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1、百度文库-让每个人平等地提升自我亚麻籽中a亚麻酸含量的测定液相色谱法标准编制说明一、标准制定的背景及任务来源亚麻是我区的优势杂粮作物，亚麻籽中a -亚麻酸的含量很高。而a -亚麻酸是一种多不饱和脂肪酸，是一种必需脂肪酸，是一种生 命核心物质，是构成人体脑细胞和组织细胞的重要成分。a -亚麻酸 是人体自身不能合成的，也无法由其他营养来合成的，必须要依靠膳 食来获得。为筛选出亚麻优良品种以指导生产，实现亚麻籽中a-亚麻酸含量的准确检测，内蒙古农牧业科学院资源环境与检测技术研究所起草 并制定了“亚麻籽中a -亚麻酸的测定 液相色谱法”标准。二、本标准与国内现有分析方法的技术差异经过对国内关于a -亚
2、麻酸检测标准的调研发现，目前亚麻籽中a -亚麻酸含量测定多采用 GC或 GC-MSI,分析过程中柱温高使目标组分易产生异构现象，且需用到数种高制毒试剂。液相标准还属空白。三、标准编制概况以内蒙古农牧业科学院资源环境与检测技术研究所近年来对农 畜产品加工及农畜产品质量安全检测方法研究为基础，起草并拟订工 作计划，具体分以下几个阶段进行：1. 工作进度2012年上半年，主要通过实地调研及走访，掌握了亚麻品种及其种植范围的大概情况。查阅资料，完成相关资料的收集、整理和实施方案的确定工作。主要参考文献如下：(1) 亚麻籽的保健功能和开发利用J.中国油脂，2006,31 (3):71-74(2) 亚麻油
3、中a -亚麻酸含量的测定J.大理学院学报，2007,6(12):1-3(3) GB/T食品中脂肪的测定(4) GB/T 5512-2008粮油检验 粮食中粗脂肪含量的测定(5) GB 28404-2012食品安全国家标准 保健食品中a -亚麻酸、二 十碳五烯酸、二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的测定2012年下半年，基本确定试验品种范围，样品的采集和制备、试验设备准备及试剂耗材采购。并初步摸索亚麻籽中a-亚麻酸含量测定的实验条件。2013年上半年，以前一年初步摸索条件为基础，进行了改进优化，确定了标准方法，并以亚麻籽中a亚麻酸含量的测定液相色谱法征求意见稿为标准，测定了种植范围较广较常见的 16
4、个品 种亚麻籽中a 亚麻酸的含量。2013年下半年，选取了 “晋亚七号”、“轮选2号”两个品种与 自治区级实验室进行了比对试验，对结果进行了统计，对标准方法进 行了验证。2. 实验结果提取时间及石油醚用量确定结合资料，对同一亚麻籽的超声波震荡提取进行实验，最终确定提取两次，每次30分钟，分别加石油醚60mL与50mL表1提取时间试验（称取，每次加石油醚 100mL提取 时间15mi n1次30mi n1次45min1次60mi n1次15mi n2次30mi n2次45min2次60min2次得油重（g）RSD%表2石油醚加入量试验（称取，超声波提取 30min； 2次）第1次第2次得油重RS
5、D( %10010010075100501002580758050607560504075、40502025波长选择使用PDA检测器进行190 nm至300 nm扫描，发现最大吸收波长 为nm,如图1。但因实测样品的不同，有时会存在干扰且太接近远 紫外区，选择205 nm时目标组分响应基本不降低，且基线噪音明显 减少，故此选择205 nm。图1 a -亚麻酸190nm至300nm PDAB描光谱图流动相选择流动相只用甲醇和水，分离度不理想影响积分，调整水相为 磷 酸水溶液后，峰型尖锐对称分离度好。当流动相甲醇与 磷酸水溶液 比例为90+10时a -亚麻酸保留时间为 min，如图2;流动相比例9
6、5+5 时磷酸溶液保留时间min ,如图3。最终选择95+5,分离度好用时短。图2甲醇+%#酸水溶液=90+10 （上标品，下试样）0 TLi.O HD+ QC- DO图3甲醇+%#酸水溶液=90+10 （上标品，下试样）检出限表3北方地区种植面积较广的亚麻品种籽实油脂率名称称籽重（g）得油重（g）油脂率（%晋亚七号同亚12号陇亚八号轮-号轮三号轮选2号H10-19925-7-4-3-2： 99-42l067H08-22000-16Y0310H10-29301D-11-2-2-9910-4逐级稀释标准工作液，测定a -亚麻酸含量，得到仪器响应限值 为a g/mL （即2 ng）。从表3中大量实
7、验看到，大部分亚麻籽油脂率 均在40噓右，故此设定50 %油脂率为极限值，即称取亚麻籽可得油 （即公式1中的m2-mi）o故此根据公式计算得到方法检出限为 g/ioog。/ 计算公式：X C也Vi E miV2 m3 m 10X 样品中a -亚麻酸的含量，单位为克每百克（g/100g）C 样液中a -亚麻酸的检出浓度，单位为微克每毫升（卩g/mL）；赋值m 称取研磨好的亚麻籽重量，单位克（g）;赋值m 茄形瓶干重，单位克（g）m 经提取后茄形瓶与亚麻籽油脂的总重，单位克（g）m 称取亚麻籽油脂的重量，单位毫克（mg ；赋值Vi调至中性的定容体积，单位毫升（mL ;赋值V2调至中性定容后从中吸取
8、样液的体积，单位毫升（ mL ;赋值V3吸取样液后定容体积，单位毫升（mL ;赋值线性精密称取a -亚麻酸标准品，用甲醇定容至，得浓度为 mL的a - 亚麻酸标准品储备液，并用甲醇稀释至口 g/mL待用。以浓度口 g/mL 的标准品储备液为基础，用甲醇配置成a g/mL至卩g/mL不同浓度对 照品溶液，摇匀，分别进样10a L。得到曲线丫二x 104X+x 104，R =。 多次测定得到不同曲线，氏在至之间。图4 a -亚麻酸标准工作曲线精密度和回收率浓度为卩g/mL的a -亚麻酸标准工作溶液重复进样 7次，测得峰 面积，计算RSD为%制备晋亚七号亚麻籽平行样6份，分别进样10 卩L测得含量，
9、RSE为%精密称取亚麻籽油脂适量，准确加入 mL a -亚麻酸2mL测得平均回收率% RSD为% 实测值ug/mL平均值ug/mLRSD (%)表4卩g/mL重复7次检测量ug/mL油脂中含量g/100g籽实中含量g/i00g籽实中含量RSD (%)平均值一表5六份“晋亚七号”试样亚麻酸含量表6 “晋亚七号”加入mLa -亚麻酸称油重g检测量ug/mL实测含量g/100g理论添加量g/100g实测量g/100g回收率%ck +1+1+2+2+3+3回收率RSD( %四、标准编制原则为保证亚麻籽中a -亚麻酸的准确测定，确定优势品种的选择和后期的加工工艺，有效地指导种植，在制定本标准的过程中，汲
10、取国 内外同类相关先进的检测标准及编制的先进经验和方法，力求实事求 是的原则，使本标准具有较强的科学性、先进性。/ 在进行大量实验室研究的基础上， 参考国内相关资料，对亚麻籽 中a -亚麻酸的检测方法进行了大量试验摸索，确定了具体的、可操 作性好的、高效可靠的快速检测方法。五、采用国际标准本标准的编制、编写、调研完全依照国际标准尺度，并遵照GB/T要求进行撰写。五、与现行法律法规和强制性标准的关系本标准完全符合现行法律法规和强制性标准，不存在任何与现行法律法规和强制性标准相违背之处。六、重大分歧意见的处理经过和依据亚麻籽中a亚麻酸含量的测定液相色谱法目前在我区是一项空白，因此在编制“标准”中无重大的分歧意见。七、标准作为强制性或推荐性标准的意见本标准作为推荐性地方规范，发布实施后，对亚麻籽中a-亚麻酸含量的准确测定起到重要作用。极大的有利于亚麻的科学种植和优 势品种的选育，及其a -亚麻酸提取工艺的优化。八、贯彻标准的要求和措施建议本标准在经相关部门批准发布实施后，需要行政部门的监督执 行，保证“标准”制定的目的。“标准”在执行的过程中仍需要不断 的完善和健全。内蒙古自治区农牧业科学院资源环境与检测技术研究所 二O 一三年十二月10
内蒙古地方标准亚麻籽中亚麻酸的测定液相色谱法编制说明
