好标本第47页

17、/共85页第四十八页，共86页。形态学鉴别形态学鉴别(jinbi)要诀要诀球菌球菌革兰阴性双球菌革兰阴性双球菌肾型豆子样，平肾型豆子样，平行行(pngxng)纵轴排列纵轴排列=奈瑟菌属奈瑟菌属革兰阳性双球菌革兰阳性双球菌拉长，单个纵拉长，单个纵轴，末端呈点状（柳叶刀状）轴，末端呈点状（柳叶刀状）=链球链球菌（肺炎链球菌）菌（肺炎链球菌）第48页/共85页第四十九页，共86页。实际实际(shj)革兰氏染革兰氏染色色革兰阴性革兰阴性(ynxng)双球菌：在生殖道标本或脑脊液中多为奈瑟菌属；在下呼吸道分泌物中提示为卡双球菌：在生殖道标本或脑脊液中多为奈瑟菌属；在下呼吸道分泌物中提示为卡他莫拉菌他莫拉

18、菌革兰阳性双球菌提示肺炎链球菌革兰阳性双球菌提示肺炎链球菌第49页/共85页第五十页，共86页。形态学鉴别形态学鉴别(jinbi)要诀要诀球菌球菌革兰阳性革兰阳性(yngxng)球菌成对，成链球菌成对，成链较小、拉长的、从不较小、拉长的、从不4联排列联排列=链球菌属链球菌属革兰阳性球菌呈堆排列，通常很圆，细胞较大，革兰阳性球菌呈堆排列，通常很圆，细胞较大，不拉长，可成对，但链不超过不拉长，可成对，但链不超过4个细胞。可能因脱个细胞。可能因脱色过度色过度(gud)呈革兰阴性。但如果不是肾型话不呈革兰阴性。但如果不是肾型话不可能为革兰阴性菌。可能为革兰阴性菌。第50页/共85页第五十一页，共86页

19、。链状的革兰阳性球菌：提示链状的革兰阳性球菌：提示(tsh)链球菌链球菌短链，短链，6个细胞）提示化脓链球菌或草绿色链球菌个细胞）提示化脓链球菌或草绿色链球菌革兰氏阳性革兰氏阳性(yngxng)球菌球菌第51页/共85页第五十二页，共86页。更多的革兰氏染色更多的革兰氏染色(rns)形形态学态学呈堆或四联排呈堆或四联排列的革兰阳性列的革兰阳性(yngxng)球球菌提示葡萄球菌提示葡萄球菌菌第52页/共85页第五十三页，共86页。革兰阳性革兰阳性(yngxng)杆菌的形态学鉴别要杆菌的形态学鉴别要诀诀革兰氏阳性杆菌可以革兰氏阳性杆菌可以(ky)很规则，如果是需氧菌则非常可能是芽胞杆菌属，如果是厌

20、氧则非常可能是梭菌属。如果很小，可能是不呈链状的李斯特菌属，如果呈链状则很可能是乳酸杆菌属。很规则，如果是需氧菌则非常可能是芽胞杆菌属，如果是厌氧则非常可能是梭菌属。如果很小，可能是不呈链状的李斯特菌属，如果呈链状则很可能是乳酸杆菌属。革兰阳性革兰阳性(yngxng)不规则的杆菌（多形态），一端比另一端粗。常相互吸附或呈篱笆样排列不规则的杆菌（多形态），一端比另一端粗。常相互吸附或呈篱笆样排列=棒状杆菌属或丙酸杆菌属棒状杆菌属或丙酸杆菌属第53页/共85页第五十四页，共86页。细胞细胞(xbo)内内细菌细菌第54页/共85页第五十五页，共86页。革兰阴性革兰阴性(ynxng)双球双球菌菌第55

21、页/共85页第五十六页，共86页。多形态提示混合多形态提示混合(hnh)厌氧菌感染厌氧菌感染第56页/共85页第五十七页，共86页。外型奇特的酵母菌，不像米老鼠的耳朵或白色念珠菌椭圆形外型奇特的酵母菌，不像米老鼠的耳朵或白色念珠菌椭圆形孢子。报告孢子。报告“真菌成分和酵母样细胞真菌成分和酵母样细胞(xbo)”。不要遗忘革。不要遗忘革兰阴性杆菌。兰阴性杆菌。第57页/共85页第五十八页，共86页。第58页/共85页第五十九页，共86页。第59页/共85页第六十页，共86页。第60页/共85页第六十一页，共86页。第61页/共85页第六十二页，共86页。第62页/共85页第六十三页，共86页。第6

22、3页/共85页第六十四页，共86页。第64页/共85页第六十五页，共86页。第65页/共85页第六十六页，共86页。第66页/共85页第六十七页，共86页。第67页/共85页第六十八页，共86页。第68页/共85页第六十九页，共86页。第69页/共85页第七十页，共86页。第70页/共85页第七十一页，共86页。长期使用氨基糖苷类抗生素，但无效者有基础疾病免疫(miny)低下者第71页/共85页第七十二页，共86页。绝大多数住院患者绝大多数住院患者(hunzh)(hunzh)需要做厌氧血培养需要做厌氧血培养第72页/共85页第七十三页，共86页。第73页/共85页第七十四页，共86页。n腔液、

23、脑脊液n窦道标本： 可插入小导管用注射器吸出窦道损伤部位(bwi)取材做活组织检查第74页/共85页第七十五页，共86页。n到达实验室后，35度孵箱培养第75页/共85页第七十六页，共86页。第76页/共85页第七十七页，共86页。n,为厌氧菌.第77页/共85页第七十八页，共86页。第78页/共85页第七十九页，共86页。第79页/共85页第八十页，共86页。第80页/共85页第八十一页，共86页。第81页/共85页第八十二页，共86页。第82页/共85页第八十三页，共86页。第83页/共85页第八十四页，共86页。n放室温阴凉处可保存两个月第84页/共85页第八十五页，共86页。NoImage内容(nirng)总结会计学。上行性感染：尿道膀胱肾盂 血流。在琼脂平板上分区划线：血平皿，麦康凯平皿或CLED平皿。患者应在用药前或停用抗生素后至少三天留取尿液，尿液中勿加防腐剂。取适量痰液化剂放入痰标本盒内混匀放置30分钟，。血培养中长(zhn chn)链的革兰阳性球菌（6个细胞）提示化脓链球菌或草绿色链球菌。25-37孵育3周，37更好。采集CSF是为了诊断脑膜炎，细菌性脑膜炎分为急性和慢性两种。从脓肿底部或脓肿壁的取样，效果最好第八十六页，共86页。