PCR实验室质量体系文件的编写

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1、-PCR实验室质量体系文件的编写*省临床检验中心罗识奇一、质量体系文件的含义： 质量体系文件是实验室检验工作的依据，是描述实验室质量保障工作的一整套文件，而且它应满足质量体系有效运行的需要。1、质量体系文件具有以下特点：1.1 法规性：经批准实施的质量体系文件具有法规性，必须执行；1.2 适应性：所有文件规定都以最实际，最有效的要求加以确定，以达到适用的目的；1.3 唯一性：一个机构只有唯一的质量体系文件系统，一项质量活动只能规定唯一的程序；1.4 见证性：质量体系文件是质量体系运行的见证。2、质量体系文件的编写原则：2.1 系统协调原则：文件上下层之间应相互衔接，相互协调，不应互相矛盾，要构

2、成一个有机整体；2.2 科学合理原则：文件不是对质量体系的简单描述，而是要依据卫生部关于临床基因扩增检验实验室管理办法（以下简称办法）及中华人民*国国家标准检测和校准实验室能力通用要求（ISO导则170251999）的有关规定，结合本实验室工作特点和管理现状，作到科学、合理、有效指导临床基因扩增检验工作；2.3 可操作实施原则：编写质量体系文件的目的在于贯彻实施，指导实验室检验工作，所有编写的质量体系文件始终要考虑到可操作性，便于实施、检查、记录、追溯；2.4 文件的装订应是活页的：质量体系是动态的，以便发现问题，便于修改；2.5 文件应为实验室人员方便地得到，并有效地使用。3、质量体系文件的

3、内容：3.1 质量手册：按评审准则描述的质量体系；3.2 程序文件：描述质量体系所涉及到的各个部门的职能活动，管理和各项具体检测程序；3.3 质量计划：质量目标、计划修订和完成的规定；3.4 质量记录：表格、报告、各类记录。二、基因诊断实验室质量手册书写的基本格式： 基因诊断实验室质量体系文件可按基因诊断实验室质量手册形式命名。1、封面：实验室名称和标志，质量手册的标题、编号、发行版次、及发放登记号；2、批准页：批准人签名、生效日期、持有人或部门（分受控和不受控两类）。批准页实例质量手册手册版号：A生效日期：年月日总 页 数：（包括此页）批准人：日 期：年月日副本控制：(不)受控类编 号： 持

4、 有 人：3、修订页：修订页用修订表的形式说明质量手册各部分修订状态。修订表基本形式修订表受控质量手册的持有者应负责在收到修订页后立即将旧页次换下。4、手册目录：列出手册文件序号、文件编号、文件标题及页码。5、前言，即实验室简介，需提供实验室名称地址、通讯方式、经历和背景、规模、性质以及对社会的各项承诺，如公正性声明，要体现对卫生部办法精神的贯彻落实情况。6、质量方针和目标：陈述质量方针和目标，并说明质量方针和目标如何为实验室全体人员所熟悉理解和执行。例：*医院的质量方针、目标是：准确及时、严谨认真公正*、持续改进质量手册；保证体系为： 建立一系列的工作制度和标准操作程序 建立室内质控、室间质

5、评的质量保证体系 建立质量监督机制 不断纠正、完善质量体系7、质量管理机构框图：一般有一定的任职条件，有相应的职责和权力。例图：8、基因诊断实验室工作制度9、基因诊断实验室标准操作程序10、基因诊断实验室记录、报告单及表格三、基因诊断实验室应建制度Pro(Procedure)的编写：1、程序文件的管理和维护制度1.1 目的：基因诊断程序文件是指导临床基因扩增检验活动的法规性文件，属内部受控文件，不得擅自修改、涂改，不得遗失、外借翻印。为保持其现行有效和持续适应性，并确立因条件变化进行修改的程序。1.2 编写依据：1.2.1 ISO/IEC1702501999检测和校准实验室能力的通用要求因卫生

6、部临床基因扩增检验实验室技术验收表（check list）是根据ISO/IEC17025而设计1.2.2 卫生部临床基因扩增检验实验室管理暂行办法及临床基因扩增检验实验室工作规*1.3 适应*围：临床检验标本；1.4 内容：程序文件应包含下列内容：文件名称、编号、页号、总页数 例：页眉页底应有：编写人： 审核人： 批准人： 生效日期：年月日及总页码。1.5 编制及职责：程序文件由PCR实验室负责人主持编写、修订、审核并保持它的现行有效性。由科主任批准和颁布实施，并负责解释。1.6 发放与持有者责任：程序文件由科主任批准发放，发放与回收要登记签字，由PCR实验室负责人保管，并组织全室工作人员认真

7、学习，了解内容，熟悉其中各项规定，程序文件执行情况纳入实验室目标管理，与奖惩挂钩。持有者调任时，要收回该程序文件。1.7 修订：科室任何工作人员均可提出对程序文件的修改建议，文件修改须经有关人员讨论，PCR实验室负责人根据条件变化提出是否修改的决定，如作小的修改则可在修改页上进行，修改文件经科主任审核批准后，并填写入程序文件修改页。如果文件须作重大修改，PCR实验室负责人可进行改版。新版程序文件经科主任批准后生效，收回旧版，并予以销毁，登记签字后发出新版，保证工作现场只有唯一的，最新的使用版本。2、基因诊断实验室工作制度Pro：2.1 基因诊断实验室分区情况：各区实物用品应有明显标识，严禁混用

8、；2.2 实验室工作人员均持证上岗；2.3 为有效防止后扩增区产物的污染，实验工作人员应遵循单向走动原则。前PCR区标本处理区PCR扩增区PCR产物分析区，严禁人和物品反向流动，进入每个区前必须更换有该区特殊标识的工作服和拖鞋，工作服及拖鞋均有专门的衣柜存放，每个区均有专用的一次性手套并有固定存放处。2.4 实验室工作人员必须严格按照PCR实验室操作程序进行，实验开始前必须先做好室内及工作台的清洁消毒，离心管、吸头等一次性用品均需高压灭菌处理。2.5 各实验区之间的试剂及样品传递有条件的应通过传递窗进行。2.6 非本室人员未经允许不得进入，工作人员在工作时也不能随意进出，以免造成不应有的污染。

9、2.7 实验结束后应用10次氯酸钠溶液消毒实验台面，并用紫外线照射实验室，试验中使用过的吸头、离心管等应置于10次氯酸钠溶液中浸泡，消毒后集中焚毁（1）。2.8 每天下班前处理好废弃物品，关好水、电、门窗。2.9 定期校准和维护好PCR仪、离心机、水浴箱、冰箱等仪器设备。万元以上的仪器设备应做好使用登记工作。2.10 引用文件及图表：（1）基因扩增诊断实验室工作制度。Pro: （为本制度在质量手册文件中的编号及页码。下同） 3、实验室人员配置及培训制度：3.1 目的：为保证实验室有足够数量的称职工作人员，特建立本制度。3.2 适应*围：基因扩增实验室的人员配置、培训考核及管理等。3.3 人员配

10、制情况；3.4 人员要求；3.5 人员培训计划：有计划及记录表(1)；3.6 人员管理：有实验室人员一览表(2)，并建立所有工作人员档案(3)，包括人员学历、任职资格、发表论文、科研成果等相关资料复印件装订成册（活页）。3.7 引用文件及图表。（1）人员培训记录表；（2）实验室工作人员一览表；（3）实验室工作人员技术档案。4、实验室内务管理制度：4.1 目的：为使实验室内务管理有序、在控而建立本制度。4.2 适应*围：本制度适用于基因扩增实验室内务管理。4.3 制度细则：根据各自医院及科室相关规定编写5、实验室材料的购买和管理制度5.1 目的：为保证PCR检测所使用的试剂及耗材供货渠道和质量的

11、稳定、可靠，而建立本制度。5.2 适应*围：适用于PCR实验室所购的试剂盒、实验耗材。5.3 试剂和耗材的选购：5.3.1 检测试剂应与扩增仪相配套，而且需三证齐全的商品试剂；5.3.2 TiP头必须使用有滤芯的PCR专用TiP头；5.3.3 其余耗材由医院统一进货、管理等。5.4 试剂及耗材的验收：5.4.1 内外包装检查按照试剂质检标准操作程序执行(1)；5.4.2 上述检查在到货时完成，同时进行记录(2)；5.4.3 试剂的性能检查可见试剂质检标准操作程序(1)；5.4.4 耗材的实验检测：如：离心管的检测可用加温和高速离心的办法检测其有无爆开或漏液情况。带滤心吸头可用适配加样器配合吸取

12、适量液体看其有无堵孔及漏现象发生，经上述检查，合格即可启用，不合格则退货。5.5 试剂及耗材的储存：一般验收后的PCR试剂应存放于20冰箱内，无菌处理前的耗材存放于试剂准备及贮存室，根据日常工作量，定期定量处理后放置于样品制备室和扩增室，实验室负责人应定期检查库存、定期购置试剂，并作好记录(3)。5.6 本制度引用的文件及登记本：（1）试剂质检标准操作程序（2）试剂及耗材验收登记本（3）试剂及耗材订购登记本。6、仪器设备的管理制度：6.1 目的：为保证PCR实验室仪器设备得到妥善管理，使用的仪器设备保持在良好的工作状态，特建立本制度。6.2 适应*围：基因扩增实验室所有的仪器设备。6.3 制度

13、细则：6.3.1 基因扩增实验室涉及的主要仪器设备：扩增仪、恒温金属浴箱、高速离心机、高速冷冻离心机、可调移液器、混匀器、冰箱、超净工作台、移动式紫外灯等。6.3.2 建立设备档案管理制度: 仪器设备的一般情况：序号、名称、制造商、接收日期、接收状态、启用日期、目前放置地点、接收人员签字等，应有仪器设备一览表(1)，设备的一般情况及使用人应用卡片形式贴在仪器表面；仪器设备的相关文件应有：仪器设备的说明书、操作手册、保修卡、 相关仪器的管理负责人； 仪器设备的损坏、故障、修理须在登记本上记录如下内容：日期、设备名称、损坏或故障原因、修理单位、人员及修理结果，记录人员签名(2)。6.3.3 仪器应

14、有工作状态标识，正常使用者贴绿色标签，有故障维修暂停使用的贴黄色标签，不能使用者贴红色标签（禁用）。6.3.4 仪器需按要求定期作校准或检定，应有校准标识、注明校准检定日期及下次校准或检定日期，并应作记录，具体仪器校准见仪器设备校准SOP。6.3.5 基因扩增实验室仪器实行严格分区使用，并用不同颜色标识。6.3.6 仪器设备的报废由室负责人提出申请后由院有关人员统一处理。6.3.7 为保持仪器设备工作状态的稳定，应对其进行定期的维护和保养，具体见仪器维护保养文件。6.3.8 为使扩增仪处于稳定工作状态，在该电脑上不得使用非本室的外来软盘，不能在电脑上加载其它程序和软件，在使用本室软盘进行资料备

15、份时，需预先杀毒方可使用。6.4 引用文件及表格：（1） 基因扩增诊断实验室仪器设备一览表（2） 基因扩增诊断实验室仪器设备维修登记本。7、仪器设备的使用制度7.1 目的：为保证仪嚣设备得到正确的操作使用以满足检测质量要求及保证仪器的使用寿命。7.2 适用*围：基因扩增诊断实验室所有仪器设备。7.3 制度细则：7.3.1 仅为本实验室工作人员有权使用实验室的仪器设备7.3.2 本室工作人员在使用仪器前必须熟悉仪器的性能和操作程序，必须严格按照仪器标准操作程序SOP（standard operation procedure）操作（见各仪器操作SOP）。7.3.3 因科研活动的需要，使用本实验室仪

16、器的非本室人员必须首先熟悉本程序的各项规定，并由实验室负责人对其使用仪器考核认可后，方可使用。7.3.4 仪器使用严格遵守分区使用的原则，并遵守标准操作程序。7.3.5 主要仪器使用后应做好使用记录和日常维护（见仪器设备的管理制度）。8、仪器设备的维护保养制度8.1 目的：为保持仪器设备稳定良好的功能状态而建立。8.2 适应*围：基因扩增诊断实验室所有设备。8.3 制度细则：8.3.1 仪器设备的维护保养操作见相关SOP，并做好每天仪器的保养、周保养、月保养。 8.3.2 建立仪器设备维护保养登记本（见各仪器设备保养登记本），效果及记录由实验室主任负责检查、监督。8.4 引用登记本：各仪器设备

17、保养登记本。9、仪器设备的校准制度。9.1 目的：为保证检验仪器设备的有效性和准确性而建立。9.2 适用*围：本制度适用于满足基因扩增实验室检测需要有可能对检测结果造成误差的仪器设备。主要有：扩增仪、温度计、恒温水浴箱，可调移液器等。9.3 制度细则：9.3.1 上述设备在投入使用时要有校准计划，并按照仪器校准程序校准。(1)9.3.2 如在检测中发现存在结果有漂移或偏差及其它可疑情况时，通过分析对可疑设备进行校准。9.3.3 仪器设备维修后需进行校准，方可重新使用。9.3.4 校准的有效标识：经校准的设备在仪器标签上注明本次校准的日期和结果及下次校准的预定日期。9.3.5 可调式移液器的校准

18、顺序：按单一流向规定，首先校准试剂准备区及贮存区，然后依次校准样本处理区及PCR扩增及产物分析区，每校准完一个区的移液器，将其放回原处后，再取下一个区的移液器，进行校准。9.3.6 建立校准登记本（见各仪器设备校准登记本：记录每次校准的情况并将校准的结果送交科质量负责人审阅核准。10、实验检测操作管理制度：10.1 目的：PCR检测是整个临床扩增检验最主要的过程，为使其有序，在控，特建立。10.2 适应*围：PCR检测：样本处理，核酸提取纯化，扩增产物分析整个过程。10.3 制度细则：10.3.1 核酸提取、纯化、扩增产物分析整个过程的具体操作见项目SOP文件及仪器使用SOP文件。(1-2)1

19、0.3.2 试剂的分装在试剂准备区及贮存区内进行，最好由传递舱送至样本制备区；样本处理和核酸提取在样本制备区内进行，加入模板后的反应混合液由传递舱送至扩增区；PCR扩增及产物分析在扩增区进行。10.3.3 样本的管理依据样本管理制度及相应的SOP(3)。10.3.4 检测时标本的唯一性标识中的“序号”作为检测过程中的“检测号”进行传递。 10.3.5 试管或其它盖体分离的容器，检测号标识于管身1/3处。10.3.6 移取所需体积的标本后，立即盖紧原始标本管盖，将标本继续保存于20冰箱。 10.3.7 实验结果的记录依据实验记录的管理制度。(4)10.3.8 每次检测过程必须有相应的室内质控，室

20、内质控的进行依据相关SOP文件并作好记录。(5-6)10.3.9 检测完毕的血清原始标本保存一月。10.4 引用的文件和表格：1、2、3、4、5、6（本文略，写作时要明确标出）。11、实验室检测结果报告的管理制度。11.1 目的：检测结果的报告是检验过程的最终输出，为使报告生成、发放、管理受控，特建立。11.2 适应*围：适应于基因扩增实验室所有的临床检测项目的结果报告。11.3 程序细则：11.3.1 检测结果报告应准确、清晰、明确和客观；11.3.2 实时荧光PCR测定结果数据要经分析，避免因非特异性荧光而造成假阳性结果，根据质控品及室内质控判断PCR扩增的有效性，只有当质控品的扩增结果符

21、合项目SOP有关条件时，才可发出报告，否则应重新测定。11.3.3 定量测定的拷贝数/mI报告，并有相关检测的参考*围。如果高于测定方法线性*围上限则对样本稀释再测，结果乘以稀释倍数；如结果低于测定方法线性*围下限，则报告小于测定*围下限，而不能报告为“O”、阴性或其它各种形式的结果。11.3.4 每份报告均应包含以下信息： 标题； 报告的唯一性标识； 病人基本情况：*、性别、年龄、科别等； 检测标本的特性和状态； 检测标本接收的日期和进行检测的日期； 采用的检测方法、检测的设备； 检测标本的参考值或参考*围； 实验操作及校核人员的签字及签发日期。11.3.5 报告单的发放应遵守科室的有关规定

22、： 报告单分为二部分，如门诊和住院部应写清楚如何与分别发放和接收报告单？ 报告单遗失时怎么办？ 怎么补发？ 需邮寄的报告单如何发？ 检测报告的*性，应制定为病人的*措施，如查询人员在无任何有效证据（件）时不能提供其任何人的检测结果信息。12、实验室记录的管理制度12.1 目的：实验室记录是质量证明资料及质量体系运作的主要组成部分，为使资料的记录、保存状态在控，特建立。12.2 适应*围：适应于实验过程中产生的数据，文本资料的记录和保存，主要有：病人标本信息、实际操作记录、实验检测结果、原始申请报告单，仪器使用记录、环境温度、湿度记录等。12.3 制度细则：分为书面记录和电子记录。12.3.1

23、书面记录： 在样本接收室接收标本，接、收者均需在可接收登记本上签字；(1) 登记本上记录病人信息包括：*、性别、检测项目、标本类别、编号等，将标本带入样本处理室（血标本闭盖离心后）处理，登记本留在样本接收室，对不符合要求的标本在“拒收标本登记本”上记录。(2)并作相应处理； 登记本上的记录不能涂改，需修改时可用红笔在修改内容上加双杠并在备注栏说明； 检测过程中的记录：专用实验的记录本，不同区记录本不能混用，试剂准备及贮存室记录每天检测所用的试剂情况，如：名称、批号、数量等； 样本制备室记录检测样本数及本室内进行的操作过程。在扩增和产物分析室记录质控结果和分析数据；(3) 环境温度、湿度(4)及

24、冰箱温度记录(5)； 实验记录保存于各自实验操作区内，至少保存两年以上，两年后交科室建档封存。 12.3.2电子记录： 结果的电子保存； 保存的文件标识； 电子保存的软件备份及总汇打印均应有相应的规定与说明。12.3.3 注意事项 不论是书面记录、每日总汇打印还是电子记录均须注意*性：要写具体措施； 从PCR扩增室带出的实验记录具有潜在的污染可能，操作人员应严格遵守分区管理制度和防污染措施。12.4 引用的文件及表格：1、2、3、4、5（本文略，写作时要明确标出）。13、室内质控管理制度13.1 目的：为严格控制基因扩增实验室中各步骤的操作程序，保证测定结果的准确性，以达到预期的质量。13.2

25、 适应*围：本制度适用于基因扩增实验室临床检验项目的全过程。13.3 制度细则：13.3.1 由于核酸扩增的高敏感性，为避免假阳性和假阴性，必须对RNA和DNA分析的各步骤进行质量控制，以保证测定结果的准确性和可重复性；13.3.2 临床标本的质量控制：按各项目SOP进行；13.3.3 试剂的质量控制：按各项目SOP进行；13.3.4 质量控制操作步骤： 血清质量控制品：外购卫生部或厂家质控品，自制质控品要溯源，或比对试验； 质控品要有处理分析判断； 每次检测质控结果须有记录； 失控原因及纠正措施须有记录。13.3.5 室内质控图的使用方法： 制订最适合本室的质控计划； 通过观察图形的规律性变

26、化进行误差分析，消除误差途径，如:曲线漂移、趋势性变化、连续多点分布在靶值一侧、其它规律性变化(周期性)等。 通过图形的资料对比进行误差分析，解除误差途径，如每个月的月底将项目的全部质检血清检测结果*和s与该批测定的*和s进行比较，如果*发生了变化，说明准确度发生变化提示有非随机误差存在。如果当月s不同则表明检测的精密度发生了变化。14、生物防护与安全制度14.1 目的：为预防实验室工作人员在工作中被感染和防止交叉污染。14.2 适应*围：基因扩增实验室工作人员。14.3 制度细则：14.3.1 污染途径： 空气传播:临床标本中的污染源在空气中传播； 直接传播：工作中偶然针刺，碎玻璃划伤直接传

27、染； 皮肤粘膜接触：临床标本中的感染源通过破损皮肤粘膜接触造成的感染；14.3.2 预防措施：A、B、C、D等,要有针对性地写出措施。15、实验室废弃物的处理制度：15.1 目的：为保证检验质量，防止交叉污染，并保护工作人员身体健康。15.2 适应*围：实验室所有废弃标本、使用过的耗材等。15.3 制度细则：15.3.1 实验室放置装有垃圾袋的有盖污物桶，并贴有明显的颜色标识；15.3.2 有潜在传染性的样品（如血、分泌物等），应将此类样品置污物袋内交由保洁员负责，焚烧或按医院规定统一处理；15.3.3 试验过程中使用过的离心管、吸头须置于10次氯酸钠中浸泡后置污物袋中，交由保洁员负责，按医院

28、规定统一处理；15.3.4 实验使用过的一次性手套、帽子、口罩等置污物袋中交保洁员负责，按医院规定统一处理；15.3.5 检测使用过的扩增管装入一次性塑料袋密封后置污物桶，交由保洁员，经高压消毒后按医院规定统一处理。16、实验室清洁消毒处理制度：16.1 目的：为保证实验室工作环境清洁卫生，防止交叉污染；16.2 适应*围：适应于实验室工作环境、实验台面、工作间、移液器等的清洁消毒工作；16.3 制度细则：16.3.1每个实验室均应有各自的清洁用具，不可混用；16.3.2 实验室清洁应按试剂准备区及贮存室、样本处理室、扩增及产物分析室的方向进行；16.3.3严格遵守实验室清洁消毒及污染应急处理

29、标准操作程序(1)、及紫外线消毒标准操作程序(2)、并做好记录(3-4)；16.3.4在实验过程中如发生标本或试剂外溅或扩增仪内毛细管断裂，应立即按实验室清洁消毒及污染应急处理标准操作程序处理。16.4 引用的文件和表格：1、2、3、4(本文略，各自手册要标出)。17、化学试剂管理制度：17.1 目的：保证化学试剂的安全保存和充足备用；17.2 适应*围：适应于基因扩增实验室使用的各种化学试剂。17.3 制度细则：17.3.1 实验室所购化学试剂验收登记后，分类编号，放于干燥冷暗处；17.3.2 易燃、易爆、易挥发、易风化、易潮解试剂，均应密封，单独分别保存于干燥、冷暗、安全处；17.3.3

30、强酸、强碱要分开存放；17.3.4 药品标签，应有药品名称、分子式、分子量、级别、杂质含量、批号、厂名等，无标签者禁用；17.3.5 应有计划地申请购买试剂，以补充消耗和扩充需要的新品种。18、抱怨处理制度：18.1 目的：重视被检查单位或个人的抱怨和申诉，正确处理“抱怨”更加有效地改进实验室质量体系。18.2 适用*围：适用于患者、临床医护人员针对检测结果质量、服务质量的投诉和/或抱怨。18.3 制度细则：18.3.1抱怨的接受 工作人员在接受抱怨时首先要做到语言文明，热情接待； 工作人员对抱怨申诉应记录，包括抱怨者*、地址、联系方式、抱怨内容；18.3.2 抱怨的处理 如能当时处理的抱怨应

31、给予及时解决，并记录处理结果；(1) 不能当面答复的抱怨应约定反馈时间，根据情况尽快召集相关人员商讨处理方案，尽可能给予满意答复，并记录答复内容；(1) 抱怨的处理以抱怨者的满意为目的，但必须遵重科学为原则，在不违背科学原则，医疗行为规*的基础上，争取抱怨者最大程度的理解； 科室不能妥善解决的抱怨，应移交医院医务处（科）遵循院医务处（科）处理程序和办法。18.3.3 抱怨的善后： 对抱怨中反映出的影响到实验室质量及质量体系有效性的问题，实验室负责人应会同科质量负责人及其他相关人员及时分析存在问题，提出纠正措施，并由实验室负责人监督执行； 如涉及到服务方式及质量问题，应参照科内有关制度对违反科室

32、管理制度的人员给予相应处罚； 投诉处理记录存档保存两年。18.4 引用的文件及表格：略，写作时应明确标出。四、基因诊断实验室标准化操作程序SOP(standard operating procedure)的编写：1、实验室清洁消毒及污染应急处理程序：1.1 目的：实验室用具的清洁消毒及污染的应急处理，防止和减少实验污染，保证实验室工作正常运行。1.2 *围：整个与基因扩增相关工作场所：1.3 工作程序：1.3.1 各实验区清洁消毒工具只可专用，不可混用，要有该实验区明显标识；1.3.2 实验完毕后，离心管、吸头须置于10次氯酸钠溶液中浸泡后与患者样品一起高压灭菌后处理；1.3.3 试验中使用的

33、离心管、吸头在使用前必须经高压灭菌消毒在消毒有效期内使用；1.3.4 每天对使用过的移液器用10次氯酸钠溶液进行擦拭。每2周1次对移液器进行高压消毒；1.3.5 实验完毕及时消除扩增仪内的毛细管，装入密封塑料袋中，与其它生物污染品一同交医院焚烧处理；1.3.6 用10次氯酸钠（或75酒精）清洁实验台面和传递舱，并用可移动紫外灯照射处理半小时； 1.3.7 每周次工作服交院洗衣房洗涤消毒，不同实验的工作服隔天洗涤；1.3.8 实验过程中如发生标本或试剂外溅，立即用浸有10次氯酸钠液的卫生纸掩盖30分钟后，再用75酒精擦拭，并用清水擦洗，并做相应记录；(1)1.3.9 扩增仪内的毛细管在扩增中若有

34、断裂或外溅，对所有可能污染物均要按上述方法严格消毒处理，并做相应记录；(1)1.4 引用表格:本文略。2、紫外消毒标准操作程序：2.1 目的：对实验台面和实验室内环境进行消毒，防止和减少实验污染；2.2 适应*围：本实验室的工作区和实验台面及相关的设备；2.3 操作程序：2.3.1 实验开始前开启各工作区的紫外灯，定时照射1小时，由实验室工作人员进行；2.3.2 实验结束后对工作台面用可移紫外消毒灯调至实验台上方6090cm处照射30分钟，由实验室工作人员进行；2.3.3 每天工作结束后开启各工作区的紫外灯，试剂准备室定时照射2小时，样本处理室和核酸扩增及产物分析室应照射过夜，由实验室工作人员

35、进行。3、试剂的质检操作程序：3.1 目的：为保证实验室对试剂盒的验收质量而建立。3.2 适用*围：适应于基因扩增实验室所购的临床诊断试剂。3.3 程序细则：3.3.1 试剂盒内外包装的质检： 外包装的检查：包装应完整无污无损，标识清楚，厂家名称、品名、批准文号、生产及有效日期； 内包装检查：内包装是否有破损，泄漏，内装物是否齐全、是否有相应的使用说明书等；3.3.2 试剂盒性能质检： 收到试剂后，目测试剂是否处于冻存状态； 核对试剂品种和数量，检查试剂批号； 及时将试剂转入20冰箱保存，并将上述检测核对情况记录在册； 启用新批号试剂前一周对新批号试剂进行效验实验。效验实验要求设置空白对照，阴

36、性对照、阳性对照各一。阳性标准品梯度为102、103、104、105、106； 如出现以下情况中任何一种的判断为试剂不合格，不能用于临床检测： 空白对照出现扩增。如扩增曲线CT值大于25，需重复实验确证试剂污染；阳性对照和阴性标准品均未检出而阳性标准品检出率大幅下降，表示试剂失效或检测灵敏度大幅下降； 阳性对照未检出，阳性标准品检测正常，提示样品提取液可能存在问题。 重复新旧提出液阳性对照实验，确定提取液失效问题。更换提取液后该批试剂方可使用； 空白对照无扩增，阴性对照有扩增，排除其它污染可能性后，提取液存在污染可能，单独用 提取液点样上机，出现扩增，需更换提取液后方可使用该批试剂； 阳性对照

37、检出，阳性标准品未检出或扩增曲线明显系统性CT值偏大5个循环以上，提示阳性 标准品存在问题，更换阳性标准品后该批试剂方可投入使用； 空白对照、阴性对照无扩增，阳性对照正常检出，阳性标准品导致的标准曲线之斜率（ 2.63.4）、截距（2634）、相关性（0.98)均在使用*围内，表明该批试剂良好，可以 投入临床使用，将实验结果写入记录(1)。3.3.3 使用记录本：1.试剂质检记录本。4、温度计校准操作程序：4.1 目的：保证温度计的精确性。4.2 适应*围：适用于本实验室所使用的温度计。4.3 程序细则：4.3.1 温度计校准每年进行一次；4.3.2 由院设备科人员送计量局对温度计进行校准；4

38、.3.3 经校准过的温度计可作为恒温金属浴温度校准的参照。4.4 引用表格：（1）仪器设备校准登记表。Tab5、恒温金属浴校准标准操作程序：5.1 目的：确保恒温金属浴温度的准确性。5.2 适用*围：适用于本室现用的恒温金属浴。5.3 程序细则：5.3.1金属浴的设定温度与实际温度可能存在差异，应定期对其进行校准（每月一次）。5.3.2 采用比对校准方法，即用经计量局校准的温度计插入金属浴的加热孔中，调节恒控至一定的温度（实验常用温度：100），待恒温灯亮并持续10分钟以上，观察温度计显示温度与设定温度是否一致。5.3.3 做好校准记录。5.4 引用表格：（1）仪器设备校准登记本。 Tab5.

39、5 支持性文件： 恒温金属浴箱使用说明书。6、可调移液器校准标准操作程序:6.1 目的：确保可调移液器的准确性。6.2 适应*围：适应于各种品牌、可调和多通道移液器。6.3 程序细则：6.3.1 校准环境和用具要求： 室温：2025，测定中波动*围不大于0.5； 电子天平：放置于无尘和无震动影响的台面上，房间尽可能有空调，称量时，为保证天平内的湿度（相对湿度6090），天平内应放置一装有10ml蒸馏水的小烧杯，小烧杯10ml体积。 测定液体：温度为2025的去气双蒸水。6.3.2 选定标准体积。 拟校准体积； 可调式移液器标定体积的中间体积； 最小可调体积（不小于拟校准体积的10），如为固定体

40、积可调式移液器，则只有一种校准体积。6.3.3 校准步骤： 将移液器调至拟校准体积，选择合适的吸头； 调节好天平； 来回吸吹蒸馏水3次，以使吸头湿润，用纱布拭干吸头； 垂直握住移液器，将吸头浸入液面23mm处，缓慢(13秒)一致的吸 取蒸馏水； 将移液器以30度角放入称量烧杯中，缓慢一致地将移液器压至第一档，等待13秒，再压至第二档，使吸头里的液体完全排出； 记录称量值； 擦干吸头外面； 按上述步骤称10次； 每次测定值的均值作为最后加样器吸取的蒸馏水重量，按表1所列蒸馏水Z因子计算体积； 按校准结果调节移液器。 无以上校准条件者也可写送院设备科或计量局校准。 附表：蒸馏水Z因子7、扩增仪校准

41、标准操作程序7.1 目的：保证循环仪正常运行的准确性和精密度，以获得准确可靠的检验结果。7.2 适应*围：适应于扩增仪。7.3 程序细则：7.3.1 新安装的仪器以生产厂商的合格证明为校准依据；7.3.2 循环仪每年由厂商对其温控系统进行1次校准，（购买设备时应写进合同）。7.3.3 仪器使用过程中如发现温度有漂移或怀疑实验结果不理想的可能原因是循环仪时，应及时与厂商联系对仪器进行校准；7.3.4 仪器故障维修后应对仪器进行校准，合格后方可使用；7.3.5 做好仪器的校准记录(1)；7.4 引用的表格：（1）仪器设备校准登记表 Tab7.5 支持性文件： 扩增仪使用说明书。8、扩增仪维护保养标

42、准操作程序：8.1 目的：对扩增仪进行维护，以保证仪器正常运行。8.2 适应*围：本SOP适用于扩增仪。8.3 程序细则：8.3.1 扩增仪在不使用时，闭盖以减少灰尘进入到加热腔;8.3.2 如果发现棱镜上有灰尘，立即用干净的棉棒和酒精擦拭；8.3.3 每个月用干净的棉棒和酒精擦拭加热腔内壁及棱镜；8.3.4 如发生毛细管断裂，立即用沾有10次氯酸钠的抹布擦拭，再用无水乙醇擦拭，并用紫外灯照射过夜；8.3.5 透镜的清洁：在反应舱底部有一个透镜，仪器使用过程中，透镜可能会沾上灰尘、水份，影响实验结果，可用专用擦镜纸直接擦去，也可蘸取酒精擦拭透镜。8.4 引用表格：（1）仪器设备维护保养登记表

43、Tab8.5 支持性文件：扩增仪操作手册。9、恒温金属浴箱维护保养标准操作程序。9.1 目的：对恒温金属浴进行维护保养，以保证仪器正常运行。9.2 适应*围：适应于恒温金属浴；9.3 程序细则：9.3.1如果发现仪器表面有污迹，则用10次氯酸钠清洁表面或用75酒精擦拭；9.3.2 每月用棉签沾水清洗模块上的锥孔，以保证Ependoff管与锥孔壁接触充分，导热良好；9.3.3 如果实验过程中出现液体不慎泄漏，立即用软布蘸10次氯酸钠反复清洗，然后再用75酒精擦拭；9.3.4 定期用经校准的温度计测量其实际温度并进行校准（每月一次）。9.4 引用表格：（1）仪器设备维护保养登记表：Tab 9.5

44、支持性文件：恒温金属浴箱使用说明书。10、式离心机维护保养标准操作程序。10.1 目的：对离心机进行维护，保证仪器正常运行。10.2 适应*围：适应离心机。10.3 程序细则：10.3.1离心机不用时，拔下电源扦头；10.3.2 定期查看电机碳刷，当其长度小于6毫米时，必须及时更换；10.3.3 每月用湿布和酒精擦离心机腔；10.3.4 如果操作过程中出现液体不慎泄漏，立即用软布蘸10次氯酸钠反复清洗，然后再用75酒精擦拭。10.4 引用表格：（1）仪器设备维护保养登记表。Tab10.5 支持性文件：离心机使用说明书。11、临床标本采集及处理标准操作程序：11.1 目的：规*临床待检标本的正确

45、采集和处理。11.2 适用*围：基因扩增检验实验室的所有临床检测标本。11.3 操作程序：11.3.1 本实验室检验标本：血清或血浆、痰、11.3.2 血液标本：用真空采集管采集血液标本，病区标本由护士采集，门诊标本由检验科门诊抽血处专人采集，血标本采集后2小时内送达实验室（HCV采用EDTA抗凝血浆，所有抗凝剂严禁使用肝素，因肝素是Taq酶的强抑制剂。）如标本采血量不足，严重溶血、采样时间过长（特别是进行RNA检测时）或出现其它不合要求的问题，应拒收标本，并在拒收标本登记表上登记(1)。并告知相关科室。血液标本离心后用一次性吸管吸取血清或血浆加入已消毒的1.5ml的离心管中，用记号笔编号。化

46、验单，原始标本及离心管上的编号均应一致；11.3.3 痰标本：用带盖的无菌一次性塑料瓶收集清晨第一口痰标本送检，对于无痰或少痰患者，可用45加温的100g/L NaCL水溶液雾化吸入或改变体位使痰易于咳出。小儿可以轻压胸骨柄上方以诱导咳痰，用消毒棉拭子刺激喉部引起咳嗽反应等方法，用棉拭子采集痰标本。标本在室温下保存不能超过24小时。样本处理时，在样本中加入23倍体积的4NaOH溶液，旋转一小时使其充分液化，取液化后的标本1ml于无菌离心管中，13000rpm离心10min弃上清液，沉淀用生理盐水洗涤2次，弃上清，保留存淀。编号方式同上，置20保存待检。11.3.4 尿道或生殖道拭子：尿道或阴道

47、分泌物由医生用专用取样拭子（灭菌，一次性）采集标本，及时送检。采集生殖道标本要求病人在采样前2小时内不能排尿，采样时将棉拭子伸入男性尿道或女性宫颈口2-3cm，旋转一周以获取上皮细胞，将取样后的棉拭子放入含1ml无菌生理盐水离心管中漂洗片刻在管壁上挤干后丢弃拭子，13000rpm离心10min，弃上清，保留沉淀。编号方式同上，置20保存待检。11.3.5 尿液：由病人自留尿液于无菌封闭的杯中送检。取1ml于无菌离心管中，13000rpm离心10min，弃上清，保留沉淀。编号方式同上，置20保存待检；11.3.6 脑脊液和胸腹水：由临床医生采集后放入消毒的试管中及时送检。取1ml于无菌离心管中，

48、13000rpm离心10min，弃上清，保留沉淀。编号方式同上，置20保存待检。11.4 引用登记本：（1）标本拒收登记本：Reg12、临床标本的接收标准操作程序。12.1 目的：使临床检测标本符合要求，保证检测结果的准确性。12.2 适应*围：基因扩增检验实验室的所有临床检测标本。12.3 程序细则：12.3.1由PCR实验室派出专人负责标本的接收，并实行双签制度：送检者与接收者在标本可接收登记本上签名。(1)12.3.2标本的接收应独立于三个实验区之外的接收区进行，以避免因标本的接收而频繁出入样本制备区而造成的污染。12.3.3对于检验申请单填写不完整，检验单*与标本*不符，标本标识不清的应及时与临床联系退回并作记录。(2)12.3.4 标本在下述情况下被视为不合格，工作人员有权拒收： 使用不适当的容器； 容器有破损； 标本外泄污染； 标本溶血； 标本量不足； 室温下放置时间过长等。12.3.5 对于验收合格的标本，应立即分装并标记，如不能及时检测应将其分类保存至20冰箱。12.4 使用登记本：（1）标本可接收登记本：Reg