糖的呈色反应和还原糖的检验

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1、word实验1 糖的呈色反响和复原糖的检验一、实验目的1.学习鉴定糖类与区分酮糖和醛糖的方法。2.了解鉴定复原糖的方法与其原理。二、实验原理糖经浓无机酸处理，脱水产生糠醛或糠醛衍生物。戊糖形成糠醛，己糖如此形成羟甲基糠醛。这些糠醛和糖醛衍生物在浓无机酸作用下，能与酚类化合物缩合生成有色物质。与一元酚如一萘酚作用，形成三芳香环甲基有色物质。与多元酚如间苯二酚作用，如此形成氧杂蒽有色物质，反响式如下：通常使用的无机酸为硫酸。如用盐酸，如此必须加热。常用的酚类为一萘酚、甲基苯二酚、间苯二酚和间苯三酚等，有时也用芳香胺、胆酸、某些吲哚衍生物和一些嘧啶类化合物等。有人认为，用浓硫酸作为脱水剂时，形成有颜

2、色的产物与酚核的磺化有关，见如下反响式；一糖的呈色反响 1Molish反响(萘酚反响) 本实验是鉴定糖类最常用的颜色反响。糖在浓酸作用下形成的糠醛与其衍生物与一萘酚作用，形成红紫色复合物。在糖溶液与浓硫酸两液面间出现紫环，因此又称紫环反响。自由存在和结合存在的糖均呈阳性反响。此外，各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等皆呈颜色近似的阳性反响。因此，阴性反响证明没有糖类物质的存在；而阳性反响，如此说明有糖存在的可能性，需要进一步通过其他糖的定性试验才能确定有糖的存在。2蒽酮反响 糖经浓酸水解，脱水生成的糠醛与其衍生物与蒽酮(10一酮一9，10一二氢蒽)反响生成蓝一绿色复合物。3. Sel

3、iwanoff反响(间苯二酚反响) 该反响是鉴定酮糖的特殊反响。在酸作用下，己酮糖脱水生成羟甲基糠醛。后者与间苯二酚结合生成鲜红色的化合物，反响迅速，仅需2030s。在同样条件下，醛糖形成羟甲基糠醛较慢。只有糖浓度较高时或需要较长时间的煮沸，才给出微弱的阳性反响。蔗糖被盐酸水解生成的果糖也能给出阳性反响。4Bial反响(甲基间苯二酚反响) 戊糖与浓盐酸加热形成糠醛，在有Fe3+存在下，它与甲基间苯二酚(地衣酚)缩合，形成深蓝色的沉淀物。此沉淀物溶于正丁醇。己糖也能发生反响，但产生灰绿色甚至棕色的沉淀物。二复原糖的鉴定含有自由醛基(一CHO)或酮基(C=O)的单糖和二糖为复原糖。在碱性溶液中，复

4、原糖能将金属离子(铜、铋、汞、银等)复原，糖本身被氧化成酸类化合物，此性质常用于检验糖的复原性，并且常成为测定复原糖含量的各种方法的依据。1Fehling反响 费林试剂是含有硫酸铜与酒石酸钾钠的氢氧化钠溶液。硫酸铜与碱溶液混合加热，如此生成黑色的氧化铜沉淀。假如同时有复原糖存在，如此产生黄色或砖红色的氧化亚铜沉淀。上述反响可用如下方程式表示：在碱性条件下，糖不仅发生烯醇化、异构化等作用。也能发生糖分子的分解、氧化、复原或多聚作用等。由这些作用所形成的复杂混合物具有强烈的复原作用，因此企图用简单的氧化复原作用来写出反响平衡式是不可能的。为了防止铜离子和碱反响生成氢氧化铜或碱性碳酸铜沉淀，Fehl

5、ing试剂中参加酒石酸钾钠，它与Cu2+形成的酒石酸钾钠络合铜离子是可溶性的络离子，该反响是可逆的。平衡后溶液内保持一定浓度的氢氧化铜。费林试剂是一种弱的氧化剂，它不与酮和芳香醛发生反响。 2. Benedict反响Benedict试剂是Fehling试剂的改良。它利用柠檬酸作为Cu2+的络合剂，其碱性比Fehling试剂弱，灵敏度高，干扰因素少，因而在实际应用中有更多的优点。3Barfoed反响 该反响的特点是在酸性条件下进展复原作用。在酸性溶液中，单糖和复原二糖的复原速度有明显差异。单糖在3min内就能复原Cu2+而复原二糖如此需20min。所以，该反响可用于区别单糖和复原二糖。当加热时间

6、过长，非复原性二糖被水解也能呈现阳性反响，如蔗糖在10 min内水解而发生反响。复原二糖浓度过高时，也会很快呈现阳性反响，假如样品中含有少量氯化钠也会干扰此反响。三、实验试剂和材料仪器2阿拉伯糖，葡萄糖，果糖，麦芽糖，蔗糖，1淀粉溶液和2种未知糖液。Molish 氏试剂称取萘酚2克，溶于95乙醇中并定容到100ml。注意临用前，新鲜配制，贮于棕色瓶中。蒽酮(Anthrone)试剂 溶解0.2g蒽酮于100mL浓硫酸(A.R，比重1.84，含量95%)中。当日配制、使用。Fehling氏试剂 试剂A：将34.5g硫酸铜(CuSO45H20)溶于500mI。蒸馏水中。 试剂B：将125g氢氧化钠和

7、137g酒石酸钾钠溶于500mL蒸馏水中，储于带橡皮塞瓶中。临用时，将试剂A和B等量混合。Benedict氏试剂 溶解85g柠檬酸钠(Na3C6HO，llH20)与50g无水碳酸钠于400mI。水中；另溶8.5g硫酸铜于50mL。热水中。将硫酸铜溶液缓缓倾人柠檬酸钠一碳酸钠溶液中，边加边搅，如有沉淀，可过滤本试剂可长期使用。如放置过久，出现沉淀可取用其上清液。Bial氏试剂 溶解1.5g地衣酚(orcin01)于500mL，浓盐酸并加2030滴10三氯化铁溶液。Seliwanoff氏试剂 溶解50mg问苯二酚(resorcin01)于100rnl，盐酸(盐酸：水=1:2VV)中。临用前配制。盐

8、酸浓度不宜超过12，否如此，它将导致糖形成糠醛或其衍生物。浓硫酸。试管，试管架，煤气灯和沸水浴等。四、实验方法一.糖的呈色反响1Molish反响取8支已标号的试管，分别参加各种测试糖液lmL(约15滴)，再各参加Molish试剂2滴，摇匀。逐一将试管倾斜，分别沿管壁慢慢参加浓硫酸l mL，然后，小心竖直试管，使糖液和硫酸清楚地分为两层，观察交界处颜色变化。如几分钟内无呈色反响，可在热水浴中温热几分钟。记录各管出现的颜色，说明原因，检定未知糖液。2蒽酮反响取8支标号的试管，分别参加lmL蒽酮溶液，再将测试糖液分别滴加到各试管内，混匀，观察颜色变化，鉴定未知糖液。3Seliwanoff反响取试管8

9、支，编号，各加人Seliwanoff试剂ImL。再依次分别参加测试糖液各4滴，混匀，同时放人沸水浴中，比拟各管颜色变化与出现颜色的先后顺序，分析说明原因。注意蔗糖的反响。 4. bial反响将2滴测试糖液加到装有1ml Bial试剂的试管中,沸水浴中加热,观察颜色变化.如遇到未知糖呈色不明显,可以3倍体积水稀释,并参加1ml戊醇,摇动,醇液呈蓝色,即为阳性反响。二复原糖的鉴定1Fehling反响 取8支试管，各加Fehling试剂A和B各lmL。摇匀后，分别加人测试糖液各4滴，沸水浴煮23min，取出冷却，观察沉淀和颜色的变化。2. Benedict反响于8支试管中先各参加Benedict试剂

10、2ml,再分别参加测试糖各4滴,沸水浴中煮2-3min,冷却后,观察颜色变化.分别参加测试糖液2-3滴到含有1ml Barfoed试剂的试管中,煮沸约3min,放置20min以上,比拟各管颜色变化与红色出现的先后顺序.五、须知事项1. Molisch反响非常灵敏，0001葡萄糖和00001蔗糖即能呈现阳性反响。因此，不可使碎纸屑或滤纸毛混入样品中。过浓的果糖溶液，由于硫酸对它的焦化作用，将呈现红色与褐色而不呈紫色。需稀释糖溶液后重做。2.果糖在Seliwanoff。试剂中反响十分迅速，呈鲜红色，而葡萄糖所需时间长，且只能产生黄色至淡红色。戊糖亦与Seliwanoff试剂反响，戊糖经酸脱水生成糠

11、醛，与间苯二酚缩合。生成绿色到蓝色产物。3.酮根本身并没有复原性，只有在变为烯醇式后，才显示复原作用。4.糖的复原作用生成氧化亚铜沉淀的颜色决定于颗粒的大小，Cu2O颗粒的大小又决定于反响速度。反响速度快时，生成的Cu2O颗粒较小，呈黄绿色；反响慢时，生成的Cu2O颗粒较大，呈红色。有保护胶体存在时，常生成黄色沉淀。实际生成的沉淀含有大小不同的Cu2O颗粒，因而每次观察到颜色可能略有不同。溶液中复原糖的浓度可以从生成沉淀的多少来估计，而不能依据沉淀的颜色来区别。2O沉淀聚集在试管底部，溶液仍为深蓝色。应注意观察试管底部红色的出现，它与一般复原性实验不一样，观察不到反响液由蓝色变绿变黄或变红的过程。六、思考题 1列表总结和比拟本实验7种颜色反响的原理与其应用。 2应用Molish反响和Seliwanoff反响分析未知样品时，应注意些什么问题? 3举例说明哪些糖属于复原糖。 4运用本实验的方法，设计一个鉴定未知糖的方案。5牛乳中含有5双糖。如何证明牛乳中有双糖存在?这种双糖是什么糖?请选用一些颜色反响来加以鉴定。 6 / 6